微生物的接种与培养实验现象

实验七 微生物的接种与培养

一、实验教学目的与要求

目的：1、掌握各种微生物接种的基本操作技术。

内容：1、斜面接种。

2、液体接种。

3、穿刺接种。

4、平板接种。

二、实验原理

将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基上，这个过程就称为接种。

三、实验材料及用具

1.仪器及用具

斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒。

四、操作步骤

（一）斜面接种：

从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物的接种。 左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。

图1. 斜面接种示意图

（二）液体接种：

由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。

（三）穿刺接种：

用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿

课题1: 微生物的实验室培养（导学案）

高二生物组

目标导引

1、通过学习知道培养基的种类、营养要素及如何配制培养基 2、通过学习知道消毒灭菌的原理和方法

3、通过学习你将知道如何用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养

问题导学

一、培养基:阅读课本培养基的相关内容，完成下列问题：

（1）培养基分为哪两类？二者的区别？培养基有何用途？

（2）不同的微生物所需要的培养基配方相同吗？培养基的基本成分（主要营养物质）有哪些？为什

么大多数培养基都需要具备这些基本成分？

（3）培养基除能为微生物生长提供几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物生长的哪些要求？

（4）你知道牛肉膏、蛋白胨可以为微生物的生长提供哪些营养物质吗？

二、无菌技术：阅读无菌技术的相关内容，完成下列问题：

（1）获得纯净培养物的关键是什么？无菌技术围绕什么而展开？主要包括哪几个方面？

（2）什么是消毒与灭菌？二者的区别？实验室常用的消毒方法、灭菌方法有哪些？分别适用于那些用具？

（3）利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？

（4）请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。

①培养细菌用的培养基与培

探究性实验一 微生物的培养与应用

课题1、 课题 、

微生物实验室培养

1.培养基概念、培养基的分类、特点和用途 培养基概念、培养基的分类、 培养基概念 2. 培养基的配制原则和营养构成 3.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 . 4.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 . 5.对位训练 .

课题1、 课题 、 微生物实验室培养 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 1.培养基概念： 出供其生长繁殖的营养基质。划分 标准 物理 性质 特点 培养基种类 液体培养基 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 半固体培养基 培养基 化学 成分 成培养基 含化学成分不明 的 物质 培养基成分明 培养基 加 种化 学物质， 制不需 的微生物的生长， 需 的的生长 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 工业生产 分类、鉴定 培养、分离出特定微生物(如培养 菌和 菌， 培养基 加 培养 菌， 培养基 ) 不加凝固剂 用途 工业生产 观察微生物的运动、分类、鉴定

用 培养基 途

加

鉴

培养基

微生物的 特 鉴 点， 培养基 加 种 剂 化学 品

不同种类的微生物，如 用 — 培养基鉴 用 制品 菌( ,菌 呈 ， )

2.培养基的配制原则和营养构成 培养基的配制原则和营养构成(

探究性实验一 微生物的培养与应用

课题1、 课题 、

微生物实验室培养

1.培养基概念、培养基的分类、特点和用途 培养基概念、培养基的分类、 培养基概念 2. 培养基的配制原则和营养构成 3.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 . 4.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 . 5.对位训练 .

课题1、 课题 、 微生物实验室培养 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 1.培养基概念： 出供其生长繁殖的营养基质。划分 标准 物理 性质 特点 培养基种类 液体培养基 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 半固体培养基 培养基 化学 成分 成培养基 含化学成分不明 的 物质 培养基成分明 培养基 加 种化 学物质， 制不需 的微生物的生长， 需 的的生长 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 工业生产 分类、鉴定 培养、分离出特定微生物(如培养 菌和 菌， 培养基 加 培养 菌， 培养基 ) 不加凝固剂 用途 工业生产 观察微生物的运动、分类、鉴定

用 培养基 途

加

鉴

培养基

微生物的 特 鉴 点， 培养基 加 种 剂 化学 品

不同种类的微生物，如 用 — 培养基鉴 用 制品 菌( ,菌 呈 ， )

2.培养基的配制原则和营养构成 培养基的配制原则和营养构成(

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品

情境一：分离纯化和选育生产菌种 发酵工艺技术教材

项目2 保藏微生物菌种操作

◆ 学习目标 1.了解各种菌种保藏的基本原理和优缺点； 2.学会根据菌种的特点选择相应的保藏方法；学会采用不同方法进行保藏菌种操作。 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 当然保藏菌种使其不变异亦是相对而言的。实际上没有一种方法可使菌种绝对不变化，所以研究菌种保藏就是要采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。

菌种是国家的重要资源，世界各国对这项资源都给予极大重视，很早就设臵了各种专业性的保存机构，如ATCC、NRRL等。1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。 1 基础知识

菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通

实验二 理化因子对微生物的影响

实验目的：

1 了解紫外线对微生物生长的影响。 2 了解不同化学物质对微生物生长的影响。 3 了解理化因素抑制或杀死微生物的试验方法。 实验原理：

1 紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线波长是200-310nm，而以260nm左右的紫外线具有最高杀菌效应。作用机理是诱导胸腺嘧啶二聚体的生成，从而抑制DNA的复制。经紫外线照射受损伤的细菌细胞，如立即暴露于可见光下，则有一部分可恢复正常活力，称为光复活现象。

2 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用，因此，在实验室内及生产上常利用某些有效的化学药剂进行杀菌或消毒。不同的化学药剂对不同的细菌，杀菌能力并不相同，而一种化学药剂对不同细菌的杀菌效果也不一致。 实验材料：

1 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。 2 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3 器材与试剂：滤纸、镊子、培养皿、涂棒、试管支。 75%乙醇、 1%结晶紫、 0.2mg/L青霉素、 0.1%KMnO4、 实验方法： 一 紫外线杀菌实验

1 将已灭菌冷却到50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿中，水平放置待凝固。

2 用无菌吸管吸取0.1ml培养24h的枯草芽孢杆菌菌液加入上述平板

实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌

1． 在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出( )

A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 B．固氮细菌、大肠杆菌、放线菌 C．固氮细菌、霉菌、放线菌

D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 2． 下列关于配制培养基的叙述，正确的是( ) A．制作固体培养基必须加入琼脂 B．加入青霉素可得到放线菌 C．培养自生固氮菌时不需要氮源 D．发酵工程一般用半固体培养基

3． 下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ） A．含碳有机物 B．蛋白胨

C．含碳无机物 D．石油、花生粉饼等天然物质

4． 利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是（ ）

A．培养基制备过程中被杂菌污染 B．接种过程中，无菌操作不符合要求 C．系列稀释时，无菌操作不符合要求 D．由大肠杆菌的种类不同造成的

5． 大肠杆菌能够在哪种培养基上生长繁殖（ ） A．无氮培养基

B．分解尿素的细菌的选择培养基 C．纤维素分解

本科毕业论文

BACHELOR DISSERTATION

论文题目： 甲醇降解微生物的筛选与培养 学位类别： 工学学士 学科专业： 生物工程 作者姓名： 作者学号： 导师姓名： 完成时间：

生物工程专业毕业论文

目录

目录 ................................................................................................................................... I 摘要 ................

微生物实验问题与答案

一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察 1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？

答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。

2、数值口径的表达公式？

答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。 3、显微镜数值口径与分辨力的关系？

答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它与光的波长成反比，与数值口径成正比。

4、油镜的使用与普通物镜有何不同？

答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物镜则不需要；油镜是由100×物镜与香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。 5、使用油镜时应特别注意什么？

答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。

6、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？

答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同