甘油管保藏菌种怎么活化

菌种甘油管保藏法

材料：

丙三醇（分析纯AR）、离心管（50ml尖平底）、移液管、医用胶布（1*1000cm）、菌种、超纯水

方法：

1提前培养要保存的菌种生长至对数生长期。

2配制30%的丙三醇，分装与离心管（3/2）左右，121摄氏度高压灭菌20min，常温保存，一般现用现配。

3将保藏的菌种接种于甘油管，放置冰箱保存。

4.再次使用前取出融化后接种到培养基上即可。

注：甘油保藏一般零下25度一到两年，80度二到三年左右。

菌种活化步骤

日期：2007-6-26 18:31:28 点击次数 2519 发布单位：EM 录入：李清

一、安瓿瓶装微生物菌种开封

1-1、用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿瓶。 1-2、用火焰将安瓿瓶口加热灭菌。 1-3、用镊子将铝封口撕开。

二、菌株恢复培养

2-1、用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振 荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。

2-2、取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下培养。

三、注意事项

3-1、菌种活化前，请将安瓿瓶保存在5-10℃的环境下。

3-2、厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充 填，以保持厌氧状态。

3-3、某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能 正常生长。

四、制作ＥＭ菌液

4-1、菌种活化:用ＥＭ菌种10克、红糖0.1公斤（红糖先用热水溶化），加入1公斤的水。注：（先把水加热到100°C后加入红塘或白糖，而后继续加热5分钟。冷却到40°C时加入ＥＭ菌种），密闭发酵(35°C-40°C温度)下活化3天，打

严格厌氧菌菌种保藏方法

发表人：吴小月，发布时间：10-01-11 以下为本实验严格厌氧细菌的保藏方法，如果是兼性厌氧菌可参照好氧菌保藏方法保藏。 一、厌氧细菌的甘油保藏方法：

1、 厌氧甘油的制备： 厌氧瓶或厌氧管中放置一定量的甘油，甘油的量根据需要加入，不

要多加，因为厌氧甘油制备好以后不能反复灭菌，反复灭菌甘油会变性而呈黄色，且有一股芳香味道。加入终浓度为0.04 %的 L-cysteine和 1 %的5 %的 N2S母液。往厌氧瓶中通N2，通气时间和配制培养基时时间相同。盖上塞子和盖子。121 ℃， 20 min 灭菌后备用。

2、 取新鲜菌液（对数期），在通N2 的情况下，用针筒和针头往有菌液的厌氧管中加入终

浓度为15-20 %的厌氧甘油，再通一会N2，目的是赶走在转移甘油过程中带进去的O2。盖上塞子和盖子，混匀，冻于-80 ℃。

3、 活化：用针头和针头吸取一定甘油保藏的菌液，加到培养基当中，加的量一般要多于1 %，

因为厌氧菌的生物量比较小，一般2到5 %左右。目测加完甘油菌液的培养基是否浑浊，并作记录。如果加入的菌液太多，造成一开始培养基就比较浑浊，会干扰我们对菌是否生长的判断，而且甘油太多也会抑制菌的生长。

二、厌氧细

菌种保藏管理制度

菌种保藏管理制度

1 目的 建立菌种保藏管理制度，明确菌种保藏的条件，确保菌种质量。

2 适用范围 适用于苗种保藏管理。

3 责任者 QC负责人、菌种管理人员。

4 管理内容

4．1 菌种应由专人保藏管理，保证检验、科研交换和使用，并确保安全。

4．2 建立菌种登记台帐制度，记录所保藏菌种的名称、来源、编号、标准菌号、购进数量、剩余数量及保藏方法。

4．3 对购进的标准菌种，开启分离后进行菌种保藏，以及其他须保藏的菌种应填写菌种保藏登记卡，记录菌种名称、编号、标准菌号、来源及购进时间。菌种用液体石蜡法保藏1年（特殊菌种除外），工作用菌种用琼脂斜面低温保藏法。

4．4 工作用菌种每2～3月传代一次，6个月分离一次，传代、分离时间应记录。每年对用液体石蜡保藏的菌种检查存活情况，种株纯度及有关特性，记入登记卡。保留3年菌种传代、、分离、保藏记录（一般菌种传代不超过10代）。

4．5 废弃的菌种须经消毒灭菌处理（121℃30min）方可洗涤，严防污染。

4．6 各菌种保藏选择最适培养基，并严格按配方配制，不得任意更改。

4．7 外单位在我公司购买工作用菌种，须出示单位证明，并保证卖出菌种存根。

菌种保藏管理制度

木制品控制程序

福建省XX食品有限公司

1 目

很全面

第八节 菌种的衰退、复壮和保藏

很全面

性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本 要求，否则生产或科研都无法正常进行。

影响微生物菌种稳定性的因素：a)变异； b)污染；

c)死亡.

很全面

一、菌种的衰退(degenration)1. 衰退的表现1)原有形态形状变得不典型； 2)生长速度变慢； 3)代谢产物生产能力下降； 4)致病菌对宿主侵袭力下降； 5)对外界不良环境的抵抗力下降。

很全面

2. 衰退的原因1)根本原因在于基因自发突变； 2)传代次数的影响，使负突变株的比例逐渐占 了优势； 3)与培养条件有关。

衰退是发生在微生物细胞群体中的一 个由量变到质变的逐步演变的过程。

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二、衰退的防止与复壮(一)防止衰退的措施1. 减少传代次数； 2. 创造良好的培养条件；

p228

3. 利用不易衰退的细胞传代

4. 采用有效的菌种保藏方法；

很全面

(二)菌种的复壮(rejuvenation)1. 从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有 原有典型性状的菌种(狭义复壮，消极措施)。 a)纯种分离;

b)通过寄主体进行复壮； 2. 有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种 维护工作中不断筛选“正变”个体(广义复壮，积极措施) 。

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纯种的分

用酱糟混合发酵加色素。

,

既可提高质量

,

又可以增,

豆

、

以及成品日晒夜露等。

,

都能达封增加

色素的目的比苑

关于增加酱油色素的办法还有多种如小麦的焙炒,

方面标准

,

不过我们只要抓好以上几个就能做到在酱油质量上既要贯彻那颁,

使用部份杂粮

葫豆

、

,

又满足群众的习惯需要

。

谈谈菌种的退化和保藏魏建铭福建南平市苦油厂

要使酱油生产达到稳定目的

,

除有一条

上硷基的第六位碳原子上是氮基可简单写成二。

,

相对的另。

合理的工艺操作规程外

,

还必需有优良的菌

一条链上硷基的第六位碳原子一定是酮基…一二。

种

。

因此

,

经常性地对生产菌种进行选育和。

复壮是一重要手段氧核糖孩酸

一一一一数量一、

一

一,

一一

…………

微生物的主要遗传物质基础是

脱

二

。

一、

一一一。

它是以半保留的自我复制方式,

基因突变就是基因结构的改变昔酸种类突变就是录、

它表现在核

将自身性状传给子代

在遗传过程中由于外。

顺序的改变

基因的自发,

界条件和内在环境等因素将产生变异

变异

在自我复制过程中。

由于转,

有正向突变与负向突变异的菌株朝原养型发展退和生长势的下降。

。

正向突变为变异菌负向突变为变表现在性能上的衰

转译等错误造成硷基不能正常配对,

使

株的性能比原菌株更加优良,

核昔酸数目产生增减或改变劣时如高温,、

当外界条件恶。

幅射

、

振荡等引起基因结构

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第八节 菌种的衰退、复壮和保藏

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性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本 要求，否则生产或科研都无法正常进行。

影响微生物菌种稳定性的因素：a)变异； b)污染；

c)死亡.

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一、菌种的衰退(degenration)1. 衰退的表现1)原有形态形状变得不典型； 2)生长速度变慢； 3)代谢产物生产能力下降； 4)致病菌对宿主侵袭力下降； 5)对外界不良环境的抵抗力下降。

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2. 衰退的原因1)根本原因在于基因自发突变； 2)传代次数的影响，使负突变株的比例逐渐占 了优势； 3)与培养条件有关。

衰退是发生在微生物细胞群体中的一 个由量变到质变的逐步演变的过程。

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二、衰退的防止与复壮(一)防止衰退的措施1. 减少传代次数； 2. 创造良好的培养条件；

p228

3. 利用不易衰退的细胞传代

4. 采用有效的菌种保藏方法；

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(二)菌种的复壮(rejuvenation)1. 从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有 原有典型性状的菌种(狭义复壮，消极措施)。 a)纯种分离;

b)通过寄主体进行复壮； 2. 有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种 维护工作中不断筛选“正变”个体(广义复壮，积极措施) 。

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纯种的分

生产菌种的扩大培养与保藏

目前工业规模的发酵罐容积已达到几十立方米或几百立方米。如按百分之十左右的种子量计算，就要投入几立方米或几十立方米的种子。要从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。其生产方法与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。如细菌、酵母菌、放线菌或霉菌生长的快慢；产孢子能力的大小；及对营养、温度、需氧等条件的要求均有所不同。因此，种子扩大培养应根据菌种的生理特性，选择合适的培养条件来获得代谢旺盛、数量足够的种子。这种种子接入发酵罐后，将使发酵生产周期缩短，设备利用率提高。种子液质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。

种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。

发酵工业生产过程中的种子的必须满足以下条件：

（1）菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短； （2）生理形状稳定；

（3）菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求； （4）无杂菌污染；

（5）保持稳定的生产能力。

第一节 种子的制备过程

在发酵生产过程中，种子

菌种保存与活化 （一）培养基保存法

利用各种斜面和半固体培养基，加上石蜡油保存菌种，是一种最常用而又简易的保存方法。 1.普通琼脂斜面保存法：肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏汤，以防干涸。经35℃培养18～24h后，移种于4℃冰箱中，一般可保存一个月，

每月传代一次。

2.血液琼脂斜面保存法：链球菌、肺炎链球菌应接种于血液琼脂斜面上，35℃培养生长后，置4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球菌的新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐

延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次。

3.巧克力色斜面保存法：宜保存脑膜炎奈瑟菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。 4.鸡蛋斜面保存法：适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌，一般可保存一个月。 5.半固体穿刺保存法：将细菌接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内，经35℃培养18～24h，再以

无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm，置4℃冰箱保存。保存时间可达3～6个月。

（二）干燥保存法

原理是将细菌体内的水分蒸发掉，使其处于休眠和代谢停滞状态，从而达到长期保存菌种的目

食用菌的菌种保藏

维普资讯

食用菌学报

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文章编号：0 5—9 7 ( 0 3 0 10 8 3 2 0 ) 4—0 5 0 2—0 3

不同菌种保藏方法对香菇产量的影响蔡令仪，谭琦，曹晖，郭立刚，汪昭月，尚晓东，汪虹(业部食用菌遗传育种重点开放实验室：农 上海市农业遗传育种重点开放实验室；上海市农科院食用菌研究所，海 2 1 0 )上 0 1 6摘要：别采用液氮和 4分℃冰箱保藏香菇 ( et“ae o e)种，通过栽培试验比较了 L ni l dd s菌 n并

二种保藏方法对香菇产量的影响。关键词：种保藏；香菇；液氮保藏；箱保藏菌冰中图分类号：￥ 4 .9; 6 6 10 9 6 6 0 3￥ 4 .2 .文献标识码： A

食用菌资源是我国丰富的自然资源宝库中的一个重要组成部分。随着生物学技术的不断发展，种质资源的利用对生命科学的研究起着越来越重要的作用，对食用菌菌种保藏技术也提出了越来越高的要求…。在菌种保藏过程中，不仅要保证菌种成活，主要的是要保证菌种的更

遗传性状不发生或尽可能少发生变异。由于缺乏妥善的保藏方法，多经多年辛勤研究获】许得的优良菌株失去了