免疫共沉淀技术
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免疫共沉淀
免疫共沉淀 from WHU SKY
1用细胞刮子收细胞,3000rpm,5min,离心,去上清;或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温,冰上或4度冰箱或4度离心机。
2 PBS清洗,重复步骤1
3选择合适的bufer裂解细胞,现加1000XAL(一般核质均分布的建议使用NP-40,核内分布的建议使用High Salt ,只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer),加入1ml Buffer (106-107个细胞),4℃,30min(在功能旋转仪上旋转裂解)。 4 12000rpm,15min,离心取上清(若上清仍浑浊,可重复离心1-2次)50ul上清作为 Input,其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug(可根据抗体效价酌情增减),4℃,旋转2-4h,
加抗体时要计算使用相同抗体的样品数,取(N+1~2)*1ug,用小量裂解buffer
稀释,再均分到各样品中,以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间,准备Protein G(一个反应20ul纯beads,如果beads原管中液体和beads体积比是1:1,一个样品取总体积40ul,多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物)
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
免疫分析检测技术检测方法
免疫分析检测技术
原理:
基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析方法,通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素标记等),利用标记物的信号放大作用,与现代测试技术相结合,对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点:
1) 特异性强、灵敏度高
2) 方法便捷、分析容量大、检测成本低
3) 可提供系列化的产品以及技术,产品可以商业化。
1. 免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、荧光免疫分析法(FIA)等,并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中,RIA占了很大比重,但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问题,应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法(ELISA)按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体(抗原)同时与一种抗原(抗体)竞争结合的情况,而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法,而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000,不具备免疫原性,以此制备的抗体,进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。
免疫分析检测技术检测方法
免疫分析检测技术
原理:
基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析方法,通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素标记等),利用标记物的信号放大作用,与现代测试技术相结合,对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点:
1) 特异性强、灵敏度高
2) 方法便捷、分析容量大、检测成本低
3) 可提供系列化的产品以及技术,产品可以商业化。
1. 免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、荧光免疫分析法(FIA)等,并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中,RIA占了很大比重,但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问题,应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法(ELISA)按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体(抗原)同时与一种抗原(抗体)竞争结合的情况,而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法,而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000,不具备免疫原性,以此制备的抗体,进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。
化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析陈仓医院检验科:
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念化学发光免疫技术:化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与 待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或
定性检测。
化学发光免疫分析 (Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它 具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污
染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者,是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛,已占各种免疫 分析的首位,是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。
是目前世界公认先进的标记免疫测定技术,化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性,成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机
沉淀平衡
习题 6(沉淀平衡一)
1.解释下列现象。
a. CaF2在 pH=3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大;
b. Ag2CrO4在0.0010 mol·L1AgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L1 K2CrO4溶液中
--
的溶解度小;(参考答案) 答:
a. 这是由于酸效应的影响。因为
,随着[H]的增大,
+
也增大,
也随之增大,即溶解度变大。所以,CaF2在 pH=3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大。
b. Ag2CrO4的pKsp=11.71
Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度s1:
-1
-1
Ag2CrO4在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度s2:
-1
-1
所以, s1< s2,即Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度小。
2.某人计算M(OH)3沉淀在水中的溶解度时,不分析情况,即用公式Ksp==[ M3+][ OH]3计算,
-
已知Ksp=1×1032,求得溶解度为4.4×109 mol·L1。试问这种计算方法有无错误?为什么?
---
(参考答案) 答: 错误。
因为按此方法求得[OH-]=4×10 mol·L,即p
应用同向流斜板沉淀技术回收造纸白水
“全国造纸行业节约用水与污水治理”研讨会论文榘
应用同向流斜板沉淀技术回收造纸白水
马厚悦
华泰集团有限公司赵树明山东广饶257335
华泰集团是以造纸为主,集化工、印刷、热电、育林、商贸服务于一体的国家大型企业集团,是国家520户重点企业、山东省重点调度的24家大型骨干企业之一。公司建设有全国造纸行业首批博士后科研工作站、国家级认定企业技术开发中心;通过了2000版IS09001国际质量体系认证、IS014001国际环境体系认证;“华泰股份”是山东省造纸行业第一家A股上市企业;“华泰”商标是国内造纸行业第一个“中国驰名商标”。先后荣获“全国守合同重信用企业”、“国家级重点高新技术企业”、“山东省管理创新优秀企业”、“山东省国税纳税百强企业”等150多项省级以上荣誉称号。
华泰集团立足持续发展,建设绿色生态纸业,始终将污染治理视作企业的“生命工程”。自“九五”以来,先后投资3.5亿多元陆续增上了lOOt/d、160t/d碱回收和40000m3/d、60000m3/d中段水处理项目,实现了全过程对蒸煮黑液和造纸废水的综合治理,使公司外排水质达到了国家规定的二级排放标准。其中碱回收项目开创了我国草浆碱回收成功投运的先例,被国家经贸委、国家环保局等五部门确定
第9章 沉淀平衡和沉淀滴定法
无机及分析化学
塔里木大学化学与化工系
第9章
沉淀平衡和沉淀滴定法
Chapter 9 Precipitation-dissolution equilibrium and Precipitation Titration
本章内容§9.1§9.2
溶度积和溶解度沉淀-溶解平衡的移动
§9.3§9.4
影响沉淀溶解度的因素影响沉淀纯度的因素
§9.5§9.6
沉淀的形成条件沉淀分析法
§9.1 溶度积和溶解度实验现象:
实验步骤:
几滴 KI溶液
在上层清液中滴 加KI溶液后,有 黄色沉淀产生。
静置,待上层 液体变澄清
结论解释:PbI2(s) Pb2+(aq) + 2I-(aq)
将少量的 PbI2固 体加入装有适量水 的试管中,震荡。
PbI2
PbI2在水中溶解平衡
Pb2+ l-
尽管PbI2固体难溶于水, 但仍有部分Pb2+和I-离开 固体表面进入溶液,同时 进入溶液的Pb2+和I-又会 在固体表面沉淀下来,当 这两个过程速率相等时, Pb2+和I-的沉淀与PbI2固 体的溶解达到平衡状态即 达到沉淀溶解平衡状 态.PbI2固体在水中的沉 淀溶解平衡可表示为:
溶解
PbI2(s)沉淀
Pb2+(aq) + 2
自由沉淀实验
实验一 自由沉淀实验(累积沉泥量法)
一、实验目的
本实验采用测定沉淀柱底部不同历时累计沉泥量方法,找出去除率与沉速的关系。通过本实验希望达到下述目的:
1.初步了解用累计沉泥量方法计算颗粒物杂质去除率的原理和基本实验方法。 2.加深理解沉淀的基本概念和颗粒物的沉降规律。
二、实验原理
累计沉泥量测定法的具体计算分析如下: 假定沉降颗粒具有同一形状和密度,由此得出两个关系式:
颗粒沉速us与颗粒重量m的函数关系式:
m??(us)m?au?Sb1??u1??S颗粒沉速us与颗粒数目n的函数关系式:
n??(us)n?式中,a,b,?,?是系数,与颗粒形状、密度,水的粘滞性等因素有关,其中
?,?大于1。
由以上二式可得出水样中原始悬浮物浓度C0:【重量g,数目n/mL,浓度=m×n(g/mL)】
ab????1umax0????1水中等于、大于沉速uS,的颗粒浓度为C?us:
umaxabab??????1????1???1C?us??abu?du?(u?u)?C?u?ssmaxs0sus????1????1ab?A, 令 ????1?B则:
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