生化实验转氨基作用实验报告

一 蛋白质提取、纯化及分析技术

实验一 多酚氧化酶（PPO）的分离提取

一、材料与试剂

（1）马铃薯（大约每小组200-300g） （2）试剂：

0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02m巯基乙醇，0.001m EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02m巯基乙醇，0.001m EDTA，0.005m MgCL2）配置时配。 （3）实验器械与仪器设备：

试管与试管架；烧杯、玻璃搅棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆器；PH计和PH试纸；GL-20C高速冷冻离心机； DL-7A大容量低速冷冻离心机 二、操作步骤

1：粗酶提取：

马铃薯组织按1：1（W/V）比例与0.03m磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001m EDTA，5%甘油，1%聚乙烯吡咯烷酮）混合，匀浆4层后纱布过滤，滤液以6000rpm离心10min，弃除沉淀获得酶提取液。 2：盐析分级沉淀：

在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），然后6000rpm离心20min弃除沉淀；离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和

生化实验报告

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实验一 多酚氧化酶（PPO）的分离与提取

一、实验目的

1、本实验以马铃薯为主要的实验材料，通过细胞组织破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。

2、通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关仪器设备的操作使用，以及蛋白质的提取、分离的系统技术。

二、实验原理

多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶，位于质体、微体内，参与植物抗体的调节，属于末端氧化酶的一种。在植物体受到机械损伤和病毒感染后，PPO催化酚与氧氧化成醌，使组织形成褐变，对PPO弄得的测定便是通过PPO氧化酚产生醌的变色反应测定其酶活性。

在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐，如硫酸铵、氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。这种现象称为盐溶；而在蛋白质水溶液中继续加入无机盐类可以其溶解度降低而析出的过程，该现象称为盐析。蛋白本身随盐浓度的溶解度变化曲线具有特征性，可以依据此分离蛋白，硫酸铵分级便依据此原理，首先在蛋白质溶解度最高时，离心取上清，去除此时未溶解或已经沉淀的杂蛋白，之后再其溶解度最低且未变性的时候离心取沉淀复溶，去

生 化 实 习 报 告

班级：生物技术指导教师：敖新宇、贾璐 学号： 姓名： 日期：

08

2009-12-19

生物化学综合实验

摘要：本次实验包括苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定和大玉米粉中营养成分的测定两个实验。

关键词：苯丙氨酸解氨酶、Sephadex G—25层析、DEAE纤维素层析、活力、比活力、大玉米粉、凯式定氮法、索式提取法、3，5—二硝基水杨酸比色法。

实验一 苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定

一 实验目的

1.学习掌握分离纯化生物大分子的方法； 2.学习掌握酶活性的测定方法；

3.了解在分离纯化过程中酶活性的变化； 4.了解高速冷冻离心机的操作步骤 二 实验原理

苯丙氨酸解氨酶（L—phenylalanine: ammonia lyase,简称PAL；EC4.3.1.5）是 植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物生长发育和抵制病菌侵害过程中起重要作用。PAL催化L—苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸在

生 化 实 习 报 告

班级：生物技术指导教师：敖新宇、贾璐 学号： 姓名： 日期：

08

2009-12-19

生物化学综合实验

摘要：本次实验包括苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定和大玉米粉中营养成分的测定两个实验。

关键词：苯丙氨酸解氨酶、Sephadex G—25层析、DEAE纤维素层析、活力、比活力、大玉米粉、凯式定氮法、索式提取法、3，5—二硝基水杨酸比色法。

实验一 苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定

一 实验目的

1.学习掌握分离纯化生物大分子的方法； 2.学习掌握酶活性的测定方法；

3.了解在分离纯化过程中酶活性的变化； 4.了解高速冷冻离心机的操作步骤 二 实验原理

苯丙氨酸解氨酶（L—phenylalanine: ammonia lyase,简称PAL；EC4.3.1.5）是 植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物生长发育和抵制病菌侵害过程中起重要作用。PAL催化L—苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸在

面粉与米粉中可溶性糖含量的差异

蒋名鹏

（云南农业大学烟草学院 2011313546）

植物体内的可溶性糖是光合作用的产物【1】。可溶性糖以蔗糖为主，是植物糖类运输的主要形式。糖是人体所需的六大营养成分之一【2】，在我们的生活中，我们主要是从植物中获取糖分。而在我国南方人主要以大米为主食，北方人以面粉为主食。本文对于研究植物碳水化合物代谢，评价营养状况，分析农产品品质等均有必要测定可溶性糖含量，同时可掌握蒽酮法测糖的基本技术【3】；更进一步可分析比较米粉与面粉中可溶性糖含量，试说明米粉与面粉哪个糖分更高，为二者营养价值比较作参考。

一、材料和方法

供试材料为云南农业大学购买的粗米粉和粗面粉，经过一定的去杂处理。 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖

【4】

的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 可溶性糖的测定可分为三步：1.绘制标准曲线；2.提取可溶性糖---干样浸提；3.测定糖含量，选用620nm波长在分光光度计上比色，查标准曲线，求得相应的

【5】

糖含量。

二、结果和分析 1.米粉

实验十 一 IMViC与硫化氢试验

指导教师：李海花 周六 第三组

学号：060122010041 姓名：宋天佳 专业：2010级水产养殖 学号：030212010025 姓名：皇 昊 专业：2010级化学1班 学号：060122010055 姓名：续鹏辉 专业：2010级水产养殖

一、实验目的

了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 二、实验原理

IMViC是I－吲哚（indol test）、M－甲基红（methyl red test）、V－伏-普（Voges-Prolauer test）和C－柠檬酸盐（citrate test）4个实验的缩写。这4个实验主要用来快速鉴别产气杆菌与大肠杆菌，多用于水的细菌检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水时若超过一定指标，则表示水质受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水是要将两者分开。硫化氢（H2S）实验也是检查肠道细菌的生化实验。 （一）吲哚试验（indol test）

吲哚试验是用来检测吲哚试验的产生，有些细菌分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红

实验报告

课程名称：生化实验B 实验日期： 班级： 姓名学号：

血红蛋白凝胶过滤

一、 背景及目的

血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质。存在于脊椎动物、某些无脊椎动物血液和豆科植物根瘤中。人体内的血红蛋白由两个α亚基和两个β亚基组成。每个亚基均成球状，内部有一个血红素。血红素上的亚铁离子可以可逆的与氧分子结合，起到运输氧气的作用。当携带氧气时，血红蛋白呈鲜红色，无氧时为暗红色。

凝胶过滤法又称凝胶排阻层析或分子筛层析，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。一般是大分子先流出来，小分子后流出来。

凝胶过滤的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。

影响分离效果的因素主要有以下几点：1.基质的颗粒大小、均匀度

2.筛孔直径和床体积的大小3.洗脱液的流速4.样品的种类等，5.缓冲液的pH

6.

实验二 绿叶中色素的提取和分离 及光合作用强度影响因素探究实验

实验一：绿叶中色素的提取和分离

一.实验原理：

绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中，所以，可以用无水乙醇提取绿叶中的色素。绿叶中色素不止一种，它们在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快；反之，则慢。这样，最终不同的光合色素会在扩散过程中分离开来。

二．实验目的：

1.进行绿叶中色素的提取和分离实验 2.探究绿叶中含有几种色素

三．实验材料、试剂及器材：

1.实验材料：菠菜、暴马丁香、生菜、稠李树叶

2.实验试剂：无水乙醇、层析液（由20份在60-90。C下分馏出来的石油醚、2份丙酮和1份苯混合而成）、93号汽油、二氧化硅和碳酸钙。

3.实验器材：干燥的定性滤纸、试管、棉塞、烧杯、试管架、研钵、玻璃漏斗、盖玻片、

毛细吸管、剪刀、药勺、量筒、天平、酒精灯、石棉网、三脚架

四．实验步骤及实验现象：

（一）色素的提取和分离实验：（研磨法） 1.提取绿叶中的色素

分别称取、剪碎菠菜、暴马丁香、生菜5g叶片，放入研钵中。加入少许二氧化硅、碳酸钙、10mL酒精。快速、充分研磨。

根据叶绿体中的色素在乙醇中溶解的特性，用无水乙醇

生化实验报告

实验一 过氧化物酶（POD）的提取与活性测定

一、 实验目的

1. 学习和了解酶的提取及活性测定的一般流程。

2. 掌握过氧化酶（POD）的提取及活性测定的基本方法和原理。 3. 掌握分光光度计的操作技能。

二、实验原理

过氧化物酶(POD)是一种以血红素为辅基的氧化酶，可催化H2O2分解而产生H20，但需有一个可提供电子的化合物（如酚类或胺类）作为电子供体存在。愈创木酚法是测定POD活性的较为常用的方法，在POD的催化作用下，H2O2可将愈创木酚氧化成茶褐色产物，此产物在470nm处有最大吸光度，故可通过测定470nm波长下的吸光度的变化速率来反映POD活性。

三、材料、试剂和设备

（一）材料

马铃薯表皮。

（二）主要试剂与配制

0.2M pH 6.0磷酸缓冲液（PBS）

反应混合液(0.2M PBS pH6.0 、0.05M愈创木酚、2%H2O2)（现配先用）

（三）设备

分光光度计、离心机、研钵及电子天平。 四、操作步骤

称取马铃薯外皮在另一支比色皿中加入 15uL酶液，再加入2.50ml反应混合液，立即放入分光光度计中，每30s记录一次光密度值。 0.40g，加入2.00ml磷酸缓冲液一起在

肌糖元的酵解作用

学号：200900140157 班级：09生科3班 姓名：俞华军 时间：2011/03/27

一．实验目的

1.学习鉴定糖酵解作用的原理和方法。

2.了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。 3.了解有关组织代谢实验应注意的一些问题。

二．实验原理

在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行。本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应，最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖元首先磷酸化，经过己糖磷酸酯、丙糖磷酸酯、甘油磷酸酯、丙酮酸等一系列中间产物，最后生成乳酸。该过程可综合成下列反应式： （1/n）(C6H10O5)n+H2O 2CH3CHOHCOOH

肌糖元的酵解作用是糖类供给能量的一种方式。当机体突然需要大量的能量，而又供氧不足（如剧烈运动时），则糖元的酵解作用可暂时满足能量消耗的需要。在有氧条件下，组织内糖元的酵解作用受到抑制，而有氧氧化则为糖代谢的主要途径。

糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜时，必须在无氧条件下进行；而用肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。因为催化酵