细胞克隆形成实验图片

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

常用分子克隆实验方法I

一、植物总DNA的小量提取

方法1：提取吸附法。无须巯基乙醇、氯仿等有毒物质，产物无须Rnase处理。

(1) 充分研磨。称取约0.2克植物组织，加入液氮充分研磨3-5min，稍后加约1ml溶液

A，继续研磨至略粘稠的组织匀浆，用大口1ml吸头将所有溶液移至1.5ml离心管中，55℃水浴30min；

(2) 高速离心去杂质。10,000rpm离心5min，取约600ul上清至新1.5ml离心管； (3) 核酸吸附。往上清液中加入1倍的异丙醇，轻轻混匀，再加入总体积1/4已混匀的

溶液B，静置3min;

(4) 低速离心沉淀。5000rpm离心1min，轻轻倒掉上清，并用吸水纸轻吸离心管口，

再用移液枪吸走大部分残余液体；

(5) 75%乙醇清洗。加入1ml75%乙醇，5000rpm离心30s，轻轻倒掉上清，用吸水纸稍

吸离心管口。重复该步骤一次，再5000rpm离心30s，然后用移液枪吸走管底的残液，晾干5min；

(6) 核酸洗脱。加入约55ul TE（PH8.0）至管底，轻轻重悬硅土，静置3min，10,000rpm

离心1min，用小枪头轻轻吸取出50ul管底溶液，冷藏。

方法2：CTAB法，此为在经典方法基础上，经过摸

整个基因克隆实验规程

完整

Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】

一、组织总RNA 的提取

相关试剂：T rizol；氯仿；苯酚；异丙醇；75%乙醇；RNase-free水

相关仪器：制冰机；液氮&研钵/生物样品研磨仪；高速离心机；移液器（1ml、200μl、

100μl/50μl）；涡旋振荡仪；恒温金属浴。

相关耗材：解剖工具，冰盒，离心管，离心管架，吸头（1ml，200μl/300μl），一次性手套，实验手套。

实验步骤

1.取暂养草鱼，冰上放置一段时间，然后解剖，剪取肠道50~100mg，放入研钵中，加入液氮迅

速研磨，然后加入1ml 预冷TRIzol试剂，充分研磨至无颗粒物存在。

2.转移到离心管中，室温放置5min，使细胞充分裂解；

3.按1ml Trizol加入200μl氯仿，盖上盖子，迅速充分摇匀15s，然后室温放置3min；

4.4℃，,12000g 离心15min；

此时混合物分为三层，下层红色的苯酚氯仿层，中间层和上层无色水相；RNA存在于无色水相中；

5.小心吸取上清液，千万不要吸取中间界面，否则有DNA污染；转移至一个新的离心管，加入等

体积的异丙醇，轻轻混匀；

6.室温放置10

学习目标：1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义自主学习：1.动物细胞融合常探究交流知识点一.动物细胞融合课堂反馈1.下图表示

选修三学案 胶州四中高二生物

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

学习目标：

1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同

2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义

3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

学习重难点：1.动物细胞融合的原理、过程和意义。2.单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

知识回顾：1、植物体细胞杂交过程应用了那些技术?

2、植物与动物细胞结构有何区别？

自主学习：

1．动物细胞融合常用的诱导因素有、点是 。

2．制备单克隆抗体的技术流程是：用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生反应。然后，把

相应的 细胞和 细胞融合，再用 进行筛选，在该培养基上， 未融合的

亲本 细胞和

实验一细胞的凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品

1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。

四、实验步骤

1２％鸡血红细胞悬液制备

取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备

土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min） 3 细胞凝集反应

制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

1. 2. 3. 4. 5.

实验前准备

? 根据自己实验的情况提前预定超净台 ? 进入细胞室之前必须穿鞋套，戴手套

? 将实验所需要的实验仪器放入超净台内紫外照射灭菌15-20min

高压灭菌操作

将所需灭菌的枪头，EP管等仪器放入枪头盒或饭盒中，并用报纸将枪头盒包好。

将仪器放入灭菌锅之前，首先要检测一下锅内的水位是否超过锅底的圆圈，若没有超过则需加水。

检测水位之后，将包好的器材放入锅内，盖上锅盖并拧紧螺丝。 插上电源，先将电压调至250V，目的在于排尽锅内的空气，（当排气阀有白气冒出时，说明空气已排尽）空气排尽后，关闭排气阀。

关闭排气阀后指针上升，当指针竖直时，将电压调至125V，保持锅内压力的稳定。

开始计时，灭菌30min。结束时关闭电源，等至指针慢慢降下即可。 拿出锅内的器材放入恒温烘箱中烘干，2天后即可拿出。

（组织内）蛋白质提取过程

对癌组织和癌旁正常组织进行称重，记录数值。

根据RIPA裂解液Ⅲ说明书（每100mg组织中加入1ml溶液A，1ul溶液B，5ul溶液C）按照组织块得大小配好ABC混合液。

将组织块加入匀浆器中，并加入相应量得ABC混合液，冰上静置5-10min，开

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实验六细 融合胞组员：

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一实验、设(计步初) 细 融合率胞 ?—— 化进平的高低水 ？ — 亲—关系的远近？缘

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、一实验设(计步) 初 、1极情端：况 –A亲、关系最缘：同种近物

生–B、 亲缘关系远：动物最植物+–(更 端的极情况可是以真+核核)原一、

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验实计(设步初) 2、度梯置设 –鉴时间于系关材料难及，易设梯置时度只虑考 物动分部 – 、同A种(物)动– B、 属同异种 (物动) –C、同亚门 不同 纲(动亚物 ) –、不D界(动物+植同)

物

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、一实设计验初(步 ) 、3验材料选实定:– 、A同种鸡+鸡) – B、同属(异 种鸡+(鸭) 区分?能染可上有色区；待别定，若不可可先用 性染活染其中一种，料一种另染不，合融。– C同亚、门 不同亚纲(+鸡) 兔乳哺动物无，核融时可合辨分2细种

–胞D、 不界同(鸡+草)烟

一

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实验设计、初()步 4、实验方 选定法–电融合

法

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什么动物只？鸡有 算？,了得去懒材搞料了一、

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验设计实(改1) 修3 实、材料验选：定–A、同种 (洋葱洋+)葱– B 同属 异种、洋葱+(菜韭 ) C、–亚纲 同同目不(葱洋烟草+

七年级生物上册第四章生物休的结构层次

第一节 细胞分化形成组织 教学设计

李红萍

一 、教学目标

（ 1）知识目标

① 识别自己身体的某一部位属于何种组织，例如，肌肉主要是由肌肉组织

构成的；

② 识别人体的四种基本组织的细胞特点；

③ 说出绿色开花植物的主要组织；

④ 学会使用显微镜观察人体四种基本组织。

（２）能力目标：合作完成观察、实验活动、尝试和体验与人合作。

（３）情感态度与价值观：认同实事求是的科学态度，不断探求新知识的精神。

二 、本节难点重点：

难点：学会使用显微镜观察人体四种基本组织。

重点：动植物的主要组织

三、课时安排 1课时。

四、教学方法：

讨论、观察、练习

五、 探讨思路设计：

第1节 细胞分化形成组织

（一）、组织的形成及概念

（二）、人和动物的基本组织——活动“观察人体几种常见的组织”

（三）、植物体的主要组织

六、 教学过程

复习：1、简述细胞分裂的基本过程；

2、细胞分裂的结果是什么？

生物体生命活动的基本单位是什么？一个成年人大约由60万亿个细胞组成，而人是由一个细胞——受精卵发育而来的。一个细胞是怎样变成60万亿个细胞的呢？（回答：略。）

通过细胞分裂，可以使细胞数目增多，但细胞分裂的结果是一个细胞变成两个相同的细胞，而组成人体的细胞都一样吗？引

七年级生物上册第四章生物休的结构层次

第一节 细胞分化形成组织 教学设计

李红萍

一 、教学目标

（ 1）知识目标

① 识别自己身体的某一部位属于何种组织，例如，肌肉主要是由肌肉组织

构成的；

② 识别人体的四种基本组织的细胞特点；

③ 说出绿色开花植物的主要组织；

④ 学会使用显微镜观察人体四种基本组织。

（２）能力目标：合作完成观察、实验活动、尝试和体验与人合作。

（３）情感态度与价值观：认同实事求是的科学态度，不断探求新知识的精神。

二 、本节难点重点：

难点：学会使用显微镜观察人体四种基本组织。

重点：动植物的主要组织

三、课时安排 1课时。

四、教学方法：

讨论、观察、练习

五、 探讨思路设计：

第1节 细胞分化形成组织

（一）、组织的形成及概念

（二）、人和动物的基本组织——活动“观察人体几种常见的组织”

（三）、植物体的主要组织

六、 教学过程

复习：1、简述细胞分裂的基本过程；

2、细胞分裂的结果是什么？

生物体生命活动的基本单位是什么？一个成年人大约由60万亿个细胞组成，而人是由一个细胞——受精卵发育而来的。一个细胞是怎样变成60万亿个细胞的呢？（回答：略。）

通过细胞分裂，可以使细胞数目增多，但细胞分裂的结果是一个细胞变成两个相同的细胞，而组成人体的细胞都一样吗？引