载体去磷酸化作用

质粒载体单酶切后的去磷酸化

1、 去磷酸化体系的确定：

一般有两种体系：20ul体系和50ul体系

ddH2O X to 20ul SAP buffer 2ul

SAP 1ul（一般0.05-2μg的DNA用1ul的SAP足够） 质粒载体 m ul [m=（0.02nmol*质粒大小kb*660）/质粒浓度] 2、 反应条件：

37℃反应30-60min

65反应15-30min（灭活SAP）

用1X TE将去磷酸化后的载体补足300ul（为了下一步纯化载体时减少损失）

载体纯化（个人不建议用胶回收柱纯化，因为纯化的效率很低，除非你的载体浓度很高或者你的柱子效率很高。建议使用酚氯仿纯化DNA的方法纯化载体） 加入 酚：氯仿：异丙醇（25: 24:1） 300ul 充分混匀10min左右

8000rmp离心5min，分层后小心吸取上清于新离心管（千万不要吸到中间层，宁肯少吸点上清）

加入300ul异丙醇于上清中，充分混匀

80

蛋白质磷酸化与信号传导

蛋白質磷酸化與信號傳導

對所有真核生物而言，蛋白質的磷酸化是細胞內信號傳遞的關鍵步驟，舉凡在細胞代謝、生長、增殖、癌變調控方面，蛋白質的磷酸化都扮演著重要角色。目前在真核細胞內已發現有400多種蛋白激酶和1000多種磷酸蛋白。通過蛋白質磷酸化，機體得以改變細胞內蛋白質活性，或藉以改變酵素活性、或藉以傳遞信號、或調節細胞內各個生理過程。隨著愈來愈多的信號傳導路徑被證實與蛋白質磷酸化相關，此一主題己是當今細胞生物學研究的熱點。

蛋白質的可逆磷酸化

蛋白質的磷酸化和去磷酸化是一個可以相互轉化的過程，分別由機體藉由調控細胞內各類蛋白激酶（protein kinases）和蛋白磷酸酶（phosphatases）的活性來啟動或抑制。通過磷酸化和去磷酸化兩種構象的互變，導致蛋白質活性改變而表達其特殊的生理功能。現已證實，細胞的許多功能蛋白，如激酶、酶蛋白、受體、視蛋白、運輸蛋白、收縮蛋白、調節蛋白、核蛋白、離子通道、離子幫浦等，均能發生蛋白質的磷酸化與去磷酸化。蛋白質磷酸化的方式有兩種：一種是蛋白質自身磷酸化，如胰島素受體、C激酶、G激酶、Ca2+·CaM激酶、EGF受體、PDGF受體、IGF-1受體、FGF受體、CSF-1受體、

NovelZincPhosphateTopologiesDefinedbyOrganicLigands

JianFanandBrianE.Hanson*

DepartmentofChemistry,VirginiaPolytechnicInstituteandStateUniVersity,Blacksburg,Virginia24061

ReceivedMarch1,2005

Sixnewzincphosphates[C18H20N4][Zn4(HPO4)4(H2PO4)2(C18H18N4)3] 2H2O(1),[Zn4(HPO4)4(C18H18N4)3] 4H2O(2),[Zn3(HPO4)3(H2PO4)(C22H22N8)0.5(C22H24N8)0.5](3),[Zn2(HPO4)2(C18H16N4)](4),[Zn(HPO4)(C18H14N2)](5),and[Zn2-(HPO4)2(C12H10N4)](6)havebeensynthesizedundermildhydrothermalconditionsinthepresenceof1,4-bis(N-benzimidazolyl)butane(L1),1,2,4,5-tet

马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因cDNA克隆及其在甲醇毕赤酵母中的表达

农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2005,13(3):282~287

··研究论文

马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基

基因(的克隆及其在毕赤酵母中的表达*

宋波涛柳俊**谢从华成善汉

(华中农业大学园艺林学学院，国家蔬菜改良中心华中分中心，园艺植物生物学教育部重点实验室，

湖北省马铃薯工程技术研究中心，武汉430070)

摘要：用RT-PCR结合RACE的方法，在腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因(温处理的马铃薯(

目标片段为体。DNA序列测定结果表明，

从低的保守位点设计1对引物，

L.)块茎cDNA中，扩增出1条约1.9kb的特异性条带，并将其克隆到pBluescriptSK域载

编码521个氨基酸。全长为1854bp，包含一个1563bp的开放阅读框架，5'端

有63bp的非翻译区，3'端包含219bp的非编码序列，3'端poly(A)尾端上游12和19bp处有加尾信号AATAAA。该基因已在GenBank注册，登记号为AY186620。将该基因PCR突变后，克隆到酵母表达载体pMET琢-B中，构成表达

BioTek应用手册

A p p l i c a t i o n N o t e

药物筛选

一种常见的GPCR传感器-ERK1/2的自动均相磷酸化检测 -均相LanthaScreen®细胞分析

Paul Held and Peter Banks, BioTek Instruments, Inc. Winooski, VT

Kristin Huwiler, Matthew Robers, and Bonnie Hanson, Life Technologies, Madison, WI

关键词：GPCR, LanthaScreen, ERK，TR-FRET

GPCRs的激活会刺激活化各种信号通路，大部分信号通路的激活均可能导致细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化。因此，针对ERK1/2的磷酸化检测可以代替GPCRs的活性检测。本文介绍了一种将BacMam调节的GFP-ERK2 传感器基因传递技术和LanthaScreen®细胞学实验技术相结合的时间分辨荧光共振能量转移技术（TR-FRET），该技术用来检测ERK2细胞外的磷

中国药物与临床2012年1月第12卷第1期Chinese Remedies &Clinics ，January 2012,Vol.12,No.1肺间质纤维化是一种渐进性加重的致命性弥漫

性肺疾病。肺内成纤维细胞和损伤的气道上皮细胞

向肌成纤维细胞转分化是特发性肺纤维化发生的重

要病理因素［１］，α鄄平滑肌肌动蛋白（α鄄ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ

ａｃｔｉｎ，α鄄ＳＭＡ）是研究肌成纤维细胞分化的标记物。

近年来，肺纤维化转分化病理过程中涉及到的信号

通路一直是研究的热点。ｃ鄄ｊｕｎ氨基末端激酶（ｃ鄄ｊｕｎ

ＮＨ２鄄ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ，ＪＮＫ）

信号通路参与调控许多细胞增殖、分化与凋亡，是丝裂原活化蛋白激酶家族的

重要一员［２］。Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ等［３］发现ＪＮＫ信号通路在人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化中发挥作用，而关于体内ＪＮＫ信号通路在肺纤维化转分化过程中是否发挥作用尚未见相关研究报道。ＳＰ６００１２５作为ＪＮＫ激酶抑制剂，可特异性阻断ＪＮＫ细胞信号通路［４］。本实验使用ＳＰ６００１２５进行干预，通过观察大鼠肺组织中ｐ鄄ＪＮＫ和α鄄ＳＭＡ的表达水平，从分子信号角度探讨肺纤维化转分化的发病机制。1材料与方法１．１主要试剂及药品：盐酸博莱霉素（ＢＬＭ，

电解与极化作用

1．电流密度j=0.01A·cm-2时，H2在Zn电极上的超电势η(H2)=0.76 V，若电解液中Zn2+的活

度为0.01，要使Zn2+在阴极上析出，而不使氢析出，求溶液的pH值应控制在什么范围(298K时?(Zn2+ | Zn) = -0.763V)。

2．实验测得酸性溶液（pH=1.0）中氢在铁上析出的极化曲线符合Tafel公式，得到a=0.7V, b=128mV，(电流密度的单位是A·cm-2)。试求外电流为1.0×10-4mA·m-2时氢在铁上析出的阴极超电势(?阴)，实际析出电势(?阴)，及交换电流密度(j0)。 3．298.2K、p时，用铂做两电极电解浓度为1mol·dm-3的NaOH溶液： （1）两极产物是什么？写出电极反应方程式。 （2）电解时理论分解电压是多少? 已知?O2|H+,H2O=0.401V，?Na+|Na= -2.714V

4．298.2K，以铜为电极电解0.05 mol·dm-3CuSO4和0.001mol·dm-3H2SO4的混合溶液，H2

在铜上的超电势为-0.23V，若H2气体压力为100kPa，求H2在铜上的析出电势。 5．溶液中Ni2+，Cu2+的活度均为1.00mol kg -1

第十章 电解与极化作用

1. 在298 K时,用Pb(s)电极来电解H2SO4溶液(0.1 mol/kg,γ±=0.265),若在电解过程中,把Pb阴极与另一摩尔甘汞电极相连组成原电池,测得其电动势

E=1.0685 V.试求H2(g)在Pb电极上的超电势(只考虑H2SO4的一级电离). 已知 (甘汞)=0.2802 V.

2. 在锌电极上析出氢气的塔菲尔公式为 η=0.72+0.116lgj 在298K时,用Zn(s)作阴极,惰性物质作阳极,电解浓度为0.1 mol/kg的ZnSO4溶液,设溶液pH为7.0,若要使H2(g)不和锌同时析出应控制在什么条件?

3. 在298 K时,当电流密度为0.1 A·cm-2时, H2(g)和O2(g)在Ag(s)电极上的超电势分别为0.87和0.98 V.今用Ag(s)电极插入0.01 mol/kg的NaOH溶液中进行电解,问在该条件下在两个银电极上首先发生什么反应?此时外加电压为多少?(设活度系数为1)

4. 在298K,标准压力101.325 kPa 时,某混合溶液中,CuSO4浓度为0.50 mol/kg, H2SO4浓度为0.01 mol/kg,

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超声空化的研究历程及展望# 龙正，刘秀梅** （中国矿业大学机电工程学院，徐州 221000）

摘要：超声空化是工业设备中广泛存在的一种流体力学现象。随着超声技术应用广泛而迅速的发展，整整 一个世纪来，超声空化成了经久不衰的研究课题，特别近十年来，超声空化成了多种学科的基础研究热 点。在超声空化研究方面，国内外已有大量的实验、理论及数值计算的相关研究。综述了超声空化研究中 理论、数值分析、实验三方面的研究现状及研究进展，总结了空化研究中存在的问题，提出了今后超声空 化的发展方向。

关键词：超声空化；空泡；高速摄影；动力学特性

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中图分类号：O427.4

15

The research process and prospect of ultrasonic cavitation

LONG Zheng, LIU Xiumei

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25

(Mechanical and electrical Engineering School ,China Univisity of Mining and Technology

221000)

Abstract: Ultrasonic cavitation is a widespread phenomenon

水解酸化运行讨论

栏杆 发表于: 2009-4-22 13:31 来源: 水网博客——水业思想的集散地！

现在城镇污水处理厂在水解酸化应用上越来越多，但是真正实现水解酸化，提高bc比目的的不多，好多人都在迷茫彷徨阶段，前段水解酸化后继处理工艺应该采用何种方式适合，而不是一味跟风的取消初沉，然

后后续再用其他工艺，一种茫然跟风现象。

最新回复

栏杆 at 2009-4-22 13:43:10

一、厌氧生化处理的概述

废水厌氧生物处理是指在无分子氧的条件下通过厌氧微生物（包括兼氧微生物）的作用，将废

水中各种复杂有机物分解转化成甲烷和二氧化碳等物质的过程。

厌氧生化处理过程：高分子有机物的厌氧降解过程可以被分为四个阶段：水解阶段、发酵(或酸

化)阶段、产乙酸阶段和产甲烷阶段。

1、水解阶段

水解可定义为复杂的非溶解性的聚合物被转化为简单的溶解性单体或二聚体的过程。

2、发酵（或酸化）阶段

发酵可定义为有机物化合物既作为电子受体也是电子供体的生物降解过程，在此过程中溶

解性有机物被转化为以挥发性脂肪酸为主的末端产物，因此这一过程也称为酸化。

3、产乙酸阶段

在产氢产乙酸菌的作用下，上一阶段的产物被进一步转化为乙酸、氢气、碳酸以