dna提取和pcr扩增实验报告

题目：水稻DNA提取，扩增与电泳实验 组别：第三组

一、1掌握DNA的提取技术2掌握PCR的相关操作3掌握了解电泳操作方法和步骤

二、实验原理：1、提取DNA一般用水稻幼叶，先用机械方法液氮研磨植物组织使组织细胞破碎，然后加TPS抽提液水浴提取DNA，最后用无水乙醇沉淀DNA即可。（DNA提取原理）2、DNA在高温时可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。（PCR原理）3、琼脂糖凝胶电泳：借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离。 三、实验仪器和药品

液氮、镊子、手套、移液枪、枪头2ML和1.5ML离心管、水稻幼叶、研磨棒、琼脂糖、天平、PCR仪、Loading Buffer染色剂、灭菌双蒸水、摇床、离心仪、Taq酶、Mg2+Buffer、dNTP溶液、引物、TPS抽提液、无水乙醇、电泳槽、GoldView、TBE溶液、微波炉、锥形瓶、量筒、PCR板、PCR盖、水浴箱、Marker 四、实验步骤 1、DNA提取

（1）取水稻叶子少量置于2ML离心管内，加入液氮研磨，带磨成粉状后，加1MLTPS抽提液，然后将离心管放入75℃恒温水浴箱中至少半小时。同时将无水乙醇放入-40℃下冷冻 （2）水

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pcr扩增实验报告

篇一：DNA提取及PCR扩增实验报告

PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳 刘琳 1131428 环境科学 一、实验目的

1．学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。

2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。 二、实验原理 1. PCR扩增

多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。降低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）----------------精选公文范文----------------

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与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中温（72℃），在T

质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定

一、实验目的

1.学习并掌握用碱裂解法提取质粒DNA的方法； 2.学习并掌握了解质粒酶切鉴定的方法；

3.学习并掌握紫外吸收检测DNA浓度和纯度的原理和方法； 4.学习并掌握PCR基因扩增的实验原理和操作方法； 5.学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳的原理和使用方法。

二、实验原理

1.PCR(多聚酶链式反应)

在DNA聚合酶催化下，可以DNA为模板，以特定引物为延伸起点，以dNTP为原料，通过变性、退火、延伸等步骤， 在体外（缓冲液中）复制DNA，使目的DNA按2n方式呈指数形式扩增。

PCR一次循环的具体反应步骤为：

A.变性：加热反应系统至95℃，使模板DNA在高温下完全变性，双链解链 。 B.退火：逐渐降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链。

C.延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在 Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。

2.质粒DNA的提取与制备 (1).碱裂解法：

染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异： A.高碱性条件下，染色体DN

质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定

一、实验目的

1.学习并掌握用碱裂解法提取质粒DNA的方法； 2.学习并掌握了解质粒酶切鉴定的方法；

3.学习并掌握紫外吸收检测DNA浓度和纯度的原理和方法； 4.学习并掌握PCR基因扩增的实验原理和操作方法； 5.学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳的原理和使用方法。

二、实验原理

1.PCR(多聚酶链式反应)

在DNA聚合酶催化下，可以DNA为模板，以特定引物为延伸起点，以dNTP为原料，通过变性、退火、延伸等步骤， 在体外（缓冲液中）复制DNA，使目的DNA按2n方式呈指数形式扩增。

PCR一次循环的具体反应步骤为：

A.变性：加热反应系统至95℃，使模板DNA在高温下完全变性，双链解链 。 B.退火：逐渐降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链。

C.延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在 Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。

2.质粒DNA的提取与制备 (1).碱裂解法：

染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异： A.高碱性条件下，染色体DN

动物肝脏中DNA的提取及检测

一、前言

脱氧核糖核酸

脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。

在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，

反转录

概念

反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式。

区分:反转录与逆转录不等同。反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之为模板人工合成DNA的过程；逆转录是RNA类病毒自主行为，在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程，但地点不同，相对性的来说，反转录在体外，逆转录在体内。

2反转录酶与反转录过程

反转录过程由反转录酶催化，该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA（cDNA）。反转录酶存在于一些RNA病毒中，可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒（HIV）也是一种RNA病毒，含有反转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有反转录酶，推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。

大多数反转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性。

①DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转

第32卷第3期浙江师范大学学报(自然科学版)V o.l32,N o.3

2009年9月Journa l o f Zhe ji ang N or m a lU n i ve rsity(N at.Sc.i)Sep.2009

文章编号:1001-5051(2009)03-0317-05

对动物组织DNA提取方法的改进及PCR检测*

鲍毅新,孙波,张龙龙,赵庆洋

(浙江师范大学生态研究所,浙江金华321004)

摘要:以小型哺乳动物社鼠为例,通过调整酚与氯仿的比率、减少抽提次数及消化时间,对采用-70e超低温冰箱、-20e低温冰箱、70%乙醇液浸泡、95%乙醇液浸泡和含50mmo l/L乙二胺四乙酸二钠的70%乙醇液浸泡等不同方法保存的社鼠肌肉组织提取基因组DNA,并对其进行微卫星指纹图谱分析,研究了改进方法对不同方法保存的社鼠肌肉组织提取DNA的效果,并比较了不同保存方法对DNA提取效果的影响.结果表明:改进方法可行,完全可以满足微卫星等分子标记技术的需要.

关键词:社鼠;DNA提取;聚合酶链反应;动物组织;样品保存

中图分类号:Q95-3文献标识码:A

The i m prove m ent for m ethod of DNA extraction fro m

酵母RNA的提取紫外吸收法测RNA浓度实验报告

一、实验目的

1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。

2、掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。 3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。 二、实验原理

核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。本次实验提取酵母的核糖核酸（RNA）。RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA酶的作用。本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。

核酸（RNA）都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。 提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。前者是利用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。使用浓盐法提取RNA的时候应该注意掌握温度，直接至90~100℃浸提，

组织miRNA提取(E.Z.N.A. miRNA Kit)

器具和耗材

E.Z.N.A. miRNA试剂盒 、加样器一套、涡旋器、离心机、离心管架、各种规格离心管（15ml、1.5ml、）、RNase-free的各种规格吸头（1ml、200ul、10ul）、镊子、研钵、研棒、保温杯（盛液氮用） 试剂：

氯仿、75%乙醇、100%乙醇、RNase-free水 操作步骤： 准备工作

1. 实验前1天将研钵和研棒放在84消毒液中浸泡24小时，实验前30min加入液氮冷却。 2. 实验前清理实验台面，用75%乙醇擦拭台面2篇，喷洒RNase-free水于台面和要用的器械盒试剂盒；

3. 将15ml离心管在液氮中提前预冷。

4. RWB Wash Buffer中加入48ml无水乙醇。

5. 将冻存样品从-70℃冰箱转移至装有液氮的保温杯中。

组织研磨和匀浆

1. 取冰冻组织材料50－100mg置于放有液氮的研钵中，在研钵中加液氮研磨成粉末（尽量细），注意持续补充液氮； 2. 用在液氮中预冷的1ml吸头转移组织粉末至提前预冷的15ml离心管中 3. 待液氮完全蒸发后加入1mlRNA-Solv试剂，室温下孵育2-3min

4. 每1mlRNA-Solv试

《遥感原理与应用》实验报告

学院：

授课教师： 班级： 姓名：

学号：

一、 实验目的

1、提取TM图像中的水体信息，对图像（TM-AA）中的水体进行提取，采用公式（b2-b5、(b2-b5)/(b2+b5))分别进行提取，进行分割比较。

2、对提取的水体图像进行形态学处理，并对处理后的图像进行效果比较。

二、实验原理

通过ENVI软件，对图像（TM-AA）中的水体采用公式（b2-b5、(b2-b5)/(b2+b5))分别进行提取，进行分割比较。

三、实验准备

软件准备：ENVI 实验数据：图像：AA

四、实验步骤

1、查看图像直方图。

2）、查看光谱剖面信息。 3）、查看指定线路上的光谱值变化。

（4）、查看不同像素位置光谱值变化。

A、显示图像和直方图 B、确定直方图分级点的像素

C 、设置拉伸的范围

5）、查看（5，4，2）合成图像中水体光谱的差异。 6）比较不同地物的像素差异。

7）提取当前位置的像素值。

8）、提取水体。

9）、密度分割。 A、公式（b2-b5）

10）、对提取的水体图像进行形态学处理。

五、 实验结果

一）、密度分割结果比较。

二）、形态学处理的图像进行