叶绿素ab含量测定

叶绿素含量的测定

一、原理

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL

式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm处。已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据加和性原

叶绿素含量的测定

一、 实验目的

1. 了解分光光度计的工作原理； 2. 掌握不同型号分光光度计的操作方计；

3. 通过本实验的学习掌握叶绿素含量测定的一种常见的方法------分光光度

法。

二、 实验原理

叶绿素是脂溶性色素，主要存在于以叶绿体为首的色素体中。在活体中，叶绿素与脂蛋白结合并受到还原系统的保护，对氧和光是稳定的。

叶绿素的80%丙酮提取液在波长663nm，645nm有吸收峰，叶绿素a和叶绿素b的浓度符合以下公式：

Ca=0.0127A663-0.00259A645

Cb=0.0229A645-0.00467A663 浓度单位是：g/L

Ca=12.7A663-2.59A645

Cb=22.9A645-4.67A663 浓度单位是：mg/L

叶绿素总浓度为： CT=Ca+Cb 若以试液中色素含量来表示，则

C(mg/L)?提取液总体积(ml)叶绿素含量（mg/g鲜样）?

样品重(g)?1000

三、 仪器、试剂和材料 1. 仪器

紫外-可见分光光度计、研体、25ml容量瓶、玻璃漏斗、玻璃棒、皮头滴管 2. 试剂

丙酮（分析纯）、85%丙酮、

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

叶绿素a与叶绿素 含量的测定 叶绿素 与叶绿素b含量的测定 与叶绿素

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

实验目的和意义 叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重 要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。 叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能 的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用), 因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关， 在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加 而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态 的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低 温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的 含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因 此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的 光合生理与逆境生理具有重要意义。

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

实验原理 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b, 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm(分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰)的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。 A663=82.04Ca+9.2

实验三 富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）

一、实验目的

富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。

本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。 二、器材与用品

1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。 2、比色杯（1cm；4cm）。 3、台式离心机（3500r/min）

4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱 5、匀浆器或小研钵。

6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。 7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。

8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。 9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。 10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L. 三、方法和步骤

1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。采样点及采水时间同“浮游植物”。

2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。 3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。待水样剩余若干毫升之前加入0.

-相当于标示量%的计算公式

片剂：V×F×T/W×平均片重/标示量×100% 针剂： V×F×T/W/标示量（g/ml） ×100%

-以重量/片计的计算公式：V×F×T/W×平均片重=重量/片 例1

司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加盐酸5 mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10 mL，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）17.05 mL，空白试验消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g，20粒胶囊内容物重2.7506 g）？ (p.90－生成物滴定法) 司可巴比妥钠的滴定度计算 HHNaONaOOBrBrONN CH2CH2+Br2 (过量定量)NN OOCH3CH3CH3CH3 2KBr+I2Br2+2KI (剩余) 2NaI+Na2s4o

第八章 设计性实验

实验设计，就是要求学生设计实验方案，选择实验器材，安排实验步骤，进行数据处理及分析实验现象。它包括设计实验方案，设计实验步骤、设计实验改进方法等。实验设计，主要考察学生是否理解实验原理，是否具有灵活运用实验知识的能力，是否具有在不同情境下迁移知识的能力。

学生通过完成设计性实验，可以了解科学研究的思路、方法和步骤，使之具有严肃的科学态度、严密的科学思想和严谨的工作作风，培养学生的创新意识和创新精神，提高学生分析问题和解决问题的能力，提高学生综合素质，能有效地推动学生科研立项活动的开展，为将来从事科学研究打下良好的基础。

一、实验设计的目的

学生应在已掌握生物化学基础知识、基本理论和基本实验技能的基础上，在教师指导下，利用本实验室已有的设备条件和材料试剂等技术基础，自己从网络上获取相关资料，设计出综合性的、探索性的实验，在学生讨论、实验教师点评的基础上，学生修改实验设计方案，并在学生设计方案中选出最适合开展的方案若干个，将学生进行编组完成实验。因此实验中学生参与完成选题、设计实验、实验准备、实施实验和实验论文撰写等全过程。这种“理论-实践-理论-综合实践”的过程能使学生深刻理解生物化学实验技术与原理，能熟练运用已经学习的多种

第八章 设计性实验

实验设计，就是要求学生设计实验方案，选择实验器材，安排实验步骤，进行数据处理及分析实验现象。它包括设计实验方案，设计实验步骤、设计实验改进方法等。实验设计，主要考察学生是否理解实验原理，是否具有灵活运用实验知识的能力，是否具有在不同情境下迁移知识的能力。

学生通过完成设计性实验，可以了解科学研究的思路、方法和步骤，使之具有严肃的科学态度、严密的科学思想和严谨的工作作风，培养学生的创新意识和创新精神，提高学生分析问题和解决问题的能力，提高学生综合素质，能有效地推动学生科研立项活动的开展，为将来从事科学研究打下良好的基础。

一、实验设计的目的

学生应在已掌握生物化学基础知识、基本理论和基本实验技能的基础上，在教师指导下，利用本实验室已有的设备条件和材料试剂等技术基础，自己从网络上获取相关资料，设计出综合性的、探索性的实验，在学生讨论、实验教师点评的基础上，学生修改实验设计方案，并在学生设计方案中选出最适合开展的方案若干个，将学生进行编组完成实验。因此实验中学生参与完成选题、设计实验、实验准备、实施实验和实验论文撰写等全过程。这种“理论-实践-理论-综合实践”的过程能使学生深刻理解生物化学实验技术与原理，能熟练运用已经学习的多种

1.试剂和溶液

1.实验室用蒸馏水（GB 6682）； 2.三氯甲烷（GB 682）； 4.碘（GB 675）；

5.碘化钾（GB 1272）溶液，150g/L;

6.盐酸（GB 622）溶液：1+1溶液，将浓盐酸用等量水稀释；

7.硫代硫酸钠（GB 637）标准滴定溶液c(Na2S2O3)=0.1mol/L,按GB 601中4.6条规定配制； 8.淀粉指示液：称0.5g淀粉，用少量水混合后加到100mL沸水中煮沸3min.

? 2. 仪器

1.碘量瓶：250ml

? 2.量筒：10ml （3只） 3.滴定管：50ml. ? 3.分析结果的表述

1.碘值一X表示，按式（2）计算： X(gI2/100g)=c(V0-V)*0.1269*100/m ?

4. 测定步骤

1.韦氏试剂的制备：将19g一氯化碘溶解在1L冰乙酸（GB 676）中，搅匀后置于棕色小口玻璃瓶内，在25℃以下保存 2.试样的称量

根据预计的碘值的不同称取试样的质量 ?

3.试样的测定

称取的试样放入干燥的250ml碘量瓶中，加入6ml三氯甲烷，使试样完全溶解。精确吸取1ml韦氏试剂加入瓶中，瓶塞用碘化钾溶液湿润后，立即将瓶盖紧，摇动碘量瓶，使瓶中溶液充分混合，并置于

第八章 设计性实验

实验设计，就是要求学生设计实验方案，选择实验器材，安排实验步骤，进行数据处理及分析实验现象。它包括设计实验方案，设计实验步骤、设计实验改进方法等。实验设计，主要考察学生是否理解实验原理，是否具有灵活运用实验知识的能力，是否具有在不同情境下迁移知识的能力。

学生通过完成设计性实验，可以了解科学研究的思路、方法和步骤，使之具有严肃的科学态度、严密的科学思想和严谨的工作作风，培养学生的创新意识和创新精神，提高学生分析问题和解决问题的能力，提高学生综合素质，能有效地推动学生科研立项活动的开展，为将来从事科学研究打下良好的基础。

一、实验设计的目的

学生应在已掌握生物化学基础知识、基本理论和基本实验技能的基础上，在教师指导下，利用本实验室已有的设备条件和材料试剂等技术基础，自己从网络上获取相关资料，设计出综合性的、探索性的实验，在学生讨论、实验教师点评的基础上，学生修改实验设计方案，并在学生设计方案中选出最适合开展的方案若干个，将学生进行编组完成实验。因此实验中学生参与完成选题、设计实验、实验准备、实施实验和实验论文撰写等全过程。这种“理论-实践-理论-综合实践”的过程能使学生深刻理解生物化学实验技术与原理，能熟练运用已经学习的多种

茶多酚的含量测定

高锰酸钾直接滴定法

目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作 原理

茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。

仪器与试剂

仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。 试剂：

1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。 2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。

3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始