雷帕霉素诱导自噬

雷帕霉素促进自噬并降低神经组织损伤和脊髓损伤 后的运动功能障碍

摘要: 哺乳动物雷帕霉素的受体(mTOR)是负向调节自噬的丝氨酸/

苏氨酸激酶。雷帕霉是mTOR 信号抑制剂，可以促进自噬并在中枢神经系统 (CNS) 的几种疾病中起到神经保护作用。在本研究中，我们评估了小鼠脊髓损伤 (SCI) 后，应用雷帕霉素是否促进自噬，并降低神经组织损伤和减少运动功能障碍。我们的结果表明雷帕霉素的应用大大减少了损伤脊髓组织中p70S6K 蛋白质的磷酸化以及LC3和 Beclin 1 的高表达。此外，损伤脊髓组织中，雷帕霉素组的神经元丢失和细胞死亡率明显低于溶剂对照组。并且，在大鼠后肢运动功能评分--（BMS评分）中，雷帕霉素处理组得分明显高于溶剂对照组。这些结果表明，脊髓损伤后，雷帕霉素通过抑制 mTOR 信号通路，提高自噬水平，并减少神经组织损伤和运动功能障碍。脊髓损伤后应用雷帕霉素治疗可能成为一种新的治疗策略。

关键词：自噬；Beclin1；LC3； 雷帕霉素靶蛋白；雷帕霉素；脊髓

损伤

前言：雷帕霉素是一种大环内酯类药物，最初被用作抗真菌剂。雷

帕霉素是一种特殊的哺乳动物雷帕霉素受体阻滞剂(Ravikumar et al.,

雷帕霉素促进自噬并降低神经组织损伤和脊髓损伤

后的运动功能障碍

摘要:哺乳动物雷帕霉素的受体(mTOR)是负向调节自噬的丝氨酸/苏氨酸激酶。雷帕霉是mTOR 信号抑制剂，可以促进自噬并在中枢神经系统 (CNS) 的几种疾病中起到神经保护作用。在本研究中，我们评估了小鼠脊髓损伤 (SCI) 后，应用雷帕霉素是否促进自噬，并降低神经组织损伤和减少运动功能障碍。我们的结果表明雷帕霉素的应用大大减少了损伤脊髓组织中p70S6K 蛋白质的磷酸化以及LC3和Beclin 1 的高表达。此外，损伤脊髓组织中，雷帕霉素组的神经元丢失和细胞死亡率明显低于溶剂对照组。并且，在大鼠后肢运动功能评分--（BMS评分）中，雷帕霉素处理组得分明显高于溶剂对照组。这些结果表明，脊髓损伤后，雷帕霉素通过抑制 mTOR 信号通路，提高自噬水平，并减少神经组织损伤和运动功能障碍。脊髓损伤后应用雷帕霉素治疗可能成为一种新的治疗策略。

关键词：自噬；Beclin1；LC3；雷帕霉素靶蛋白；雷帕霉素；脊髓损伤

前言：雷帕霉素是一种大环内酯类药物，最初被用作抗真菌剂。雷帕霉素是一种特殊的哺乳动物雷帕霉素受体阻滞剂(Ravikumar et al., 2004; Schmelzle and Ha

MDC:取12 mg粉末溶于720 nl DMSO使其浓度为50 mmol/L,分装后-20冰箱保存。 临用前用MEM稀释到终浓度50 umol/L;

Rapamycin:用MEM培养基配成终浓度为1 umol/L,现用现配;

400ng/ml喹乙醇:称取4 mg喹乙醇,DMSO预溶(体积<0.1%)后加入10 ml MEM培养液至完全溶解,现用现配,避光保存;

3-MA:首先用PBS溶解粉末,临用前加热至完全溶解后再加入MEM培养基至终浓度10mmol/L; PI3K抑制剂（3-MA，Wortmannin）可干扰或阻断自噬体的形成

用RAPAMYCIN诱导自噬我也查过一部分文献，有用无血清的，也有用，一般培养基的，浓度从25nM到100nM都有，用的是50nM的雷帕霉素，加入一般的培养基中，目的是排除无血清所诱导出来的自噬。

文献说饥饿初期激活的是大分子自噬，在4-6小时活力达到最大，24h后以CMA途径为主

Earle's balanced salts solution (EBSS) for 48 h

sigma的EBSS，货号E2888，有碳酸氢钠，有酚红的，酚红到不是很必须，只是一个PH指示作用，好看些

无血清诱导自噬：EBSS 诱导6个小时就可以了。

EBSS一定可以诱导出来，只是需要说明的是时间点的设

The DNA damage response induces inflammation and senescence by

inhibiting autophagy of GATA4

DNA损伤反应通过抑制GATA4自噬诱导炎症和老化

introduction：细胞衰老是一个由多重应激导致基因表达变异和扩增的过程。虽然这也是一种潜在的肿瘤抑制机制，但衰老机制也参与了一些病理过程，包括老化，年龄相关的疾病，甚至与致瘤机制有关。衰老细胞能分泌一些衰老相关分泌表型SASP影响自身的微环境，这些SASP包括前炎性细胞因子，趋化因子，生长因子和蛋白酶。SASP启动和维持的机制以转录因子NF-κB和C / EBPb为特征的经典炎症调节机制。

rational：P53和p16INK4a/ RB是衰老过程的两个重要核心调控通道。 不依赖于p53或p16INK4a的另一种独立衰老调控通路能调节SASP。根据miR-146a的启动子片段开发了一种绿色荧光蛋白标记的衰老信号，可以检测到人类成纤维细胞衰老过程中的miR-146a。 衰老诱导刺激物能激活SASP，包括复制疲惫，DNA损伤，致癌RAS激活。 RESULTS:

通过对miR-146a启动子的分析，我们定

细胞自噬和肿瘤

摘要：近年来，细胞自噬与肿瘤的关系是研究热点。研究表明，自噬是肿瘤的双刃剑；自噬调节剂与细胞毒性药物联用在临床应用上具有很大潜力。对于细胞自噬和癌症发生之间关系还需要更加深入的研究，这将会有助于人类更好地认识并最终攻克癌症。本文将针对细胞自噬在肿瘤发生过程的作用、主要的信号调节通路以及其在治疗中的作用进行简单介绍。

关键词：细胞自噬、肿瘤、信号调节通路、治疗

一、细胞自噬和肿瘤的关系

细胞自噬(autophagy)是指真核生物中的一些受损或衰老的蛋白质以及细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后，送入溶酶体中进行降解并得以循环利用的过程。细胞自噬过程大致分为4个阶段:首先，细胞浆中出现游离前自噬泡，诱导起始与成核；前自噬泡包裹受损或衰老的蛋白质以及细胞器，逐渐发展成为由双层膜结构形成的自噬泡；自噬泡与溶酶体膜融合后，内膜及其包裹的物质进入溶酶体，被其中的酶水解；最后，溶酶体的物质分解为细胞生存所必需的组成成分，底物降解再循环。

肿瘤发生的机制很复杂，主要表现为细胞过度增殖，具有高代谢的特点，对营养和能量的需求很高；另外肿瘤细胞在恶劣的细胞外环境下（如代谢压力、缺氧、缺乏血供、养分及生长因子不足、抗肿瘤治疗等）具有很强的凋亡抵抗能

目的观察雷帕霉(Rapamycin,RAPA)对体外培养的黑色素瘤B-16细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT比色法检测细胞增殖活力;采用ELISA检测细胞凋亡;倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果0～40nmol·L^-1 RAPA能使B-16细胞增殖活力降低并使其发生凋亡。且具有时.效和量.效依赖关系;显微形态表现为细胞体积缩小,粘附性能减弱。结论RAPA能抑制黑色素B-16细胞增殖并可诱导其发生凋

海峡药学参考文献[) 1廖红娟 .小檗碱对 K 6 5 2细胞增殖、凋亡、化影响的实验研究分(]暨南大学，07 4 3 . D. 20,;6

21 0 0年

第2 2卷第 7期

巴细胞白血病细胞凋亡的研究[]. J医药导报， 0 5 2 ( ) 5 8 2 0,4 7:6 .5 0. 7 ,

[] 9杨菁 .盐酸小檗碱的抗肿瘤作用及对 B 6细胞的诱导分化[]. 1 J福建医科大学学报 .0 72 .5 2 0:42 .

(】 2阴键.主编 .中药现代研究与临床应用 ( M】.北京：学苑出版社，1 9。7—7 9 3 5 8 5 9.

[O王焰. 1]李军民，张莉，沈志祥 .华蟾素对 Jra细胞株的体外作用 ukt和动物实验研究 (]诊断理论与实践， 0

湖南科技大学研究生课程论文

关于细胞自噬的相关研究成果

姓名：陶宗 学院：化学化工学院 专业：化学 学号：16010601001

2016年度诺贝尔生理学与医学奖刚揭晓不久，获奖者为日本科学家大隅良典（Yoshinori Ohsumi），以奖励他在“细胞自噬机制方面的发现”。

一、概述

细胞自噬这是细胞组分降解与再利用的基本过程。“自噬”(autophagy)一词源于希腊语前缀“auto-”，意为“自我”，以及另一个希腊语单词“phagein”，意为“吞食”。因此，自噬作用的意思非常明确，那就是“自我吞噬”。

“自噬”的概念由比利时科学家Christian de Duve 在1963年溶酶体国际会议上首先提出，是指一些需降解的蛋白质和细胞器等胞浆成分被包裹，并最终运送至溶酶体降解的过程，自噬性降解产生的氨基酸和其他一些小分子物质可被再利用或产生能量。现已明确，自噬的主要功能之一实际上是在细胞受到应激性的死亡威胁时保持细胞的存活，这是真核细胞维持稳态、实现更新的一种重要的进化保守机制。虽然广义上的自噬包括巨自噬(macroautophagy)、微自噬(microautophagy)和分子伴侣介导的自噬(c

读《帕夫雷什中学》有感

读了《帕夫雷什中学》这部教育经典名著，使我更集中、更全面地了解苏霍姆林斯基的学校及其教育理念、办学思想和施教措施。 使我对教育有了更深刻更全面地认识。教育不仅要关注学生知识水平的发展，更要重视文学艺术、关注生命、重视对学生的劳动实践能力、创造能力的培养、设计和造就全面和谐发展的人等等。书中对帕夫雷什中学的学校工作作了详尽的描述，不仅细致入微地描述了具体的教育教学工作，而且也深刻明了地阐述了作者自身的教育思想和学校全体教职工一致的教育追求和教育智慧。不愧为一部“活教育学”。

苏霍姆林斯基说：“只有教师关心学生的人的尊严感，才能使学生通过学习而受到教育。教育的核心，就其本质来说，就在于让儿童始终体验到自己的尊严感??”每个孩子都有自尊心，孩子的心灵稚嫩而美好，作为教师我们应用心呵护学生的心灵，使学生生活在充满阳光的、平等的天空下健康茁壮成长。在《帕夫雷什中学》一书中，他指出，一个校长“最主要、最重要的品质就是：深深热爱孩子，有跟孩子们在一起的内在需要，有深刻的人道精神，有深入到儿童精神世界中去并了解和觉察每个学生的个性和个人特点的能力”。这使我感触颇深，爱是教育的真谛!教师只有付出真挚的爱，学生才能展示出一颗信赖的心，有了

读《帕夫雷什中学》有感

读了《帕夫雷什中学》这部教育经典名著，使我更集中、更全面地了解苏霍姆林斯基的学校及其教育理念、办学思想和施教措施。 使我对教育有了更深刻更全面地认识。教育不仅要关注学生知识水平的发展，更要重视文学艺术、关注生命、重视对学生的劳动实践能力、创造能力的培养、设计和造就全面和谐发展的人等等。书中对帕夫雷什中学的学校工作作了详尽的描述，不仅细致入微地描述了具体的教育教学工作，而且也深刻明了地阐述了作者自身的教育思想和学校全体教职工一致的教育追求和教育智慧。不愧为一部“活教育学”。

苏霍姆林斯基说：“只有教师关心学生的人的尊严感，才能使学生通过学习而受到教育。教育的核心，就其本质来说，就在于让儿童始终体验到自己的尊严感??”每个孩子都有自尊心，孩子的心灵稚嫩而美好，作为教师我们应用心呵护学生的心灵，使学生生活在充满阳光的、平等的天空下健康茁壮成长。在《帕夫雷什中学》一书中，他指出，一个校长“最主要、最重要的品质就是：深深热爱孩子，有跟孩子们在一起的内在需要，有深刻的人道精神，有深入到儿童精神世界中去并了解和觉察每个学生的个性和个人特点的能力”。这使我感触颇深，爱是教育的真谛!教师只有付出真挚的爱，学生才能展示出一颗信赖的心，有了

《帕夫雷什中学》的读后感

《帕夫雷什中学》的读后感一

《帕夫雷什中学》的读后感一

这是一本值得仔细阅读的书。苏霍姆林斯基是一名普通而伟大的教师，他根据自己的教学经验编写的一部部教育专著给后世以深远的影响。他的《给教师的一百条建议》、《帕夫雷什中学》尤为人们的推崇。在教学研究及报告中，人们爱引用他的话，不能说是金科玉律，但是也给了我们许多的启发，进行了一次次的思想的启迪。他的书被人们广泛接受，还有一个比较重要的原因，我想就是他的书具有很强的可读性。直白的语言往往蕴含着他自己的教育思想，仔细捉摸，便会大有深意。在《帕夫雷什中学》这本书里他说了自己平常的教学活动，列举了许多实例，而不是让读者泡在大量的专业术语之中，不知所云。这次读《帕夫雷什中学》，主要读的是其中的德育部分，看看苏霍姆林斯基对德育的理解。他在书中的第四章提到德育，并分为七个小节对德育进行论述，介绍自己的德育实践。在这里，我先说明一下，他的七小节的标题。

1、公民基——道德教育的基本环节；

2、从道德概念到道德信念的途径；

3、信念在道德成熟时期如何发展和巩固；

4、社会定向—信念形成过程中最重要的因素之一；

5、敏感性和同情心的培养；

6、培养诚实和荣誉感；

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7、培养男女青年相互关系的道德美感