细胞活性筛选实验

实验计划

实验目的：采用HEK293/α1D-AR/Gα16细胞模型，通过钙流实验评价关黄柏的四个血中移行成分小檗碱、黄柏内酯、黄柏酮及木兰碱对α1D型肾上腺素能受体的阻滞作用，表征成分的抗前列腺炎潜在活性；在22RV1人前列腺癌细胞上，通过MTT及相关分子生物学分析评价以上四种血中移行成分的治疗前列腺癌活性。

第一章 关黄柏血中移行成分抗前列腺炎活性评价 1 实验材料 1.1 仪器与试剂 1.1.1 实验仪器： CO2培养箱 紫外消毒柜 倒置荧光显微镜 倒置显微镜 超微量分光光度计 离心机 干燥箱 荧光读板仪 低温离心机 生物安全柜 电子分析天平 超纯水机 离心机（小） 电泳仪 电泳成像仪 荧光PCR仪 梯度PCR仪 磁力搅拌器

SANYO 三洋 泰州安康 OLYMPUS OLYMPUS 元仪 卢湘仪 上海一恒 PerkinElmer Hettich HDL

梅特勒-托利多 优普 Thermo Bio-Rad Bio-Rad Bio-Rad Bio-Rad IKA

立式蒸汽压力灭菌器 水浴锅 流式细胞仪 1.1.2 实验材料：

上海博讯 IKA 默克密理博

HEK293/α1D-AR/Gα16稳转细胞系，22RV1人前列腺癌细胞（ATCC

2012级硕士研究生期末考题

(1) 请列举5种转基因动物可用于老年痴呆药物研究，并简要说明它们的特征和应用范围（5分）

i APP转基因小鼠：

病理特征：APP水平是正常鼠的6倍， Ab增高10-14倍，出现淀粉样血管病变，脂质氧化损伤，超氧化物歧化酶增加 。行为学特征：9-10月龄小数空间辨识能力受损。

应用范围： APP 转基因鼠可用于抗老年痴呆中药的药效评价、活性筛选以及作用机制的研究。 ii APOE小鼠

特征：该模型的转基因小鼠动脉壁损伤严重,内皮细胞出现受损、变质、脱落,细胞内连接不紧密。内皮下间隙增宽,内弹力膜破坏和消失；中膜平滑肌结构破坏,合成型平滑肌较多。

应用范围：可用于模拟小鼠老化过程中动脉粥样硬化进程，以及药物等因素对动脉粥样硬化进程的影响。

iii 神经组织特异表达CTF1转基因小鼠

特征：转入的CTF1基因在脑组织的表达水平均高于同龄对照小鼠，CTF1转基因小鼠大小脑组织基本结构形态与正常小鼠对照没有异常。

应用范围：用于研究CTF1生物学功能与老年痴呆等疾病发病机制的关系。 iv 快速老化SAM-P小鼠

特征： 老化迅速，且其海马甲醛含量随老龄化进程而增加。

应用范围：研究内源性甲醛异常蓄积与记忆衰退关

2012级硕士研究生期末考题

(1) 请列举5种转基因动物可用于老年痴呆药物研究，并简要说明它们的特征和应用范围（5分）

i APP转基因小鼠：

病理特征：APP水平是正常鼠的6倍， Ab增高10-14倍，出现淀粉样血管病变，脂质氧化损伤，超氧化物歧化酶增加 。行为学特征：9-10月龄小数空间辨识能力受损。

应用范围： APP 转基因鼠可用于抗老年痴呆中药的药效评价、活性筛选以及作用机制的研究。 ii APOE小鼠

特征：该模型的转基因小鼠动脉壁损伤严重,内皮细胞出现受损、变质、脱落,细胞内连接不紧密。内皮下间隙增宽,内弹力膜破坏和消失；中膜平滑肌结构破坏,合成型平滑肌较多。

应用范围：可用于模拟小鼠老化过程中动脉粥样硬化进程，以及药物等因素对动脉粥样硬化进程的影响。

iii 神经组织特异表达CTF1转基因小鼠

特征：转入的CTF1基因在脑组织的表达水平均高于同龄对照小鼠，CTF1转基因小鼠大小脑组织基本结构形态与正常小鼠对照没有异常。

应用范围：用于研究CTF1生物学功能与老年痴呆等疾病发病机制的关系。 iv 快速老化SAM-P小鼠

特征： 老化迅速，且其海马甲醛含量随老龄化进程而增加。

应用范围：研究内源性甲醛异常蓄积与记忆衰退关

MTT法活性筛选步骤

材料 试剂：

二甲亚砜（DMSO）分析纯 灭菌PBS, pH 7.4

MTT储存液（5mg/mL）：配制于灭菌PBS，-20摄氏度保存 工作液MTT：储存液用灭菌PBS稀释5倍使用。

MTT法筛选步骤 一、接种细胞

1. 将培养在100mm培养皿的对数生长期细胞去掉培养基，用5ml灭菌PBS洗涤一次 2. 去掉PBS，用胰酶消化制成单细胞悬液

3. 用血球计数板计数细胞悬液浓度，根据需要接种细胞量，吸取相应体积细胞悬液，用

培养液稀释至相应体积，混匀，使细胞浓度为5×104/ml.

4. 向96孔细胞培养板中每孔加入100ul细胞稀释悬液，空白组加入等量培养液，未加细

胞悬液的孔加入等量PBS缓冲液。 5. 培养板放入37℃，5% CO2培养箱中培养24h。

接种前的细胞必须状态良好，且不能太密集。否则不能接种。

接种时要不时摇晃细胞悬液，保证接种密度均匀。接种密度不均匀是造成误差的主要原因。

二、药物准备、药物处理

实验前开紫外照射细胞间、超净台及配药用离心管。 1. 待测样品用DMSO配成浓度为50mg/ml母液。

2. 用培养液将配好的50mg/ml母液稀释至100ug/ml，再用100ug/ml药物稀释成不同浓

度（

转染细胞的稳定筛选 1、药物筛选前的准备

药筛前应确定药物筛选浓度，不同细胞系具有不同的药物敏感度，因此在筛选前应该用在药物浓度范围内设定浓度梯度来确定筛选稳定克隆的药物浓度。药物浓度一般确定为能使未转染细胞在7天之内全部死亡，如G418一般需要7天，而puro一般时间很短，只需要3-4天即可。 2、药物筛选注意事项 （1）药筛的时间

加药时间一般为转染后48h。但由于慢病毒表达较慢，因此利用慢病毒感染将质粒转入细胞的方法，加药时间一般为72h 空白对照

加药筛选时，最好设置空白对照，即未转染细胞同时加药，待空白对照中细胞全部死亡，转染组中不具有抗药性的细胞基本药杀完，但还需继续加药。 （2）换液

如果加药后，细胞死亡较多，需及时换液，以防死细胞释放有害物质导致具有抗药性的细胞死亡。另外，随着细胞的代谢，抗生素的活性会降低，因此，每隔3-5天应更换一次抗生素筛选培养液。 3、克隆筛选注意事项

若转染的质粒带有荧光标记，不管是以下哪种筛选克隆的方法，都应该选择带有荧光较强的细胞克隆，因为加药筛选时，可能会产生耐药性的细胞，因此最好选择带有荧光较强的细胞。若是转染的质粒不带有荧光，那么只能盲挑。不管是带有或者不带有荧光标记，都应该挑出克隆

第29卷　第2期西北农林科技大学学报(自然科学版)

().29No.2Vol

56种植物抑菌活性筛选试验

冯俊涛,石勇强,张　兴

(西北农林科技大学无公害农药研究服务中心,陕西杨陵712100)

Ξ

　　[摘　要]　以小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌和苹果炭疽病菌为供试菌种,对56种植物的60种丙酮提取物进行了抑菌活性筛选。结果表明,芦苇、龙葵等35种提取物对至少1种病菌的菌丝生长抑制率大于60%,芦苇、胡颓子等26种提取物对苹果炭疽病菌孢子的萌发有60%以上的抑制作用;其中莴苣、苍耳、苦参、苦豆子等8种植物对供试病菌菌丝生长和苹果炭疽病菌孢子萌发的抑制作用较强,抑制效果均在80%以上,值得进一步研究开发。

[关键词]　植物源杀菌剂;抑菌作用;活性筛选

[中图分类号]　S482.2+92　　　　　　　[文献标识码]　A

[文章编号]100022782(2001)022065204

　　从植物中寻找抑菌活性物质,是开发、研制新型杀菌剂的热点之一。MaruzzellaheBalter对多种精油杀菌活性系统的测试发现,多种植物香精油能抑制真菌的生长[1],在多种植物中普遍存在的小孽碱能有效地防治马铃薯晚疫病[2],李重九等从韭菜中物[3],],经结构鉴定、人工模拟合成,成功

　万方数据

　万方数据

　万方数据

南极微生物的分离及抗肿瘤活性筛选

作者：朱天骄， 顾谦群， 朱伟明， 方玉春， 刘培培， ZHU Tian-jiao， GU Qian-qun， ZHU Wei-ming， FANG Yu-chun， LIU Pei-pei

作者单位：海洋药物教育部重点实验室,中国海洋大学海洋药物与食品研究所,山东,青岛,266003

刊名：

中国海洋药物

英文刊名：CHINESE JOURNAL OF MARINE DRUGS

年，卷(期)：2006,25(1)

被引用次数：6次

参考文献(8条)

1.张波涛;缪锦来;李光友极地微生物活性物质研究进展[期刊论文]-海洋科学 2004(02)

2.Alan B;Alan W;Michael G search and discovery strategies forbiotechnology:the paradigm Shift[外文期刊] 2000(03)

3.Mark B;John B A molecular phylogenetic survey of sea-ice microbial communities[外文期刊] 2001(03)

4.David N;Matthew M;Noel WD C

实验一 活性炭吸附实验

一、实验目的：

（1）加深理解吸附的基本原理。

（2）掌握活性炭吸附公式中常数的确定方法。

二、实验原理：

当活性炭对水中杂质吸附时，会同时发生吸附和解吸现象，当吸附和解吸处于平衡状态时，称之为吸附平衡，这是活性炭和水之间的溶质浓度具有一定的分布比值，描述吸附容量qe与吸附平衡时溶液浓度C的关系常用Fruendlich吸附等温式来表达：

qe=kC1/n

qe：吸附容量（mg/g）

k：与吸附比表面积、温度有关的系数 n：与温度有关的系数 n＞1 C：吸附平衡时溶液浓度（mg/L）

这是一个经验公式，通常用图解方法来求k、n值，方法是将上式取对数变成线

性关系：lgqe=lg

c0?c1= lgC + lgk nmC0：水中被吸附物质原始浓度（mg/L） C：被吸附物质的平衡浓度（mg/L） m：活性炭投加量（g/L）

三、实验设备及仪器仪表：

1、振荡器或摇床 2、pH计 pHS型 3、活性炭、甲基橙 4、分光光度计、

5、温度计、三角烧杯、漏斗、1000mL烧杯、50mL容量瓶等。 四、实验步骤：

（1）甲基橙标准曲线制作：用吸量管分别吸取0.3、0.4 、0.5、0.6、0.7、0.8m

实验一细胞的凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品

1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。

四、实验步骤

1２％鸡血红细胞悬液制备

取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备

土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min） 3 细胞凝集反应

制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管

下面是是大学物理实验下学期的筛选电阻的实验，因为教材上没有，所以结合老师的讲解和自己的总结，做出了下面的实验内容，比较详细，希望对大家有所帮助，谢谢。

实验4.10 筛选电阻（讲义）

实验要求:

现需要在100只阻值在 700?到1200?之间的电阻中筛选出阻值为1000?的电阻，要求不确定度不高于1%。并进一步对筛选出的这些电阻进行分组，使得每组内的电阻相互之间阻值的差别不高于 0.1%。为了使筛选既快速、准确又经济的目的，可考虑设计自搭惠斯通电桥、并利用电桥灵敏度的概念对电阻进行筛选。

设计原理：(见直流电桥测电阻实验) 1、电桥平衡时： Rx?2、电桥灵敏度： 定义 S测量?(R2R1Rs

?n?RsRs) ， 分析计算 S理论?Sg?URT,其中RT?R1?R2?RS?Rx

3、本实验中引起不确定度的主要原因有： （1）电桥灵敏度引起的不确定度： Er1??Rx2Rx?Rx1Rx?(???RsRs2??nS测量?R2R22

?RSRS （2）电阻箱阻值不确定度： Er2??R1R1)?()?()

2（本实验中电阻箱级别为 0.1，电阻箱阻值不确度可表示为?R