离子交换高效液相色谱法原理

高效液相色谱法原理与应用参考书 《高效液相色谱及其应用》 《液相色谱检测方法》 《实用高效液相色谱法的建立》

第1章 色谱基本原理一、色谱法概述1. 2. 3. 4.

色谱法的定义与特点 色谱法的分离原理 色谱法的特点 色谱法的分类

1.色谱法的定义

茨维特的实验

色谱分离效果图

因此 色谱法是一种分离方法。– 它的特点是：有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动。

Chromatography 将色谱法用于分析中，则称为色谱分析。– 色谱分析是一种分离、分析法。

2、色谱法分离原理 当流动相中所携带的混合物流过固定相 时，就会和固定相发生作用(力的作用)。

由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差 异。因此在同一推动力作用下，不同组 分在固定相中的滞留时间有长有短，从 而按先后不同的次序从固定相中流出。6

3、色谱法的分类

按流动相状态的不同，可分为 气相色谱法 (GC) 液相色谱法 (LC) 超临界流体色谱 (SFC)

什么是气相色谱法？ 以气体为流动相的色谱法 Gas Chromatogaphy,简称GC 适合分离分析易汽化(在- 190℃-500℃范围内有 0.2-10mmHg的蒸气压的)稳定、不易分

高效液相色谱法习题

一、思考题

1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。 2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？

6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？

7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？

8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？

9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?

10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？

11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？

14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？ 15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？ 16．以液相色谱进行制备有什么优点？

二、选择题

1．液相色谱适宜的分析对象是（ ）。

A

第二十章 高效液相色谱法

思考题和习题

1． 简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。

相同点：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测 不同点：

GC 分析对象及范围 流动相的选择 操作条件 加温常压操作 流动相为有限的几种“惰能气化、热稳定性好、且沸性”气体，只起运载作用，对点较低的样品，占有机物的20% 组分作用小 溶解后能制成溶液的样品，流动相为液体或各种液高沸点、高分子量、难气化、离体的混合。它除了起运载作用HPLC 子型的稳定或不稳定化合物，占外，还可通过溶剂来控制和改有机物的80% 进分离。 室温、高压下进行

2．何谓化学键合相？常用的化学键合相有哪几种类型？分别用于哪些液相色谱法中？

采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上，所形成的填料称为化学键合相。优点是使用过程不流失，化学性能稳定，热稳定性好，适于作梯度淋洗。

目前常用的Si-O-Si-C型键合相，按极性分为非极性，中等极性与极性三类。①非极性键合相：常见如ODS键合相，既有分配又有吸附作用，用途非常广泛，用于分析非极性或弱极性化合物；②中等圾性键合相：常见的有醚基键合相，这种键合相可作正相或反相色谱的固定相，视流动相的极

高效液相色谱法

(总分60, 考试时间90分钟) 一、单项选择题

1.

欲测定聚乙烯的分子量及分子量分布，应选用下列( )。 A 液-液分配色谱 B 液-固吸附色谱 C 键合相色谱 D 凝胶色谱 答案:D 2.

分离下述化合物，宜采取以下哪些方法?( )

(1)聚苯乙烯分子量分布 (2)多环芳烃 (3) Ca2+、Ba2+、Mg2+ A (1)分配色谱(2)反相色谱(3)阴离子色谱 B (1)凝胶色谱(2)反相色谱(3)阴离子色谱 C (1)凝胶色谱(2)反相色谱(3)阳离子色谱 D (1)凝胶色谱(2)正相色谱(3)阳离子色谱 答案:C 3.

下列哪对固定相/流动相可用来分离溶液中的Ca2+、Mg2+、Cl-和?( )

答案:B 4.

在液-液分配色谱中，下列哪对固定相/流动相的组成符合正相色谱形式?( ) A 甲醇/石油醚 B 氯仿/水

C 石蜡油/正己烷 D 甲醇/水 答案:C 5.

高效液相色谱仪上清洗阀(放空阀)的作用是( )。 A 清洗色谱柱

B 清洗泵头与排除管路中的气泡 C 清洗检测器 D 清洗管路 答案:B 6.

用液-固色谱法分离极性组分，应选择的色谱条件是(

比较气相色谱法与高效液相色谱法分离原理、仪器构造及应用范围的不同点。 一、分离原理：

1.气相：气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。

2.液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 二、应用范围：

1.气相：气相色谱法具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。

2.液相：高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（ 些物质几乎占有

赛分科技离子交换色谱产品具有多种规格的粒径可供选择,小粒径填料产品对样品分离达到高分辨率、稳定的完美效果。

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Content

Introduction (1)

Technical specifications of Proteomix® NP1.7 and Antibodix? NP1.7 (2)

Quality Control Test for Proteomix® SCX NP1.7 4.6 x 30 mm (3)

Quality Control Test for Proteomix® SCX NP1.7 4.6 x 50 mm (3)

Quality Control Test for Proteomix® WCX NP1.7 4.6 x 50 mm (4)

Quality Control Test for Antibodix? WCX NP5 4.6 x 250 mm (5)

Particle Size Comparison for Proteomix® SCX 4.6 x 50 mm (6)

Part

赛分科技离子交换色谱产品具有多种规格的粒径可供选择,小粒径填料产品对样品分离达到高分辨率、稳定的完美效果。

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Quality Control Test for Proteomix® WCX NP1.7 4.6 x 50 mm (4)

Quality Control Test for Antibodix? WCX NP5 4.6 x 250 mm (5)

Particle Size Comparison for Proteomix® SCX 4.6 x 50 mm (6)

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高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,具有速度快、分辨率高、灵敏度高、样品量少、容易回收和色谱柱可反复使用等优点。阐述用高效液相色谱检测鸡肉制品中莫能菌素残留的方法。

维普资讯

动物科学

《现代农业科技}0 7第 2 20年 1期

高效液相色谱法检测鸡肉串莫能菌素的残留李燕鹏杨膺白 李启琳张海涛(广西大学动物科学技术学院，西南宁 5 0 0;大成蓝雷科技北京有限公司 ) 广 3 0 4

摘要高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，具有速度快、分辨率高、灵敏度高、品量少、易回收和色谱柱可反复使用等样容优点。阐述用高效液相色谱检测鸡肉制品中莫能菌素残留的方法。 关键词高效液相色谱；肉制品；鸡莫能菌素；残留

鸡肉因其营养丰富、嫩可口、美价廉而广受赞誉。鲜物 近年来，随着生活水平的提高，们对鸡肉的安全问题日益人关注 .各国政府和国际组织也针对畜牧业中抗生素和添加剂滥用、非法使用违禁药物等现象实施了愈来愈严格的监

洗脱、缩、解，以甲醇一冰乙酸一水作为流动相，浓溶再香草醛为衍生剂，用高效液相色谱一柱后衍生化一紫外检测法测定。32试剂与材料 .

控。目前，对于鸡肉制品中兽药残留的问题，传统的检测手段已经无法满足要求，一些新的检测技术已逐渐被应用到这个领域。

莫能

流动相配制操作规程

1 目的

明确高效液相色谱法流动相的配制过程，保证操作过程的规范性。 2 适用范围

适用于实验室高效液相色谱法流动相的配制。 3 职责

实验室分析人员负责按本规程进行操作。 4 定义

无。 5 内容

5.1 流动相批号的编写原则

流动相的批号按配制日期编制。如批号20150609代表2015年06月09日配制的流动相。 5.2流动相的配制

5.2.1含水流动相和不含水流动相的配制所用量筒应区分开。配制不含水的有机溶剂类流动相所用量筒必须是干燥的，不得有水。

5.2.2根据流动相配制规定的体积比例，在清洁的带塞量筒中分别倒入相应的溶剂；若该流动相需加入适量酸或碱，则戴上一次性手套，用专用注射器吸取规定体积的酸或碱，加入量筒；盖上塞子，摇匀，振摇过程中应注意排气。

5.2.3含盐的缓冲液类流动相的配制应根据流动相配制规定的体积比例，分别称取规定重量的盐于清洁的带塞量筒中，加入适量纯水，振摇；待固体完全溶解后，再加纯水至规定刻度，盖上塞子，摇匀。

5.2.4若该流动相对pH值有特殊要求，根据流动相配制规定的体积比例，用酸/碱调节pH值，用pH计测定，直至流动相的pH值在

高效液相色谱法在食品安全检 测中的应用概况

高效液相色谱法(HPLC)是上世纪60年代末 70年代初发展起来的一种新型分析分离技术。 它是由现代高压技术与传统的液相色谱方法相 结合，加上高效柱填充物和高灵敏检测器所发 展起来的新型分离分析技术，是以经典液相色 谱法为基础，引入了气相色谱的理论与实践方 法，流动相改为高压输送，采用高效固定相在 线检测手段发展而成的分离分析方法，分离机 制是靠被分离组分的分子与流动相分子争夺吸 附表面活性中心的吸附能力差别而分离(可用吸 附系数Ka衡量吸附能力的差异)，是现代分离 分析的重要手段，随其分离检测技术的日益完 善，已被广泛应用于各个学科中。

由于它只要求样品能制成溶液，而不需要 气化，因此不受样品挥发性的约束。对于挥发 性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物 以及离子型化合物尤为有利，如氨基酸、蛋白 质、生物碱、核酸、甾体、脂类、维生素、抗 生素等分子量较大，沸点较高的合成药物以及 无机盐类。

高 效 液 相 色 谱 仪

随着一些样品前处理新技术，如固相萃取 (SPE)、固相微萃取(SPME)、基质固相分散萃取 (MSPDE)、超临界流体萃取(SFE)、凝胶渗析萃取 (GPC) 技术相继出现并很快推广，以及