情绪自测表SDS

贝曲花精

贝曲花精是医生发明的，选取的情绪是和生理状态最有关系的38种情绪。这些情绪也是一个相对完整的体系，对应全身主要的生理功能。只要身体不好，这些情绪都有。要彻底治疗和保健，最有效的食用方法是按照脉轮花精的分类和顺序来吃。从根轮到顶轮可以彻底、全面地清理所有的基础负面情绪，改善所有基础的生理功能。

花精消除情绪只是初步的作用，因为大部分的情绪处于我们感觉不到的状态，和生理功能的病变是对应的。因此吃花精感觉好了以后，还要继续吃，直到身体完全健康才是花精疗法的最终目的。

花精疗法是精微疗法，花精的能量是中脉的，也就是健康时的平衡能量，所以吃再多，结果也是平衡的状态。情绪从出生就开始累积在身体内，只要当时没有消除，就会保留在体内。疾病、心理，灵性的原因会随时产生情绪，所以我们体内累积的情绪是相当多的。几十年的累积，可能在几年内消除，已经是相当快了。治疗的快慢取决于吃的次数，越多越好。花精的作用类似按摩，只是改善生理功能，没有提供任何物质。

脉轮花精的分类是贝曲医生按情绪的相似性分的，和脉轮的对应关系是后来的瑜伽修炼者发现的。如果你不了解脉轮，也没关系，因为脉轮是对应生理系统、情绪和意识的，我们先从改善情绪、改善生理功能入手，脉轮的灵量就会自

用于测试性目标,可重复测试以了解自己目前的目标

本测试来源于《小强升职记》这本书中。帮助我们明确自己的职业价值观，更清楚的了解自己。为了测试方便，我做成了自动 望对各位有帮助,dawei.

说明：下面有52道题目，每个题目都有5个备选答案，请根据自己的实际情况或想法，在题目后面圈出相应字母，每题只能选 过测验，你可以大致了解自己的职业价值观倾向。 方法：A — 非常重要，B — 比较重要，C — 一般，D — 较不重要，E — 很不重要 看完问题后，在第一列中填入ABCDE之中的一个，第三列会自动生成数字。全部做完后，请到结果页中查看你的职业价值观评 填写

用于测试性目标,可重复测试以了解自己目前的目标

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测试来源于《小强升职记》这本书中。帮助我们明确自己的职业价值观，更清楚的了解自己。为了测试方便，我做成了自动计算的表格希 对各位有帮助,dawei.

明：下面有52道题目，每个题目都有5个备选答案，请根据自己的实际情况或想法，在题目后面

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶

实验三 SDS-PAGE

【目的要求】

1.了解并掌握SDS-PAGE 电泳原理及方法。 2.掌握垂直板电泳的操作方法。 【实验原理】

十二烷基硫酸钠(SDS)—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)可根据蛋白质分子大小的差别分离蛋白质,并可测定蛋白质的相对分子量,其原理主要与电泳过程中存在的特殊物理效应有关。

1 凝胶的分子筛效应：聚丙烯酰胺凝胶是在催化剂的作用下聚合而成的具有网状立体结构的微孔凝胶，蛋白质颗粒在电场中通过此凝胶时会受到阻碍。大分子蛋白质受到的阻力大，电泳速度小，而小分子蛋白质受到的阻力小，移动快，因而最终在凝胶中得以分离。 2 电荷效应：SDS 是一种表面活性剂，在蛋白样品和凝胶中加入SDS，则能与蛋白质分子上的疏水基团结合，使蛋白质表面覆盖一层SDS 分子。由于十二烷基硫酸根带有大量负电荷，且电荷量远远超过蛋白质分子原有的带电量，因而掩盖了蛋白质分子本身的电荷差别，使各种SDS-蛋白质复合物都带有均等密度的负电荷，分子之间的电荷差异消失。

3 变性效应：SDS 同时还破坏了蛋白质中的非共价键。导致蛋白质

变性，使SDS-蛋白质复合物在溶液中呈现相似的形状。因此蛋白质在SDS-PAGE 凝胶中的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷和形状

SDS-PAGE

一. 实验原理

SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的 SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关， 也就是蛋白质 Mr 的函数。 二. 试剂器材

30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃ 贮存，每

蛋白质条带为什么走到下面逐渐变宽发散？

回答:多数情况是因为小分子在胶里的运动不规律，这种情况常发生在高浓度胶或凝固不 一致的胶里，你可以加大阴极的缓冲液浓度，可能会有点改善

胶凝的快慢不在于TEMED多少，在于APS的量，APS提供自由基，TEMED帮助自由基作用， 是催化剂，对凝固速度影响不是太大，可以试试加大APS的量

丙烯酰胺在凝胶中的百分比 分离胶的分辨范围 15 ％ 15～45 kDa 12.5％ 15～60 kDa 10 ％ 18～75 kDa 7.5％ 30～120kDa 5 ％ 60～212kDa 来源于《蛋白质技术手册》汪家政

每种浓度的变性胶的分离范围不是指能跑出哪个范围分子量的蛋白质，而是指在这个区

1. ＳＤＳ主要的作用有４：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白

分子内的疏水作用、去多肽折叠。所以不能断开二硫键。

ＤＴＴ：还原剂，可以断开二硫键。有些蛋白天然活性结构是二聚体或三聚体，如果加入β－巯基乙醇，它会还原多聚蛋白之间和内部的二硫键，这样，电泳的样品将会被完全还原成单体形式，不加的样品中则会保持聚体的形式，这时候样品在凝胶中的位置就会处于其2倍或3倍分子量的位置了。

2. SDS-PAGE有非还原性（non-reduced）SDS-PAGE和还原性（reduced）SDS-PAGE之分，均是变性条件下的电泳。还原与非还原的区别是在样品处理时加或不加还原剂（如DTT或2-巯基乙醇等）。

非变性（non-denaturing）PAGE又称为天然（native）PAGE，操作的基本过程与SDS-PAGE相似，唯一不同的是在实验过程中尽可能保持蛋白质的天然完整性，包括避免使用任何还原剂、缓冲液中避免使用变性剂（如SDS）、样品的预处理以及电泳过程应在低温下进行等。

3. 我现在经过多方面咨询，问了几个海龟和公司的技术顾问，已经搞明白了，就是这个抗体针对的位点含有二硫键，所以所有的western试剂中都不能含有还原剂（如DTT，

　　01 当我觉得——没有自信，总觉得不如人。

　　我可以这么做——

　　(1)停止批评和责难自己。

　　不断苛责自已，说丧气话的人，通常是对自己不够肯定的人。要对自己温柔点，停止猛烈的批评，是建立自信的第一步，她建议，拿枝笔列出你不断在责骂自己的话语，并且自问看到这些话会有什么感觉，这样的责骂是否对自己有好处。老实说，当然是没有好处，因此，一定要下定决心停止这种责难。如果一时还做不到，不妨先把注意力放在已经做好的部份，告诉自己做得有多好。

　　(2)学习积极正面的自我对话。

　　我们的内心都有一部投影机，每天读出成千上万的画面与情绪，除了要停止负面的批评，还要积极输入一些正面的鼓励。

　　写一张自己的履历表，把所有的优点都列上去，每周浏览一次，做为自我对话的脚本，在忍不住要责骂自己之前，先想想看自己还有哪些优点，没有想象中的糟。

　　(3)每天问自己两个问题：“我的人生有什么是好的?”“还有什么事可以做?”

　　心灵文学作品《自尊心的六根支柱》作者布蓝登则进一步建议，从这两个问题启发自己更有创意的对话，找到自己的价值，才能更肯定自我。

　　(

双向电泳

一、材料

样品：人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH

二、试剂

SDS-PAGE所需试剂 1、30％Acry-Bis (w/v)

29.2％Acry29.2g

0.8％Bis0.8g

加水至100ml溶解，棕色试剂瓶4℃贮存，PH<7，数月后重配

2、10％的SDS贮液 (w/v)

RT保存，因SDS在4℃会析出

3、Tris-HCl buffer

①1.5M的PH8.8的Tris-HCl buffer——分离胶buffer

100ml含Tris18.171g，加DDW至80ml，用浓HCl调PH8.8，再定容至100ml，4℃保存

②1.0M的PH6.8的Tris buffer——浓缩胶buffer：

50ml 含Tris6.057g，加DDW至40ml，用浓HCl调PH6.8，再定容至50ml，4℃保存

4、TEMED

以游离碱形式发挥作用，催化AP形成自由基，故PH较低时，聚合反应受抑制，易吸湿，被氧化，从无色变为黄色，故因密闭4℃保存

5、10％ AP

1g的AP溶于10ml水中，4℃保存，隔周新鲜配置

6、PH8.3 电泳缓冲液1L，RT保存

Tris碱

Gly（25.05） SDS

加水至1L，可不调PH

7、甘油液4℃