胶乳免疫比浊法偏高

附件5

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）

注册技术审查指导原则

本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。

本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。

目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的

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免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色

附件5

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）

注册技术审查指导原则

本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。

本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。

目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的

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免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色

胶乳增强免疫比浊法检测血清脂蛋白脂肪酶的研究

Tetsuo Machida等 日本群马大学医学研究院临床医学实验部

摘要

背景 脂蛋白脂肪酶（LPL）通过催化甘油三酯的水解在富含甘油三酯的脂蛋白代谢中起关键作用。血清

脂蛋白脂肪酶的含量测定有利于脂类代谢紊乱的诊断，但目前在临床上没有快速测定LPL的方法。

方法 使用胶乳颗粒固定化的LPL单克隆抗体，我们探索了一种快速灵敏的胶乳增强免疫比浊法（LTIA）

测定LPL的方法。实验使用生化分析仪器日立7700P进行检测，同时进行了ELISA平行实验来评价实验数据的可靠性。

结果 通过稀释实验得到0.5-800ng/ml的校准曲线。批内变异系数被控制在2.2-2.5%。含有潜在干扰物质

胆红素F和C以及血红素、甘油三酯、类风湿因子的样本未观察到干扰性。LTIA与ELISA的结果具有很好的相关性（n=40， r=0.967， y=0.99x-1.86）。肝素处理前的血清LPL正常参考范围值为50-77 ng/ml，肝素处理后血浆LPL正常参考范围值为354-410 ng/ml。

结论 本文LTIA法既可用于测定肝素处理前的血清LPL值，也可用于测定肝素处理后血浆LPL值。本方

法与ELISA相比更为方便快捷，

胶乳免疫比浊法相关知识

很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。本人总结了部分胶乳微球标记技术，并加以分类，以便朋友们查阅：

胶乳微球物理吸附：

反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5.0以上时保持稳定。

带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。 反应步骤：

1. 用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml； 2. 用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；

3.

胶乳免疫比浊法相关知识

很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。本人总结了部分胶乳微球标记技术，并加以分类，以便朋友们查阅：

胶乳微球物理吸附：

反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5.0以上时保持稳定。

带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。 反应步骤：

1. 用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml； 2. 用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；

3.

非标记抗体酶法

由于酶标抗体存在一些缺点，例如①酶与抗体间的共价连结可损害部分抗体和酶的活性；②抗血清中的非特异性抗体被酶标记后，与组织成分结合，可致背景染色等。为此Sternberger等在酶标法的基础上，发展了非标记抗体酶法。包括酶桥法（Enzyme Bridge Method）和过氧化物酶抗过氧化物酶法（Peroxidase Antiperoxidase Method, PAP法）。现分述如下。 （一）酶桥法

1．基本原理 首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体，然后使用第二抗体作桥，将抗酶抗体连结在与组织抗原结合的第一抗体上，再将酶结合在抗酶抗体，经呈色显示抗原的分布。在此过程中，任何抗体均未被酶标记，酶是通过免疫学原理与抗酶抗体结合，避免了共价连结对抗体和酶活性的损害，提高方法的敏感性，且能节 省第一抗体的用量。

2．染色步骤 主要程序如图4-4

图4-4 酶桥法主要染色步骤

（1）切片准备及第一抗体孵育前处理同间接法，第一抗体（假设来自种属A）孵育24h（4℃）。第一抗体的稀释度可高些，使抗体的两个Fab段均与组织抗原结合，较牢固，漂洗时不易丢失。

（2）切片与第二抗体（也称桥抗体，抗种属a I

类风湿因子（RF）测定试剂盒（胶乳凝集法）

【产品名称】

通用名称：类风湿因子（RF）测定试剂盒（胶乳凝集法） 商品名称：类风湿因子（RF）测定试剂盒（胶乳凝集法）

英文名称：Rheumatoid Factoid Reagent Kit（Slide Latex Agglutination Test）

【包装规格】每包装盒为：胶乳液5ml；阳性对照0.5ml；阴性对照0.5ml 【临床意义】对血清中RF定性或半定量测定，做辅助诊断用。 【检验原理】本试剂胶乳液是由纯化的人IgG和羧化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶

乳。RF胶乳的灵敏度调整到20IU/ml，超过上述滴度即出现肉眼可见凝集颗粒，试用本试剂血清标本不需要稀释即可直接测定。

【主要组成成份】

胶乳液成份：类风湿因子胶乳、牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液 阳性对照成份：羊抗人IgG抗血清、牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液 阴性对照成份：牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液

不同批号试剂盒中的乳胶液、阳性对照和阴性对照不能混用。

【储存条件及有效期】

储藏温度2-10℃，切勿冷冻。有效期一年。

【适用仪器】

手工操作

【样本要求】

经离心获得新鲜血清样本，贮存于2-8℃，48小时内使用，时间过长须冰冻贮存。

3 Western blot

3.1 试剂配制

1）30%聚丙烯酰胺储备液（Acr/Bis）：

丙烯酰胺（Acr），29g；N,N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis），1g，去离子水溶解，37℃水浴助溶，定容至100mL。0.45μm滤器过滤，棕色瓶4℃避光保存。 2）10%十二烷基硫酸钠（SDS）：

SDS，10g；H2O，80mL。68℃加热溶解，浓HCl调pH至7.2，定容至100mL，室温保存。

3）10%过硫酸铵（AP）：

AP，1g；H2O，10mL。避光，4℃保存。（4℃2周） 4）分离胶缓冲液（1.5MTris-HCl pH8.8）：

Tris，18.17g；H2O 80mL。用浓HCl调pH至8.8，定容至100mL，4℃保存。 5）浓缩胶缓冲液（1.0MTris-HCl pH6.8）：

Tris，12.11g；H2O 80mL。用浓HCl调pH至6.8，定容至100mL，4℃保存。 6）电泳缓冲液（10×）：

甘氨酸（Glycine），188g；Tris 30.2g；SDS，10g；H2O，800mL。调节pH至8.3，定容至1L，4℃保存（用时稀释为1×）。 7）5×SDS-PAGEloadingBuffer（5mL）：

1MT

全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的检测结果比较

王胜虎1） 陈琪 1） 李媛 2）

1）昆明医科大学附属延安医院检验科，云南昆明 650051； 2）昆明医科大学海源学院基础部，云南昆明

650500

[摘要] 目的 通过比对全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法检测临床标本结果的相关性及符合率，探讨更科学可靠的检验方法。 方法 随机抽取90份临床与体检标本，经Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪和手工加样操作的IMARK2酶标仪测定甲肝、乙肝5项、丙肝、戊肝2项、TP及HIV的结果，并对结果进行相关性及合率的分析 。结果 对所检测项目中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、TP、HIV的相关性系数r>0.9 ，其数据显示相关性较好；而HAV-IgM、HBeAb、HBcAb、HCV、HEV-IgM、HEV-IgG、的相关性系数为 0.9>r >0.6 ；Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法操作比对90个样本的11项检测结果总符合率达96.9％。 结论 全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法有较好的相关性。全自动酶联免疫分析仪的使用还大大的

尿酸偏高的原因

在验血报告单有一个项目为尿酸，当人们被查出尿酸高时，很多人还不知道是怎么回事，也不知道尿酸是什么，能判断什么呢？这些也是他们心中的疑问。在这做一个详细介绍，尿酸高是怎么回事。

在体检中，验血报告单有一个项目为尿酸，正常参考值范围为：150-440 umol/L。

医学界临床研究结果证实，高血压病患者的尿酸过多，中风的几率越高。 尿酸与中风有关

此外，血液中尿酸含量最高的25%病人中，中风、心血管坏死及心脏病的病发率，较尿酸含量最低的25%病人来得高。该研究在7个国家及地区的945个医药中心同步进行，共9193名左心室肥大症的高血压患者参与，约5年后得出结果。高血压者容易中风，90%患者会因血管阻塞而中风，而且其中约一半有高尿酸的问题，但是，不少高血压者却经常忽略了尿酸问题。

尿酸是嘌呤代谢产物

尿酸是指人体内嘌呤(purine)代谢的最终产物。它会使体内积聚过多尿酸，造成代谢失调。

通常，嘌呤在肝脏氧化代谢后才变成尿酸，再由肾脏和肠道排出。基本上，嘌呤的生产量和排泄量大约相等。

嘌呤的生产量，三分之一来自食物，其余是体内自行合成；排泄量则是三分之一由肠道排出，三分之二从肾脏排出。如果生产过多或排泄不出，尿酸囤积体内，会导致血液中尿酸值升高。