transwell细胞迁移细胞分布不均

迁移实验（cell migration assay）

实验材料

（1）Transwell小室，孔径8μm (Corning) ,细胞培养板24孔板 ,培养板应当与购买的Transwell小室相配套

（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10％血清培养,PBS，2.5?S （3）固定液：4%多聚甲醛固定液或者甲醇 （4） 染色液：Giemsa染液或结晶紫染色

（5）其他：小镊子，棉棒 1材料准备：

无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1制备细胞悬液

①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。

②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。 2.2接种细胞

①取细胞悬液100μl加入Transwell小室。细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平； ②24孔板下室一般加入600μl含2.5?S的培养基，特别注意的是，下

迁移实验（cell migration assay）

实验材料

（1）Transwell小室，孔径8μm (Corning) ,细胞培养板24孔板 ,培养板应当与购买的Transwell小室相配套

（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10％血清培养,PBS，2.5?S （3）固定液：4%多聚甲醛固定液或者甲醇 （4） 染色液：Giemsa染液或结晶紫染色

（5）其他：小镊子，棉棒 1材料准备：

无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1制备细胞悬液

①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。

②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。 2.2接种细胞

①取细胞悬液100μl加入Transwell小室。细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平； ②24孔板下室一般加入600μl含2.5?S的培养基，特别注意的是，下

迁移实验（cell migration assay）

实验介绍

细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备：

可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1基质胶铺板：

用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使

迁移实验（cell migration assay）

实验介绍

细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备：

可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1基质胶铺板：

用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使

第一章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 一、光学显微镜技术

1、普通光学显微镜 结构特点 分辨率 样品片的类型 普通光学显微镜由3部分构成：

①照明系统；②光学放大系统；③机械装置。

显微镜的质量不仅决定于放大倍数，还取决于显微镜的分辨力。

分辨力是指显微镜或人的眼睛在25cm处能分辨物体最小间隔的能力，分辨力的大小决定于光波的波长和镜口率以及介质的折射率，可以下公式表示：

R=0.61λ /N．A N．A．＝ｎ.sinα/2

式中：n=介质折射率；α=镜口角（聚焦点对物镜镜口的张角）。 普通光学显微镜的分辨率是怎样得知的?

制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65--1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。镜口角总是要小于180?，所以sin a/2的最大值必然小于1。对于干燥物镜来说，介质为空气，其折射率为1，镜口率一般为0.05-0.95；油镜头用香柏油为介质，其折射率为1.515。镜口率可接近1.5。 可见光波长为390-760nm，因此普通光学显微镜分辨力不会小于0.2μm。 显微镜的两个重要的技术指标

2、荧光显微镜（fluorescence microscope

实验一细胞的凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品

1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。

四、实验步骤

1２％鸡血红细胞悬液制备

取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备

土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min） 3 细胞凝集反应

制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管

　　我们知道，我们的身体是一个由细胞构成的王国，极其精密复杂，同时又高度有序。任何伟大的王国都既需要能干建设者，也需要勇猛防卫兵，我们身体细胞王国也不例外。

　　两者功能有什么不同

　　当我们的人体还在成长时，干细胞是细胞王国的建设者，通过分化源源不断提供新生细胞，增加我们身体细胞的数量;当我们成年后身体不再成长，干细胞又会扮演细胞王国的维护者，及时替换和更新衰老或受损的细胞。

　　干细胞是建设者

　　当有外敌入侵，如细菌和病毒，免疫细胞就会扮演细胞王国的军队，快速反应，将其清除。如果细胞王国中出现叛变分子，如正常细胞突变为癌细胞，免疫细胞就会扮演安保系统，将其识别并清除。

　　免疫细胞是防卫者

　　当外敌入侵过多，或王国内叛变分子太多，免疫细胞没有能力全部清除时，我们的身体就会生病。

　　两者如何分类

　　现在，让我们来进一步分别了解干细胞和免疫细胞，他们都分哪些种类，不同种类功能有何差异：

　　(1)按照分化潜能分类，干细胞分为：全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。

　　如果把人体比喻为一棵树，深埋大地的种子就是全能干细胞，就如同种子可以发育成长为一颗参天大树。

　　大树的主要枝干可以比喻为多能干细胞，如脐带/胎盘间充质干细胞，可以向

八、伟人细胞

学习目标

1、简练概括并较详细复述文章主要情节；通过深入阅读分析人物特点，理解文章主题；

品味本文诙谐幽默、轻松活泼的语言。

2、默读课文，了解小说故事情节；复述课文，培养学生的概括能力；通过合作探究，能明确人物鲜明的性格特点。

3、引导学生感悟以普通人的身份，脚踏实地，从小事做起，才能逐步向理想境界迈进，才能成就一番伟大的事业的道理。

学习重难点：培养学生的概括能力 一、情景导学，提出问题 二、自主学习，尝试解决 1、给下列词语注音：

豁达 自诩 荟萃 跻身 白痴 履历 2、知作者介绍

秦文君，当代最出色的儿童文学作家之一，以创作儿童小说闻名。其作品往往从儿童视角出发，展现儿童的所思所行，语言风趣幽默，且不乏感人之处，非常富于感染力。代表作有《男生贾里全传》，《女生贾梅传》，《小鬼鲁智胜》，《小丫林晓梅》。

3、请你根据拼音写出下列成语或短语中的汉字

道听（tú） 说 一（míng） 惊人 鸡毛（suàn）皮 出谋（huà） 策 其貌不（yáng） 咬文（jiáo） 字 茅塞（dùn） 开 可歌可（qì） 眼（jí）手快

4、初读课文，理解下面词语的意思。 豁达： 洒脱： 迎合：

观察D N A和R N A在细胞中的分布--实验方案(总10页)

-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

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《观察DNA和RNA在细胞中的分布》

实验方案

第二组

目录

一、实验前的思考 (3)

二、背景资料 (3)

1. 核酸是什么 (3)

2. DNA是什么? (3)

3. RNA是什么? (3)

4. DNA的种类和分布 (3)

5. RNA的种类和分布 (4)

6. 染色剂成分 (5)

7. 染色原理 (5)

三、实验原理 (5)

四、实验目的 (6)

五、实验用具及试剂 (6)

六、实验方法及步骤分析 (6)

1. 实验材料 (6)

2. 实验方法 (6)

七、注意事项 ................................................................................................. 错误!未定义书签。

八、附录 (9)

1. 试剂配制方法 (9)

2. 重要仪器的使用方法 (9)

观察DNA和RNA在细胞中的分布

一、实验前的思考

二、背景资料

1.核酸是什么

2.

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。DNA

细胞程序性死亡

在细胞凋亡一词出现之前，胚胎学家已观察到动物发育过程中存在着细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）现象，近年来PCD和细胞凋亡常被作为同义词使用，但两者实质上是有差异的。首先，PCD是一个功能性概念，描述在一个多细胞生物体中，某些细胞的死亡是个体发育中一个预定的，并受到严格控制的正常组成部分，而凋亡是一个形态学概念，至于细胞坏死不同的受到基因控制的细胞死亡形式；其次，PCD的最终结果是细胞凋亡，但细胞凋亡并非都是程序化的。

概念 细胞程序性死亡是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。

而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能。

和细胞坏死的区别 凋亡细胞的主要特征是（参见表15-2）：①染色质聚集、分块、

位于核膜上，胞质凝缩，最后核断裂，细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体（