高效液相色谱分析方法的建立

高效液相色谱分析实验

一、实验目的

1． 了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，掌握HPLC的基本操作 2． 学习苯-甲苯混合物的定性分析方法 3． 评价色谱柱效

4． 了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点； 5． 学习未知样品的定量分析方法。 二、实验原理

不同组分因在互不相溶的流动相与固定相中的分配比不同，当两相做相对运动时，组分在两相之间反复进行多次分配，最终实现不同组分的分离。

色谱仪器的构成：包括高压输液系统、进样系统、分离系统，检测系统等 1．色谱定性分析方法

（1）利用保留值与已知物对照定性

A 保留时间定性 b 峰高增量定性 C 其他方法定性（保留值经验规律定性，文献保留数据定性） 2．色谱定量分析方法

⑴校正因子：a绝对校正因子；b 相对校正因子。 ⑵常见的色谱定量分析方法主要有：

a 归一化法。特点：简单、方便、准确，但要求所有组分必须全部出峰。

b内标法。特点：使用相对校正因子定量，结果准确，但操作繁琐，由于需要增加内标物，增大分离的难度。

c 标准曲线法（外标法）。简单、方便，由于采用绝对校正因子定量，结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。

d 内标标准曲线法。 三、仪器与试剂

LC-1000型高效液

仪器分析自测试题

第3章 高效液相色谱法

一、判断题（对的打√, 错的打×）

1、高效液相色谱适用于大分子，热不稳定及生物试样的分析。 （ √ ） 2、液相色谱指的是流动相是液体，固定相也是液体的色谱。 ( ) 3、高效液相色谱中通用型检测器是荧光检测器。 ( ) 4、液相色谱中常采用改变流动相的种类和配比的方法来提高柱的选择性。 ( √ )

5、在液相色谱中，速率方程中的涡流扩散项可以忽略不计。分子扩散相 ( ) 二、选择题

1、液相色谱适宜的分析对象是 （ B ） A、低沸点小分子有机化合物 B、高沸点大分子有机化合物 C、所有有机化合物 D、所有化合物

2、高效液相色谱实现高效、快速分离与分析的重要原因是 （ D ） A、采用了高压输液泵和微粒固定相 B、采用了梯度淋洗和恒温系统 C、采用了微粒固定相和和恒温系统 D、采用了高压输液泵和梯度淋洗

3、高压

一般情况下，HPLC分离方法的建立遵循以下步骤：

(1)了解样品的基本情况

所谓样品的基本情况，主要包括样品所含化合物的数目、种类(官能团)、分子量、pKa 值、UV光谱图以及样品基体的性质(溶剂、填充物等)、化合物在有关样品中的浓度范围、样品的溶解度等。

(2)明确分离目的

①是分析组分还是制备样品；

②是否已知样品所有成分的化学特性，或是否需做定性分析；

③是否有必要解析出样品的所有成分(比如对映体、非对映体、同系物、痕量杂质)；

④如需做定量分析，精密度需多高；

⑤建立的方法将适用几种样品分析还是许多种样品分析；

⑥将使用最终方法的常规实验室中已有哪些HPLC设备和技术。

(3)了解样品的性质和需要的预处理

除非样品是适于直接进样的溶液，否则，高效液相色谱分离前均需进行某种形式的预处理。有的样品需加入缓冲溶液以调节pH值；有的样品含有干扰物质或“损柱剂”而必须将其去除。此外，为了保证最终的样品溶液与流动相的成分尽量相近，最好用流动相溶解(或稀释)样品。

(4)检测器的选择

不同的分离目的对检测的要求不同，如测单一组分，理想的检测器应仅对所测成分响应，而其他任何成分均不出峰。另外，如果目的是定性分析或是制备色谱，则最好有通用型检测器，以便能检测到混合物中的各种成分

高效液相色谱分析方法在食 品安全检测中的应用——由青岛“问题西瓜”事件的产生的思考

小组成员：潘子洲、林佳铭、李建聪、 莫如栩、倪铭阳、简丽祥2015年4月21日

新闻原稿近日，山东即墨市、胶州市有市民食用西瓜后出现呕 吐头晕症状，甚至造成一名孕妇胎儿不保。经青岛食 药监部门调查，西瓜来源系海南万宁出产的冰糖黑美 人西瓜，初步判定为“涕灭威”残留超标，该批次 西瓜已销毁。据悉，“涕灭威”为高毒农药，已明令 不得用于蔬果种植。高毒农药具有强渗透性，如果非 法使用，即使西瓜有一层瓜皮保护，也可能农药残留 超标甚至食用后中毒。

涕灭威-概述： 英文名称：Aldicarb;Temek;Carbanolate 化学名称：O-甲基氨基甲酰基-2-甲基-2-甲硫基丙肟 其他名称：铁灭克(Temik);丁醛肟威；神农丹 分子式：C7H14N2O2S 分子量：190.27 结构式：

外观与性状：有硫磺 味的白色结晶 熔点：100℃ 密度：1.195(25/20℃) 蒸汽压：25℃ 溶解性：室温下，水中溶解度为6000ppm(0.6%),几乎 不溶于乙烷，而溶于大多数有机溶剂，如丙酮400g/L,氯仿 350g/L,甲苯100g/L(20℃)

稳定性

高效液相色谱分析方法在食 品安全检测中的应用——由青岛“问题西瓜”事件的产生的思考

小组成员：潘子洲、林佳铭、李建聪、 莫如栩、倪铭阳、简丽祥2015年4月21日

新闻原稿近日，山东即墨市、胶州市有市民食用西瓜后出现呕 吐头晕症状，甚至造成一名孕妇胎儿不保。经青岛食 药监部门调查，西瓜来源系海南万宁出产的冰糖黑美 人西瓜，初步判定为“涕灭威”残留超标，该批次 西瓜已销毁。据悉，“涕灭威”为高毒农药，已明令 不得用于蔬果种植。高毒农药具有强渗透性，如果非 法使用，即使西瓜有一层瓜皮保护，也可能农药残留 超标甚至食用后中毒。

涕灭威-概述： 英文名称：Aldicarb;Temek;Carbanolate 化学名称：O-甲基氨基甲酰基-2-甲基-2-甲硫基丙肟 其他名称：铁灭克(Temik);丁醛肟威；神农丹 分子式：C7H14N2O2S 分子量：190.27 结构式：

外观与性状：有硫磺 味的白色结晶 熔点：100℃ 密度：1.195(25/20℃) 蒸汽压：25℃ 溶解性：室温下，水中溶解度为6000ppm(0.6%),几乎 不溶于乙烷，而溶于大多数有机溶剂，如丙酮400g/L,氯仿 350g/L,甲苯100g/L(20℃)

稳定性

实验八 可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析

摘要： 咖啡因是一种具有药理活性的物质，在通常的饮料如咖啡、茶和可乐以

及头痛药、止疼药中都发现有咖啡因的存在。适量食用咖啡因有祛除疲劳、兴奋神经等作用，临床上用于神经衰弱、伤风、偏头痛等疾病的治疗，但大量或长期摄取咖啡因有损人体的健康，如咖啡因自身的毒性，引发心脏病，对人体骨骼状况及钙平衡产生不利影响等状况及钙平衡产生不利影响等本文介绍两种常用的咖啡因检测法，即高效液相色谱法、离心萃取紫外光谱法。并比较两种方法的优缺点，得出测定咖啡因的最佳检测法。

关键词：高效液相色谱法，紫外光谱法，检测 一、 引言

咖啡因又称咖啡碱，是由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱，它属黄嘌呤衍生物，化学名称为1,3,7-三甲基黄嘌呤。咖啡因能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因约为1.2~1.8%，茶叶中约含2.0~4.7%。可乐饮料、APC药片等中均含咖啡因。其分子式为C8H10O2N4，结构式为：

OH3CNNCH3ONCH3N

当前，各种可乐饮料已经成为人们饮食当中摄取咖啡因次数和频率较高的一个重要来源。因此，发展简便、快速、可靠、分析成本低的分析方法来对可乐饮料中咖啡因含量进行测定非常重要。通常

实验八 可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析

摘要： 咖啡因是一种具有药理活性的物质，在通常的饮料如咖啡、茶和可乐以

及头痛药、止疼药中都发现有咖啡因的存在。适量食用咖啡因有祛除疲劳、兴奋神经等作用，临床上用于神经衰弱、伤风、偏头痛等疾病的治疗，但大量或长期摄取咖啡因有损人体的健康，如咖啡因自身的毒性，引发心脏病，对人体骨骼状况及钙平衡产生不利影响等状况及钙平衡产生不利影响等本文介绍两种常用的咖啡因检测法，即高效液相色谱法、离心萃取紫外光谱法。并比较两种方法的优缺点，得出测定咖啡因的最佳检测法。

关键词：高效液相色谱法，紫外光谱法，检测 一、 引言

咖啡因又称咖啡碱，是由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱，它属黄嘌呤衍生物，化学名称为1,3,7-三甲基黄嘌呤。咖啡因能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因约为1.2~1.8%，茶叶中约含2.0~4.7%。可乐饮料、APC药片等中均含咖啡因。其分子式为C8H10O2N4，结构式为：

OH3CNNCH3ONCH3N

当前，各种可乐饮料已经成为人们饮食当中摄取咖啡因次数和频率较高的一个重要来源。因此，发展简便、快速、可靠、分析成本低的分析方法来对可乐饮料中咖啡因含量进行测定非常重要。通常

气相色谱分析试题

一填空

1、 2、 3、 4、 5、 6、

气相色谱谱图中，与组分含量成正比的是峰面积。 正确开启气象色谱仪的程序是先送气后送电。 用色谱法分析时，（外标法）要求进样量特别准确。 色谱法中归一法的优点是（不需要准确进样）。 色谱法的定量参数有（峰高、峰面积）。

色谱定性的依据是：在一定的固定相和一定的操作条件下，任

何一种物质都有一确定的（保留值）。 7、 8、

色谱柱主要有两类：（填充柱和毛细管柱）

气相色谱分析中，把纯载气通过检测器时，给出信号的不稳定

程度称为（噪音） 9、

分配系数只随（柱温）（柱压）变化，与柱中两相（体积）无关。

10、 气相色谱分析用归一化法定量的条件是（样品中的所有组分）都要流出色谱柱，且在所用检测器上都能（产生信号）。 11、 气相色谱柱的老化温度要高于分析时最高柱温（5-10）度，并低于（固定液）的最高使用温度，老化时，色谱柱要与（检测器）断开。

12、 气相色谱分析内标法定量要选择一个适宜的（内标物），并要与其他组分（完全分离）。

13、 气相色谱分析时一种分离分析方法，它的特点是适用于多组分

混合物的（定性）和（定量）分析。

14、 气相色谱定性法，是利用同一种物质在相同条件下，在一根色谱柱上

仪器分析自测试题

第2章 气相色谱法

一、判断题（对的打√, 错的打×）

1．色谱法与其他分析方法之间最大的不同是色谱法的灵敏度高。 （ ） 2．在气相色谱中试样中各组分能够被相互分离的基础是各组分具有不同的热导系数。分配系数（ ）

3．组分的分配系数越大，表示其保留时间越长。 （ √ ） 4．色谱法特别适合混合物的分析。 （√ ） 5．热导检测器属于质量型检测器，检测灵敏度与载气的相对分子量成正比。（ ） 6．塔板理论给出了影响柱效的因素及提高柱效的途径。 （ ） 7．在载气流速比较高(低)时，分子扩散成为影响柱效的主要因素。 （ ） 8．分离温度提高，保留时间缩短，峰面积不变。 （ √ ） 9．某试样的色谱图上出现三个色谱峰，该试样中最多有三个组分。 （ ） 10．分析混合烷烃试样时，可选择极性固定相，按沸点大小顺序出峰。 （ ） 二、选择题

1、在色谱的流出曲线上，相邻两组色谱峰的分离度主要取决于 （ A ） A、分

变 压 器 油 气 相 色 谱 分 析

一、 基本原理

正常情况下充油电气设备内的绝缘油及有机绝缘材料，在热和电的作用下，会逐渐老化和分解，产生少量的各种低分子烃类及二氧化碳、一氧化碳等。这些气体大部分溶解在油中。当存在潜伏性过热或放电故障时，就会加快这些气体的产生速度。随着故障发展，分解出的气体形成的气泡在油里经对流、扩散，不断溶解在油中。例如在变压器里，当产气量大于溶解量时，变有一部分气体进入气体继电器。故障气体的组成和含量与故障的类型和故障的严重程度有密切关系。因此，在设备运行过程中定期分析溶解与由衷的气体就能尽早发现设备内部存在的潜伏性故障并随时掌握故障的发展情况。

当变压器的气体继电器内出现气体时，分析其中的气体，同样有助于对设备的情况做出判断。 二、 用气相色谱仪进行气体分析的对象 氢（H2）、 甲烷（CH4）、 乙烷（C2H6）、 乙烯（C2H4）、 乙炔（C2H2）、一氧化碳（CO）、二氧化碳（CO2）、氧（O2）、氮（N2） 九种气体作为分析对象。

分析九种气体的主要目的 组分 O2 N2 H2 CH4 C2H6 C2H4 C2H2 CO CO2 分 析 的 理 由 主要了解脱气程度和密封好坏，