mbp亲和层析原理

亲和层析 Affinity Chromatography

一、原理

亲和层析是利用生物大分子所具有的专 一亲和力而设计的纯化技术 寻找配基 配基固定化 制成亲和层析柱

基本过程

固相化

+

吸附+ + 洗 脱

解吸+

载体

样品 固相化

再生

常见具有专一性亲和力的生物分子对：酶： 抗体： 细胞： 核酸： 激素或药物： 外源凝集素： 基质类似物，抑制剂，辅酶 抗原，病毒，细胞 细胞表面特异蛋白，外源凝集素 互补碱基序列，组蛋白，核酸聚合酶 受体，载体蛋白 多糖，糖蛋白，细胞表面受体，细胞

(一) 载体的选择1、载体要求： (1)不溶性 (2)渗透性：疏松网状结构，有良好的液 体流动性 (3)化学和机械性能稳定 (4)具备大量能被活化的基因 (5)抗微生物和酶的侵蚀

2、常用载体(1)纤维素 特点：价廉、来源充足 纤维性、非均一性限制大分子的掺入 非专一性吸附严重 用于抗体和酶的纯化 (2)葡聚糖凝胶

特点： 化学及物理性质稳定多孔性比琼脂糖低

(3)琼脂糖凝胶

浓度 商品 2% Sepharose 2B 4% Sepharose 4B 6% Sepharose 6B

凝胶浓度越低结构越疏松 机械强度越低

(4)聚丙烯酰胺凝胶

特点：物理化学性质稳定抗微生物侵蚀能力比琼脂糖强

镍离子金属鳌合亲和层析介质（Ni-NTA）说明书

一、 简介

金属螯合亲和层析介质，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸能与多种过渡金属离子如Cu，Zn，Ni，Co，Fe发生特殊的相互作用，能够吸附富含这类氨基酸的蛋白质，从而达到分离纯化的目的。因此，偶联这些金属离子的琼脂糖凝胶就能够选择性地分离出这些含有多个组氨酸的蛋白以及对金属离子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。半胱氨酸和色氨酸也能与固定金属离子结合，但这种结合力要远小于组氨酸残基与金属离子的结合力。

镍NTA亲和层析介质（Ni-NTA ）具有特异性好、流速快的优点，颗粒粒度均匀，粒径小，并且螯合镍更稳定，能耐受更高的还原剂，物理和化学稳定性好，批次重复性好。本产品已经螯合好镍离子，使用更方便。

2+

2+

2+

2+

3+

二、 性能参数：

特点 基质 配体 配体密度 吸附载量 介质颗粒大小 最大流速 pH范围 保存温度 保存液体 基团密度高，载量大，分辨率高，使用方便 6%的交联琼脂糖凝胶 Ni 20-40μmol /ml 15mg蛋白/ml 45-165μm 600cm/h 3-10，在位清洗时p

镍离子金属鳌合亲和层析介质（Ni-NTA）说明书

一、 简介

金属螯合亲和层析介质，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸能与多种过渡金属离子如Cu，Zn，Ni，Co，Fe发生特殊的相互作用，能够吸附富含这类氨基酸的蛋白质，从而达到分离纯化的目的。因此，偶联这些金属离子的琼脂糖凝胶就能够选择性地分离出这些含有多个组氨酸的蛋白以及对金属离子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。半胱氨酸和色氨酸也能与固定金属离子结合，但这种结合力要远小于组氨酸残基与金属离子的结合力。

镍NTA亲和层析介质（Ni-NTA ）具有特异性好、流速快的优点，颗粒粒度均匀，粒径小，并且螯合镍更稳定，能耐受更高的还原剂，物理和化学稳定性好，批次重复性好。本产品已经螯合好镍离子，使用更方便。

2+

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二、 性能参数：

特点 基质 配体 配体密度 吸附载量 介质颗粒大小 最大流速 pH范围 保存温度 保存液体 基团密度高，载量大，分辨率高，使用方便 6%的交联琼脂糖凝胶 Ni 20-40μmol /ml 15mg蛋白/ml 45-165μm 600cm/h 3-10，在位清洗时p

Allo A-Sepharose 4B亲和层析分离糖缺失转铁蛋白

(CDT)

作者：赵树清;陆伟;王金龙

作者机构：天津市第一医院肝病研究所基础部,天津,300010;天津市第一医院肝病研究所基础部,天津,300010;天津市第一医院肝病研究所基础部,天津,300010来源：临床肝胆病杂志

ISSN：1001-5256

年：2008

卷：024

期：003

页码：213-215

页数：3

中图分类：R575

正文语种：chi

关键词：糖缺失转铁蛋白;酒精性肝病;亲和层析;Allo-A凝集素

摘要：目的建立Allo-A Sepharose亲和层析技术分离血清中糖缺失转铁蛋白(CDT)和转铁蛋白(Tf).方法Allo-A与的偶联反应在0.1mmol/L NaHCO3(含0.5mmol/L NaCl)内进行;Allo-A Sepharose 4B亲和层析技术用于分离血清CDT和Tf;ELISA用于定量CDT和Tf.结果Allo-A Sepharose 4B亲和层析图谱显示2个洗脱峰,CDT存在于第一洗脱峰,Tf存在于第二洗脱峰.ELISA测定结果显示,在5例正常血清中,CDT水平为4.53～4.76(CV=1.8～9.7%),Tf水平为255.3～524.9(CV=5.1～

光学相干层析成像技术

摘要：

光学相干层析成像技术（Optical Coherent Tomography, OCT）在生物组织的微观结构成像的研究中起着重要的作用，它是一种非接触的、无损伤的和高性能的成像技术。和传统的时域OCT（Time Domain-OCT）相比，频域OCT（Fourier Domain-OCT）能够提供了更高的分辨率，更高的动态范围，以及更高速的成像速度，被广泛的应用在了生物组织医学成像等方面。但不可否认的是，对于像跟腱，角膜，视网膜，骨头，牙齿，神经，肌肉等具有双折射特性的生物组织，FD-OCT没有足够的能力来描述这些它们的分层结构和双折射的对比度。偏振OCT（Polarization Sensitive-OCT）的基础正是由于样品组织对于偏振光的敏感性而建立的。因此，PS-OCT是描述具有双折射特性组织的强有力的工具。偏振频域OCT（Polarization-sensitive Fourier-domain optical coherence tomography，PS-FD-OCT）是目前最优的OCT是PS-FD-OCT。它系统同时具备了偏振OCT和频域OCT两种系统的优点。本文利用琼斯矢量法对其进行了描述。

亲和源创新性的养老模式

亲和源 养老服务中心

亲和源创新性的养老模式

亲和源养老服务中心项目介绍亲和源股份有限公司 2010年5月 年 月

亲和源创新性的养老模式

一、项目背景1. 中国人口老龄化带来的社会需求

中国老龄人口催生的市场需求

老龄市场 投资需求 老龄人口 资本市场需求 老龄人口 精神文化需求

一万亿的 市场消费需求

养老机构 建设需求 社区养老 护理需求 老年护理 专业化人才需求

养老资源 改建需求

亲和源创新性的养老模式

2.专业化养老服务模式“与时俱进” 2.专业化养老服务模式“与时俱进”的需求 专业化养老服务模式

亲和源创新性的养老模式

二、亲和源养老服务中心项目介绍1. 物业概貌餐厅 医院 颐养院

* 占地83,680㎡ 占地83 *总建筑面积 100,000 ㎡

老年度假 酒店

老年公寓 商铺健康会所

*公共配套服务场地 面积30 面积30,000 ㎡ *总投资：6亿元 总投资：6 人民币

亲和学院

亲和源创新性的养老模式

2. 创新的养老模式 ——居家养老与机构养老的优势结合 ——居家养老与机构养老的优势结合

居家的延伸老年人以户为单位入住社区，延续着居家生活的习惯。

机构的支撑宜老硬件配置完善，配餐中心、医院、颐养院、老年大学、健康会所、功 能活动区等

硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧

一、硅胶柱层析原理

硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得

到分离， 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物 质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸 过程。

硅胶柱层析流动相

极性小的用乙酸乙酯： 石油醚系统； 极性较大的用甲醇： 氯仿系

统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨 水或冰醋酸

硅胶柱层析惯用方法

1.称量。 200-300 目硅胶，称 30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用 100 倍量的硅胶 H。干硅胶的视密度在 0.4 左右，所以要称 40g 硅胶，用烧杯量 100ml 也可以。

2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

果洗脱剂是石油醚 /乙酸乙酯 /丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂 是氯仿 /醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水 量太大，尤其是乙酸乙酯 /丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话， 必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1% 的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约

如

1/3 体积石油

父亲和鸟 教学设计

教学目标：

1、通过品读句子、读通句子、领会句意、朗读指导等方式，引导学生理解感感悟课文内容，体会父亲的知鸟、爱鸟，认识、了解小鸟的生活习性，培养学生对小动物，尤其是小鸟的爱护、珍惜之情。 2、能用“快活”说一句话。 教学重点：

1、品读文中重点句子。 2、用“快活”说一句话。 教学难点：

在品读句子中领会句意。 教学准备： 词卡、课件 教学过程：

一、导课谈话，感受树林的美丽与宁静 今天我们要学的故事是《父亲和鸟》，它是留在我记忆深处美好的回忆。记得那是一个清晨，一个雾蒙蒙的清晨，我们经过一片树林，这是清晨的树林。（欣赏课件视频）

问：它让你感觉到了什么？（生畅谈感受） 【通过欣赏视频画面，畅谈感受，渲染了与课文相对应的气氛，成了一个心理场，直接作用于学生心理，让学生去感受，促使学生进入具体的课文情境，对课文故事中的环境加深内心体验，处于一种最佳的情绪状态。】 二、学习课文3～8自然段

（一）品读句子：父亲突然站定，朝雾蒙蒙的树林，上上下下地望了又望，用鼻子闻了又闻。

1、引出“望了又望”，“闻了又闻”两词：

这是一片美丽的有着清新空气的树林，我和父亲朝着小路经过这个树林，他朝着树林……谁来读这个词。（生：望了又望）

免疫层析实验

1．原理

金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条 上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被 富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常 迅速。

DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。

因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动

二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条

四，多余的金条抗体继

叮铃铃”上课铃响了。老师走进了教室。

你们俩儿，别动这个电脑了。”老师说着，拿起手，照着小通的屁股轻轻地拍了下。

老师对他太好了，经常不完成作业，要是我是老师，肯定没有这样耐性，上去就是

老师又转向另一面儿的小令，轻轻地拍了几下小令的屁股。

看着小令我就来气，整天上课讲话，班级被他弄得鸡犬不宁，要是我是老师，直接就

老师正在前面说话，坐在我前面的小英引起了老师的注意，他一直在底下玩，根本不听老师讲。老师招呼小英：作文小英，你上前面来听。小英用他最经典的眼神之一无辜、无助的眼神，带着他的《能力培养》，慢悠悠地走到讲台前，慢悠悠地打开《能力培养》，然后用一种恶狼的眼神看着老师。

小英，老师看你不听讲，才把你叫到前面来了，你倒好，不领情还把老师对你的好当成恶意，要是我是老师，早就一脚

小英可能是因为心理不成熟，根本体会不到老师这是在帮他，是在关心他。他恩将仇报在前面跟小通说话。

上课讲话，做题自然不会，下课了数学一道题、一道题教他。

要是我