硝酸还原酶的测定活体法

一、实验目的和要求

掌握体内法测定植物组织中的硝酸还原酶原理和方法，明确诱导酶含义。 二、实验内容和原理

硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，与作物吸收和利用氮肥有关。它催化植物体内的硝酸盐

还原为亚硝酸盐：

--

产生的NO2可以从组织内渗透到外界溶液中，并积累在溶液中，测定NO2含量的增加，即表示该酶活性的大小。

装 NO2含量的测定用磺胺比色法。在酸性溶液中产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰

-

订线

胺）反应产生重氮，再与α–萘胺（或萘基乙烯二胺）偶联形成紫红色的偶氮化合物。生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定，利用标准曲线确定溶液中NO2-含量。 三、主要仪器设备

1、实验仪器 分光光度计，真空泵，温箱，天平，2个烧杯，移液管若干，试管3支，剪刀。 2、实验试剂 0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液，对-氨基苯磺酸溶液，α-萘胺溶液，亚硝酸钠标准液

3、实验材料 在15-25℃ 蒸馏水培养一周的大麦苗两组，一组加KNO3，一组加NH4Cl，在白天置光照下处理。

四、操作方法和实验步骤

1、剪取新鲜的叶片两组，一组是处理苗0.

HMG-CoA还原酶抑制剂的合成(上)

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中国医药工业杂志 C iee o ra o h r c uias 0 4 3 1 hn s un l f ama et l 2 0,5(0 J P c ,,,,,,,,,,,,,j J f

综述与专论；‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘ -

H—o MG C A还原酶抑制剂的合成 ( 上)蔡正艳，宁奇，周伟澄∞(上海医药工业研究院，上海 2 0 3 ) 0 4 7

摘要：本文综述了近年来上市的全合成 H MG— A还原酶抑制剂药物的合成方法，主要叙述了含醛基、炔基、磺酰基、 Co 膦酸酯基或氨基官能团的侧链的制备以及这些侧链通过Wii— o r O l— oink O e nu n tgH moS ui K cesi lf a o等反应与芳杂环的缩合。 t￣ Y a i 关键词：HMG— A还原酶抑制剂：合成：综述 Co

中图分类号：R 7 . 92 6

文献标识码：A

文章编号：10—2 5 2 0 ) 00 2—6 0 18 5 (0 4 1—6 10

随着首个 HMG. o C A还原酶抑制剂洛伐他汀 ( v sa n ) 1 att,1的上市，他汀类降血脂药

2008中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集(WORD文档)

萘啶衍生物的合成及其醛糖还原酶抑制活性研究

杜蕊，朱长进

（北京理工大学化工与环境学院，北京，100081）

摘 要：目的 开发一系列带有新型结构的醛糖还原酶抑制剂。方法 基于几种已存在的醛糖还原酶抑制剂的结构，经过4步反应，合成了三种萘啶衍生物，并对其进行体外ALR2活性测试。结果 三种化合物表现出了一定的酶抑制活性，并且三者活性值相近。结论 萘啶化合物的结构骨架合理，经过改进或修饰可能会提高活性。

关键词：醛糖还原酶抑制剂；萘啶；抑制活性

Synthesis of Naphthyridine Derivatives and Research of their Aldose

Reductase Inhibitory Activity

DU Rui, ZHU Chang-jin

(School of Chemical Engineering and Environment , Beijing Institute of Technology , Beijing

100081 , China)

Abstract: Objective A series of aldose reductas

3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制制(HMG—CoA)是一类新型调节血脂药物。目前销售和使用的主要有5种：洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀。本文就从其构数关系,几年来的临床应用情况作对照比较,最后它得出显著降低TC、LDL-C,中度降低TG,不同程度升高HDL—C,不良反应少,安全性好,且是一类临床疗效不错的调脂药。

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StatP ama e t a o r a Vo No 52 0 ri h r c u i 1 u n 1 l1 . 0 6 c J 8C R+P 1 R 8例有效率 6; B两组中位缓解期分别为 5个 o A、

根茎 3 g水煎服可治疗胃炎、 0,胃痛、胆型肝炎；治疗疗黄④疮肿毒：关鲜叶适量，烂外敷治疗疔疮肿毒“⑥治疗肾通岛；炎：祜族用通关藤茎 9 1g配草血竭、果治肾炎；拉~ 5.草 (

月、个月 .位生存期分别为 9个月、4个月，有显著性差 8中 1均异，明消癌平注射液联合 C表 o外照射治疗晚期非小细胞肺

癌其有效率、缓解期、生存期均明显高于单纯 c o外照射。13能抑制胃癌细胞 S一 9 1的生长李茂全。等人用 . GC 7 0

止痛和戒毒作用：永向 (国专利 0 t 8 0,0 10

实验26 过氧化氢酶活力的测定（必修）

[目的与原理]

掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法，并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。

血清中的过氧化氢酶（CAT）分解H2O2的反应，可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，即可计算出CAT的活力，CAT活力单位定义为：每1分钟分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位（U）。 [试剂与器材] 试剂：

1、磷酸盐缓冲液（67mmol / l，pH=7.4）：取Na2HP04 7.60g，KH2P041.82g，溶于1L蒸馏水中，调pH至7.4。

2、基质液（65μmol/ l, H2O2）：取30% H2O2 3.69 ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。 3、钼酸铵：称取［(NH4)6Mo7O24］20.2g溶于500ml蒸馏水中。 器材：

721分光光度计 , 0.5cm比色杯，恒温水箱（37℃±0.5℃），试管 16mm×100mm，移液管，吸耳球，可调微量进样器。 [实验步骤]

1、样品测定：基质液置于37℃水浴 5 min，然后按下列步骤操作 试剂 基质液 钼酸铵 缓冲液 血清

对照管 1.0

准确称取天山云杉种子0.1 g，先加入 1 ml 预冷的50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含1 mmol/ L EDTA)，研磨成匀浆，然后用 4.5 ml 分两次冲洗研钵至试管中，4 ℃，10000 r/min 离心 20 min，上清液即为酶提取液，4 ℃保存用于ROS系统酶活性分析。 3 酶活性的测定

3.1 过氧化物酶 (POD，EC 1.11.1.7) 活性的测定。

按照 Chance 和 Maehly[6]的方法，并作如下修改:反应混合液为50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含 0.1 mmol/ L EDTA) 2.9 mL，2 % H2O2 1.0 mL，50 mmol/ L 愈创木酚1.0 mL。测定时，反应混合液先在 25 ℃ 水浴中预热，立即加入0.1 mL酶液以启动反应，以缓冲液调零，测定OD470值，每隔 30 s读数一次。取 0 — 60 s 时间段，即 1 min 反应时间来计算酶活性。以每分钟OD470增加0.01的酶量为一个酶活单位，U·g-1。

计算公式: POD活性 = ΔA470 × Vt × (0.01× t × FW × V1) -1 注: ΔA470:反应时间内

一、脲酶测定(比色法)

1、试剂配制：

（1） pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化

钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2） 苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后

用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3） 次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。 （4） 10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5） N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN

的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

2、操作步骤

称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。在37℃恒温箱中培养24ｈ。然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。取滤液1mL置于50mL容量

情境四 农产品中碳水化合物含量的测定

根据所给出的产品选择、设计合适的检测方法，并进行正确的检测操作；测定结果的精密度应达到相关标准规定要求。

工作任务一 明确检测任务，获取检测方法信息 项目1 熟悉硬糖中还原糖含量测定的意义

通过网络搜集、相关参考书的查阅等手段，了解我国各种糖类产品中还原糖含量的基本情况；硬糖产品中还原糖测定的意义；曾经发生过的与该检测项目相关的案例。依据上述内容撰写一份报告。请特别关注对最新情况的收集。（2000字）

项目2 熟悉蜂蜜中还原糖含量测定的意义

通过网络搜集、相关参考书的查阅等手段，了解我国蜂蜜产品中还原糖含量的基本情况；我国蜂蜜造假的原因和基本手段；对蜂蜜产品中还原糖含量测定的意义；曾经发生过的与该检测项目相关的案例等。撰写一份报告，请特别关注对最新情况的收集。（2000字）

1.1测定酸类物质含量的重要意义： 碳水化合物在食品中的应用：

碳水化合物作为能量的主要来源，以及影响食品的物理性质和人类生理代谢的物质，在食品中占有很重要的地位。碳水化合物提供的热量占人类饮食摄入量的70%以上。碳水化合物赋予食品许多特性，包括容积﹑形状﹑粘度﹑乳化稳定性和起泡性、持水能力﹑冻-熔稳

还原糖测定

实验六 饮料中国还原糖含量的测定—直接滴定法 （GB/T5009.7—2003第一法） 教学目的要求： 基本知识点

1、掌握直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。 2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。 重点：

1、熟练称量、定容、滴定等基本操技术

2、直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。 难点：

直接滴定测定还原糖的原理和控制要点 课时教学方案： 复习与提问：

1、检查实验准备情况， （1）实验内容；

（2）实验仪器与试剂有哪些？ （3）直接滴定测定还原糖的步骤。

2、直接滴定测定还原糖的注意事项和控制要点 【引入新课】 一、目的要求

1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点； 2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。 二、实验原理

试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），还原糖将溶液中的二价铜还原成氧化亚铜。以后稍过量的还原糖使次甲蓝指示剂褪色，表示终点到达。根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。反应方程式如下： CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4

还原糖测定

实验六 饮料中国还原糖含量的测定—直接滴定法 （GB/T5009.7—2003第一法） 教学目的要求： 基本知识点

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1、熟练称量、定容、滴定等基本操技术

2、直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。 难点：

直接滴定测定还原糖的原理和控制要点 课时教学方案： 复习与提问：

1、检查实验准备情况， （1）实验内容；

（2）实验仪器与试剂有哪些？ （3）直接滴定测定还原糖的步骤。

2、直接滴定测定还原糖的注意事项和控制要点 【引入新课】 一、目的要求

1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点； 2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。 二、实验原理

试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），还原糖将溶液中的二价铜还原成氧化亚铜。以后稍过量的还原糖使次甲蓝指示剂褪色，表示终点到达。根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。反应方程式如下： CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4