细菌鉴定中常用的生理生化反应注意事项

细菌鉴定中常用的生理生化反应 1、实验原理

（1）细菌生化试验

各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。 （2）糖（醇）类发酵试验

不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。

（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）

很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加

微生物实验

实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应

一、实验目的。

1) 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2) 了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。

3) 了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。

二、实验原理。

各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。

1. 糖（醇）类发酵试验

不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。

2. 甲基红试验（M.R试验）

甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇

微生物实验

实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应

一、实验目的。

1) 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2) 了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。

3) 了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。

二、实验原理。

各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。

1. 糖（醇）类发酵试验

不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。

2. 甲基红试验（M.R试验）

甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇

微生物实验

实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应

一、实验目的。

1) 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2) 了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。

3) 了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。

二、实验原理。

各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。

1. 糖（醇）类发酵试验

不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。

2. 甲基红试验（M.R试验）

甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇

实验十二 细菌常用生理生化反应实验结果观察

一 结果观察

１ 葡萄糖发酵实验

直接观察试管, 试管变黄者为葡萄糖发酵阳性菌,不变者为阴性菌.

左边为恶臭假单胞菌，有气泡并变为黄色；右边为大肠杆菌,

２ V. P. 反应和甲基红试验:

将培养好的液体培养基分装于两个干净的小试管中,在一管中滴入2-3滴甲基红试剂, 溶液变红的为甲基红阳性菌,不变的为甲基红阴性菌. 在另一管中加入V. P. 试剂,在37℃保温15分钟, 变红者为阳性菌,不变者为阴性菌.

VP，图为右边为大肠杆菌，溶液变红，为阳性菌。

３吲哚实验

在培养好的液体培养基中加入1厘米高的乙醚,振荡,静置分层,加入2-4滴吲哚试剂,在掖面交界出现红色者为吲哚反应阳性菌,不变者为阴性菌.

左边为大肠杆菌，出现红色阳性菌；右边为产气杆菌，颜色不变，阴

性菌。

４ 硝酸盐还原实验

在点滴板上滴入革里斯试剂 A液和B液，如过溶液变红说明有亚硝酸盐，为硝酸盐还原阳性菌，如果不变色需要再倒出部分培养基在另外的小孔中再滴如耳苯胺试剂，如果变蓝，说明此菌为阴性菌；如果不变色，说明此菌为硝酸盐还原强阳性菌．

右下方恶臭假单胞菌，加入革里斯试剂A、B后不变色，再加入二苯胺试剂后变蓝，为阴性菌；左上方大肠杆

RT-PCR实验操作步骤

?

退火温度：这与你要PCR的模板DNA有关，不同的模板有不同的最适退

火温度。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火， 同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。

一.所用试剂

1.0.01MPBS缓冲液,PH7.4 ：高压灭菌，40C保存。临用前－200C放置30分钟，确保冰冷。 2.焦碳酸二乙酯(DEPC)：sigma公司，40C保存。

3.0.1TPC处理的灭菌去离子水：100ml去离子水中加入0.1mlDEPC，剧烈振荡混匀，让DEPC充分进入溶液中，370C放置过夜，高压蒸汽灭菌30分钟除去DEPC。40C保存。

4.单相细胞裂解试剂TRizoL：Invitrogen生命技术公司，40C保存。临用前－200C放置30分钟，确保冰冷。

5.氯仿：用新开封的，10ml分装，40C保存。临用前－200C放置30分钟，确保冰冷。 6.异丙醇：用新开封的，20ml分装，40C保存。临用前－200C放置30分钟，确保冰冷。

7.0.1TPC处理的75％乙醇：无水乙醇75ml加0.1TPC处理的灭菌去离子水至100ml，

实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验

摘要

本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。

关键词

微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验

前言

类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。

一、 实验目的

1、大分子水解试验

证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 2、糖发酵试验

了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 3、IMViC试验

了解IMViC的原理

微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察

姓名：俞华军 班级：09生科三班 学号：200900140157 日期：2010/12/04

组别：四 同组者：谢英健 张刚刚 岳永胜 余振洋

一．实验目的

1．证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同

微生物有着不同的酶系统。

2．掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3．了解糖发酵的原理在肠细菌鉴定中的重要作用。 4．掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5．了解吲哚、甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法

二．实验原理

1.大分子物质的水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。

A．淀粉水解试验

某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。

淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不再变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

如菌苔周围

微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察

姓名：俞华军 班级：09生科三班 学号：200900140157 日期：2010/12/04

组别：四 同组者：谢英健 张刚刚 岳永胜 余振洋

一．实验目的

1．证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同

微生物有着不同的酶系统。

2．掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3．了解糖发酵的原理在肠细菌鉴定中的重要作用。 4．掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5．了解吲哚、甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法

二．实验原理

1.大分子物质的水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。

A．淀粉水解试验

某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。

淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不再变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

如菌苔周围

内行会看,就不说了

格氏反应注意事项

1、格氏反应

卤代烃在无水乙醚或四氢呋喃中和金属镁作用生成烷基卤化镁RMgX，这种有机镁化合物被称作格氏试剂(Grignard Reagent)。格氏试剂可以与醛、酮等化合物发生加成反应，经水解后生成醇，这类反应被称作格氏反应(Grignard Reaction)。格氏试剂是有机合成中应用最为广泛的试剂之一，它是由法国化学家格林尼亚(V．Grignard)发明的。

1871年，格林尼亚生于法国塞堡(Cherbourg Frace)。当他在里昂(Lyons)大学学习时，曾师从巴比亚(P．A．Barbier)教授。当时，巴比亚主要从事有机锌化合物的研究，他以锌和碘甲烷反应得到二甲基锌，这种有机锌化合物被用作甲基化试剂。后来，巴比亚又以金属镁替代锌来进行尝试，也获得相似的金属有机化合物，不过反应条件比较苛刻。于是。巴比亚便让格林那继续对有机镁化合物的制备作深入研究。研究发现，用碘甲烷和金属镁在乙醚介质中反应可以方便地得到新的化合物，不经分离而直接加入醛或酮就会发生进一步反应，反应产物经水解后可以得到相应的醇。其反应过程可表示为：

后来的研究表明，烷基卤化镁(即格氏试剂)可以用于许多反应，应用范围极广，因而很快成为有机合成