生物技术综合实验

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

生物技术综合实验

实验指导

适用专业：生物技术

鲁东大学生命科学学院

编写：应用生物工程教研室

2010年

1

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

目 录

第一部分、综合性实验 ....................................................................................................... 4

综合项目一、α-淀粉酶产生菌的分离与筛选 .......................................................... 4

实验一、培养基配制及样品采集 ....................................................................... 4 实验二、样品处理及初筛 ................................................................................... 5 实验

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

生物技术综合实验

实验指导

适用专业：生物技术

鲁东大学生命科学学院

编写：应用生物工程教研室

2010年

1

鲁东大学生命科学学院 2010 生物技术专业《生物技术综合实验》实验指导

目 录

第一部分、综合性实验 ....................................................................................................... 4

综合项目一、α-淀粉酶产生菌的分离与筛选 .......................................................... 4

实验一、培养基配制及样品采集 ....................................................................... 4 实验二、样品处理及初筛 ................................................................................... 5 实验

生物技术综合大实验实验报告

GFP的分离与纯化

姓 名：

专业班级 院 系：

指导教师： 完成日期

GFP的分离与纯化

摘要： GFP，在生物领域应用广泛。本实验回顾了GFP提取纯化过程，包括细菌破碎、GFP沉淀、疏水过滤层析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析等步骤，来获得较纯的GFP，并运用SDS-PAGE来检测纯化效果。 关键词：GFP 应用进展 层析 SDS-PAGE

绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于这些腔肠动物体内的生物发光蛋白。1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequorin victoria)中分离出一种分子量为20kDa的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA，并分析了GFP的一级结构；1994年Chalfie等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了GF

实验1 糖化酶固定化技术

1 实验目的

(1)熟悉酶的固定化技术和原理。 (2)掌握糖化酶的固定化操作。

2 实验原理

在一定pH条件下，带正电荷的明胶与海藻酸根阴离子形成聚合物，同时，海

藻酸钠与钙离子在一定条件下结合形成不溶于水的微球，从而使混合于其中的糖化酶通过包埋固定化。戊二醛含有两个醛基，可与蛋白质中的氨基、酚基、巯基发生反应，相互交联而使固定化酶硬化，由于带正电荷的明胶与海藻酸根阴离子形成聚合物已将绝大部分游离酶包埋起来，因此这种交联主要发生在明胶与戊二醛之间，使固定化酶的使用时间延长、机械强度增大、稳定性提高。

3 仪器和试剂

3.1 主要仪器

磁力搅拌器，pH计，水浴锅，500mL烧杯，50mL注射器，12号注射器针头，冰箱。 3.2 药品及配制

（1）所需药品：糖化酶，明胶，海藻酸钠，氯化钙，戊二醛，生理盐水。 （2）活力单位为70U/mL的糖化酶酶液100ml：用所给糖化酶配制。 （3）浓度为3%的明胶溶液150ml：称取明胶4.5g，放入装有150mL蒸馏水的烧杯中，静止10分钟，水浴加热使明胶溶解，注意水浴的温度不超过70℃。

（4）3%的海藻酸钠溶液150ml：称取海藻酸钠4.5g，放入装有

实验一 纤维素酶在果汁制备中的应用

一、实验目的：了解影响果汁出汁率、固形物含量及澄清度的各因素；掌握果胶酶、纤维素酶在果汁生产中的应用。

二、实验原理：水果中含有纤维素、果胶等大分子物质，在榨汁时，这些物质会影响出汁率并使榨出的果汁浑浊，易出现沉淀。添加纤维素酶、果胶酶可以将果胶、纤维素分解成小分子的可溶性的物质，从而提高出汁率并使果汁饮料澄清。 三、实验器材

1．实验材料：新鲜桔子

2. 主要仪器：榨汁机、恒温水浴锅、分光光度计 3．实验药品：纤维素酶、5%柠檬酸、10%柠檬酸钠 四、实验内容 1.工艺流程

桔子→清洗→去皮→榨汁→过滤→酶处理→比较酶处理前后果汁澄清情况，并测透光率 2.方法步骤

（1）清洗、去皮和榨汁：每小组同学取桔子2-3个（重约200g），冲洗干净，去皮后用榨汁机榨汁。

（2）过滤：用滤布将果汁过滤到烧杯中，用5%柠檬酸或10%柠檬酸钠将果汁pH调到纤维素酶的最适pH值，一般为pH 3.0左右。

（3）酶处理：取由（2）所得果汁20ml，加入0.1%的纤维素酶，在所用纤维素酶的最适作用温度（看包装说明）下保持30min，中间注意不断搅拌或震荡。

（4）测透光率：取加酶处理后的果汁上清液，以

蚌埠医学院

《生物技术一》实验教案2010/2011学年第二学期

选用教材医用生物化学实验（自编，3版）

生物化学实验（上海交通大学出版社）授课教师夏俊

职称教授

授课专业2009级生物科学本科

教研室检验系生物化学与分子生物学

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

复习旧课：

新课导言：细胞培养概念和意义

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。分为原代培养和传代培养两种。

体获取组织或器官的一部分进行培养。

刚刚从活体组织分离出来，

状态。这一方法可为研究生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。举例：细胞各种生理活动如增殖的研究

讲授新课：

实验九：胎鼠细胞原代培养

织

块培养法和消化培养法；

械

细

胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验提供材料。

蚌埠医学院

《生物技术一》实验教案2010/2011学年第二学期

选用教材医用生物化学实验（自编，3版）

生物化学实验（上海交通大学出版社）授课教师夏俊

职称教授

授课专业2009级生物科学本科

教研室检验系生物化学与分子生物学

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

复习旧课：

新课导言：细胞培养概念和意义

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。分为原代培养和传代培养两种。

体获取组织或器官的一部分进行培养。

刚刚从活体组织分离出来，

状态。这一方法可为研究生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。举例：细胞各种生理活动如增殖的研究

讲授新课：

实验九：胎鼠细胞原代培养

织

块培养法和消化培养法；

械

细

胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验提供材料。

《 生物技术专业大实验 》课程

课程编号：0741524966

实 验 指 导 书

主撰人 韩军丽 王雪青 金玉莲 赵培 审核人 王素英

天津商业大学 生物技术与食品科学学院

二零零九 年 十一月

前 言

1． 实验总体目标 使学生掌握基因工程、分子生物学、细胞生物学及细胞工程实验技术，

提高学生实验动手能力、以及在实验中分析问题和解决问题的能力，为今后从事生物技术相关工作和研究打下坚实的基础。

⒉ 适用专业年级 生物技术专业第6学期

⒊ 先修课程 生物化学、微生物学、遗传学、细胞与分子生物学、基因工程、细胞工程 ⒋ 实验课时分配

实验项目 实验一 目的基因的PCR扩增 实验二 DNA片段的回收 实验三 DNA的连接 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验五 重组DNA的转化 实验六 快速分离大肠杆菌中的重组质粒 实验七 重组质粒的酶切鉴定 实验八 外源基因诱导表达及蛋白质检测 实验九 细胞凝集反应 实验十 细胞膜的渗透性 实验十一 细胞工程基础实验技术 实验十二 无菌操作及愈伤组织诱导技术 实验十三 微藻规模化培养 实验实验每组实验 要求 类型 人数 学时 必做 综合 2 必做 综合 2 必做 综合 2 必做

生物技术综合试验

目的：主要是通过本课程的学习，使学生受到严格的基因工程和分子生物学等技术实验技

能的训练，熟悉现代生物技术仪器的基本操作使用和应用范围，加深对生物技术系列相关课程基本理论、基本技术原理的理解认识。

实验一、质粒DNA的小量提取 实验二、双酶切反应

实验三、PET28-a质粒载体的胶回收 实验四、引物设计

实验五、目的片段的PCR扩增 实验六、PCR产物的双酶切反应 实验七、PCR产物的胶回收

实验八、目的片段OMP31、BLS与PET28-a载体的连接反应 实验九、大肠杆菌感受态细胞的制备 实验十、重组质粒转化感受态细胞的实验 实验十一、菌落PCR反应

实验十二、IPTG诱导OMP31和BLS融合基因的表达 实验十三、SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验一、质粒DNA的小量提取

一、目的要求

1、掌握用试剂盒提取质粒DNA的技术 2、掌握用分光光度计测定DNA浓度的方法 二、基本原理

在染色体外能自主复制且稳定遗产的遗传因子称为质粒，大小在1kb-200kb之间，是双链闭合环状的DNA分子。在细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中都发现有质粒存在，其中细菌质粒存在最为普遍，在基因工程中常用作基因载体。碱变性法又称碱

实验一 牛乳卫生质量的检测

实验目的：

1．学习美蓝还原酶试验对牛乳质量评估的原理和方法 2．学习巴氏消毒法的原理及方法

3．学习利用牛乳中细菌菌落总数判断牛乳是否被污染的指标 实验内容：

1. 美蓝还原酶实验评估牛乳质量 2. 检测巴氏消毒法消毒牛乳的效果 3. 稀释平板计数法测定牛乳含细菌总数 实验仪器设备和材料：

材料：鲜牛奶；纯牛奶；牛肉膏蛋白胨培养基 试剂：美蓝溶液（1:250 000）；无菌水；蒸馏水等；

仪器和用具：试管，试管架，三角瓶，5mL移液枪及枪头，1mL移液枪及枪头，培养平板，高温蒸汽灭菌锅，恒温水浴锅，微波炉，显微镜，载玻片，标记笔等。 实验要求：

1. 掌握根据美蓝还原酶实验的结果评估牛乳质量； 2. 熟悉巴氏消毒法的原理及方法

3．掌握利用牛乳中细菌菌落总数判断牛乳是否被污染的指标 实验方法与步骤：

1 牛肉膏蛋白胨培养基和无菌水的制备与灭菌

制备牛肉膏蛋白胨培养基400mL，分装在两个三角瓶中；取9支试管，每支试管加9mL蒸馏水。将牛肉膏蛋白胨培养基与装有蒸馏水的试管及21个平板一起灭菌，121℃维持20min。 牛肉膏蛋白胨培养基的配方（每1000mL）为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂4.4