细胞传代比例

1.HePG2细胞和L-02细胞的传代：

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。

细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，3分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以在显微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，则要终止消化了。

HepG2细胞株的传代经验：

首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%，不需要长满，就准备传代。倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，我用的是25平方厘米的培养瓶，加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶－0.02íTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤，再用一次性过滤器过滤除菌，再分装成1ml的小包装，刚好每次用完一个，避免每次反复冻存，会使胰酶的活性下降），加入的量以刚好盖满瓶

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结

实验一：细胞传代培养

材料：15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10?S的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等

步骤：（以下均在超净台内，酒精灯旁操作）（SKOV-3）

1、打开超净台，将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10?S的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。

2、取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中，细胞成梭形连接，贴壁良好），弃旧培养基，PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。

3、用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入，然后放平培养瓶，使贴壁细胞与trypsin充分接触，置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长，以免损伤细胞）。

4、往培养瓶中加入1640 1~2ml，随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中，离心1000 r/min，5min。

5、弃上清液，加入少量10?S的1640培养基使成细胞悬液。

6、分装，按1:2~3传代，每瓶4~5ml。倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

人结肠癌ＨＣＴ１１６细胞传代培养的简易方法－

２＊

王　倩１，徐云丹１，赵　刚１，

（湖北中医药大学基础医学院，湖北武汉４１．３００６５；

）湖北中医药大学中药资源与复方教育部重点实验室，湖北武汉４２．３００６５

摘　要：目的：针对人结肠癌ＨＣ建立一种简Ｔ１１６细胞在体外培养时常出现部分细胞聚团生长的特性，－

——水平震荡法。方法：采用简单高效的水平震荡方法替代胰酶消化法对易的细胞传代培养方法—

利用水平震荡方法传代后的细胞在新瓶中可以正常贴壁。２ＨＣＴ１１６细胞进行传代培养。结果：４ｈ和－

该方法无４８ｈ观察到胰酶消化法传代的细胞生长情况与水平震荡法传代的细胞未见明显差异。结论：

需使用胰蛋白酶，避免了胰酶对细胞的损伤作用，而且操作简便，降低了实验成本和污染的风险。水平震荡传代法可以替代胰酶消化法作为ＨＣＴ１１６细胞的简易传代方法。－关键词：传代培养；水平震荡法ＨＣＴ１１６细胞；－

（）中图分类号：Ｒ３２９．２＋８　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３２１９７２０１３０２００３５０２－－－

ＡＳｉｍｌｅＭｅｔｈｏｄｏｆＨｕｍａｎＣｏｌｏｎＣａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ１１６ＣｅｌｌｓＳｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　　　　　　　－　ｐ

１１１２

，，ＷａｎＱｉａｎＸｕＹｕｎｄａ

陕西汉王药业有限公司GMP管理文件

1 目 的：建立菌种的传代、贮存、接种操作规程。

2 适用范围：适用于检定菌的传代、贮存、接种。

3 责 任 者：微生物检验员、化验室主任。

4 内 容：

4.1来源：检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。

4.2 贮存：

4.2.1 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏（4-6℃）保存。

4.2.2 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。

4.2.3每支保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。

4.3 传代和接种：

4.3.1 试验用菌种一般每两月传代一次，在阳性菌检室内进行传代和接种。

4.3.2 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，烧灼接种环。

4.3.3 再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管)与待种的新鲜斜面培养基(简称接种管)，持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈450角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.3.4 首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管的部分，也应通

篇一：社保缴费比例及计算方法

社保缴费比例及计算方法

(一)2013年度企业及有雇工个体工商户社保缴费比例及计算方法：

一、缴费险种及比例

1. 企业养老保险缴费比例28%，其中单位承担20%，个人承担8%；个体工商户养老保险缴费比例20%，其中单位承担12%，个人承担8%。

2. 医疗保险缴费比例11%，其中单位承担9%，个人承担 2%。

3. 失业保险缴费比例3%，其中单位承担2%，个人承担1%。

4. 生育保险缴费比例0.6%，全部单位承担。

5. 工伤保险缴费比例，一类风险行业（例如零售业）0.8%，二类风险行业（例如制造业）1.6%，三类风险行业（高危行业）2.4%。全部单位承担。

6. 总计企业性质单位，一类风险行业缴费比例43.4%，其中企业32.4%，个人11%。个体工商户性质单位，一类风险行业缴费比例35.4%，其中单位承担24.4%，个人11%。

二、计算方法（按照本年度最低月缴费基数2025，一类风险行业标准计算）

1.企业缴费2025*43.4%=878.85元，其中单位承担2025*32.4%=656.1元，个人承担2025*11%=222.75元。

2.个体工商户缴费2025*35.4%=716.85元，其中单位承担2025*24.4%=

新生儿遗传代谢病的早期识别

新生儿遗传代谢病早期识别

新生儿遗传代谢病的早期识别

遗传性代谢病(inherited metabolic disorders,IMD) 又名先天性代谢缺陷(Inborn errors of metabolism,IEM) IMD种类繁多，发病率：1/1500

新生儿遗传代谢病的早期识别

家族史和出生史 大多数的新生期表现的IMD是常染色体隐 性遗传的，家族史可能是有用的线索 第2胎或之后的新生儿，多可追问到同胞 中类似病史，或异常死亡史 有些胎儿脂肪酸氧化紊乱使母亲易患孕 期急性脂肪肝

新生儿遗传代谢病的早期识别

胎儿患儿HELLP溶血综合征时，母亲肝 酶增高，血小板计数降低 类固醇硫酸酯酶缺乏时，由于胎盘雌激 素产量下降，导致产程延长 与肾脏病理学有关的疾病可导致羊水减 少

新生儿遗传代谢病的早期识别

临床表现 孕期即开始有所表现，大多数IMD的病理 改变在胎儿期就存在，由于胎盘的有效去 除毒性代谢产物的保护功能，多数新生儿 出生时状况良好，体质量正常，临床症状 多出现在数天或数周后。

新生儿遗传代谢病的早期识别

一、急性代谢性脑病 指累积的前体或代谢性产物的毒性效应 引起的脑部和维持正常意识

（五）关于出资比例与股权比例

1．出资比例与股权比例概述

在以我国《公司法》为基础的公司资本制度下，出资比例指股东实缴出资额占公司资本总额的比例，亦即以分数或百分数表示的出资额或出资份额；股权比例指股东基于出资占有的公司财产权、决策权等相关权利的份额，即以分数或百分数表示的股东权益。

2．各国公司法的相关规定

（1）法国。法国属于大陆法系国家，采用严格的法定资本制。关于股东出资比例与股权比例问题，从法律上肯定了可以不同。

（2）美国。美国是英美法系国家的典型代表，其公司资本制度采取典型的授权资本制度。股东的股权比例完全依照股东协商一致的原则，由股东通过章程来约定。

（3）德国。德国属于大陆法系国家，但又区别于法国，因德国公司实行折衷的授权资本制。公司股东出资比例和股权比例可以不同，也可以由股东通过协议约定。

3．我国《公司法》的有关规定

我国《公司法》采用严格意义上的法定资本制。即规定了股东出资比例与股权比例要保持一致。

在对待中外合资的有限责任公司时，我国采用授权资本制，但在出资比例与股权比例问题上始终保持内外企业政策一致，要求股东出资比例与股权比例保持一致。

4．我国实践中的变通做法

实践中，股东出资比例与股权比例必须一致的法律规定制约了中关村科技园区的中小型

《解比例》说课稿及教学反思 全银华 一、说教材 本单元是在学习了比的有关知识并掌握了一些常见数量关系的基础上，学习比例的有关知识及其应用。其中解比例这部分内容是比例基本性质的应用。本课教学设计紧紧抓住“比例的基本性质”在比例与简易方程之间起到桥梁作用这一点展开，较好的体现了教师的主导作用和学生的主体作用。同时为学生提供了很多参与教学过程、展示才华的机会。 教学目标分三个围度：1、认知：使学生认识解比例的意义，学会应用比例的基本性质解比例。2、能力：使学生进一步巩固比和比例的意义，进一步认识比例的基本性质。3、情感：培养学生良好的学习习惯。 教学重难点：1、认识解比例的意义。2、应用比例的基本性质解比例。 教学方法：采用了

尝试教学法、练习法、讲解法和自学辅导法等。

教学反思： 虽然本课教学中紧紧抓住“比例的基本性质”在比例与简易方程之间起到桥梁作用这一点展开，较好的体现了教师的主导作用和学生的主体作用。同时为学生提供了很多参与教学过程、展示才华的机会，从而受到了良好的教学效果。但是由于自身的语言没有激情因而课堂气氛还有点沉闷，以后我会在这个方面努力。从教学反馈来看，学生都能掌握解比例的方法，但还有少数学生在解决实