实验室细菌的培养温度
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基层实验室细菌培养检查存在的问题及改进方法
基层实验室细菌培养检查存在的问题及改进方法
宝鸡市中医医院检验科 张永宁(主管检验师)
邮编:72100
目前,许多基层实验室临床细菌学培养检查中过多地沿用传统的分类细菌学那一套方法,即采集标本-接种培养-纯培养-鉴定药敏-报告。由于分类细菌学和临床细菌学研究方法和目的有一定差异,这种按部就班的方法,往往使取得的信息陈旧而失去助诊意义,已不能适应临床的客观需要【1】,应进行改进。
1当前基层实验室细菌学培养检测存在问题 1.1标本采集过程存在问题
1.1.1被动采集标本造成培养阳性率降低或培养结果与临床诊断不符。许多基层医院医生习惯根据实验使用抗生素,无效时才做到细菌培养,这样造成多数患者在留取标本前已经使用过抗生素,细菌处于抑制状态或转成L型状态,使培养阳性率大为降低。
1.1.2大多数基层实验室标本由护士采集或病人自采送检验科室的模式。而细菌培养标本具有不同与其一般检验对标本的要求,对标本采集有严格的要求。例如血液培养需要在病人高热,寒战时由护士通知检验人员以无菌手续,床头采集;前列腺液采集需由医生清洁患者尿道口后按摩采集于无菌容器;痰液标本需护士指导病人用0.1%心洁尔漱口后辅助病人深呼吸气后用力咳出肺部的痰液等。病人自菜标本
实验室常用的细菌作用及其选择
第一篇:JM109,DH5a,BL21这些感受态有何区别 1:DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
2:BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)
3:BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,p
实验室再流焊温度控制
目 录
1 绪论 ............................................................................................................................ 1 2 设计理论基础 ............................................................................................................ 1
2.1 再流焊 .............................................................................................................. 1
2.1.1 再流焊设备的发展 ........................................................................................... 1 2.1.2 温度曲线的建立 .............................
微生物的实验室培养学案
课题1: 微生物的实验室培养(导学案)
高二生物组
目标导引
1、通过学习知道培养基的种类、营养要素及如何配制培养基 2、通过学习知道消毒灭菌的原理和方法
3、通过学习你将知道如何用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养
问题导学
一、培养基:阅读课本培养基的相关内容,完成下列问题:
(1)培养基分为哪两类?二者的区别?培养基有何用途?
(2)不同的微生物所需要的培养基配方相同吗?培养基的基本成分(主要营养物质)有哪些?为什
么大多数培养基都需要具备这些基本成分?
(3)培养基除能为微生物生长提供几种主要营养物质外,培养基还需要满足微生物生长的哪些要求?
(4)你知道牛肉膏、蛋白胨可以为微生物的生长提供哪些营养物质吗?
二、无菌技术:阅读无菌技术的相关内容,完成下列问题:
(1)获得纯净培养物的关键是什么?无菌技术围绕什么而展开?主要包括哪几个方面?
(2)什么是消毒与灭菌?二者的区别?实验室常用的消毒方法、灭菌方法有哪些?分别适用于那些用具?
(3)利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤,目的是什么?
(4)请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。
①培养细菌用的培养基与培
临床微生物实验室细菌鉴定指南(上)
临床微生物实验室细菌鉴定指南(上)
录入时间:2010-11-22 10:40:51 来源:温州医学院附属医院
一.细菌的鉴定步骤
1. 鉴定的概念:将一个未知的菌株按其生物学特性,经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2. 对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好,有单个菌落可以进行生化试验。(我们这里一般都是预先纯化培养)
3. 对待鉴定的菌种进行革兰染色,观察形态(G+c,G–b,G–c,G+b),做触酶,氧化酶实验,然后按科,属,种逐步鉴定。要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统,临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好,参考鉴定质控单。
4. 按鉴定质控单的要求填写好病人姓名,年龄,性别;标本类型,标本编号,送检日期等。另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。 5. 复习革兰染色,触酶实验,氧化酶实验。
⑴.革兰染色:是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片,固定(目的:杀死细菌,改变细菌对染料的通透性)。 第一步:以结晶紫初染(染色液Ⅰ) 第二步:以卢戈氏碘液媒染(染色液Ⅱ) 第三步:用95%乙醇脱色(染色液Ⅲ)
第四步:最后用稀
临床微生物实验室细菌鉴定指南(上)
临床微生物实验室细菌鉴定指南(上)
录入时间:2010-11-22 10:40:51 来源:温州医学院附属医院
一.细菌的鉴定步骤
1. 鉴定的概念:将一个未知的菌株按其生物学特性,经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2. 对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好,有单个菌落可以进行生化试验。(我们这里一般都是预先纯化培养)
3. 对待鉴定的菌种进行革兰染色,观察形态(G+c,G–b,G–c,G+b),做触酶,氧化酶实验,然后按科,属,种逐步鉴定。要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统,临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好,参考鉴定质控单。
4. 按鉴定质控单的要求填写好病人姓名,年龄,性别;标本类型,标本编号,送检日期等。另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。 5. 复习革兰染色,触酶实验,氧化酶实验。
⑴.革兰染色:是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片,固定(目的:杀死细菌,改变细菌对染料的通透性)。 第一步:以结晶紫初染(染色液Ⅰ) 第二步:以卢戈氏碘液媒染(染色液Ⅱ) 第三步:用95%乙醇脱色(染色液Ⅲ)
第四步:最后用稀
实验室平板培养基配方 -
实验室用平板培养基配方
1.MRS培养基:
液体:蛋白胨 10g 牛肉膏 10g
柠檬酸铵2g 乙酸钠 5g(无水乙酸钠3g) 酵母粉 5g 葡萄糖 20g 磷酸氢二钾 2g 吐温 1.0ml 盐液甲 5.0ml 蒸馏水: 1000ml 溴甲酚紫 0.8g
[备注]盐液甲的配制:MgSO4.7H2O 11.5g ,MnSO4.4H2O 2.8g
蒸馏水 100ml
固体:在MRS液体培养基中加入1.6%~2%的琼脂
PH=6.5~7.0 121℃灭菌30min
2.YB培养基:
液体:蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 酵母粉 5g 磷酸氢二钾4g 3.08%硫酸锰 1.0ml 蒸馏水 1000ml 固体:在YB液体培养基中加入1.4%~1.7%的琼脂 PH=6.0~7.0 121℃灭菌30min
3.PYD培养基:
液体:酵母粉
实验室常用培养基的配制方法
分子实验室常用的培养基配方,和SDS-PAGE缓冲液配方。
五、实验室常用培养基的配制方法
Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)
组份浓度 100 mg/ml Ampicillin
配制量 50 ml
配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)
组份浓度 24 mg/mL IPTG
配制量 50 mL
配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1 ml,份)后,-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)
组份浓度 20 mg/ml X-Gal
配制量 50 ml
配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光
细菌培养实验报告
细菌培养实验报告
篇一:培养基的制备与灭菌实验报告
陕西师范大学远程教育学院
生物学实验报告
报告题目培养基的制备与灭菌
姓 名 刘 伟
学 号
专 业 生 物 科 学
批次/层次
指导教师
学习中心培养基的制备与灭菌
一、目的要求
1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理
牛肉膏蛋白胨培养基:
是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌:
主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。
三、实验材料
1. 药品:牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三
角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品:药匙、称量纸、ph试纸、记号
企业实验室如何获得国家实验室认可
企业实验室实验室认可相关要点
标准 检测 认证Standards/Testing/Certification
企业实验室
如何获得国家实验室认可
中国家用电器研究院 宫赤霄
实验室认可是对校准和检测实验室有能力进行指定类型的校准和检测所作的一种正式承认。目前,我国的实验室认可机构是中国合格评定国家认可委员会(CNAS),认可依据是CNAS-CL01:2006《检测和校准的实验室的认可准则》,等同采用ISO/IEC17025:2005,ISO/IEC17025:2005这个全球公认的用来评审实验室的国际标准,包含管理要求和技术要求,并对实验室日常运作中的各个关键环节提出了控制要求。
企业实验室申请成为国家实验室的主要工作流程见图1。
方针以及为保证实施该方针而采用有效的制度和措施的纲领性文件。程序文件是将质量手册中描述的体系转化成可实施的操作体系的文件。程序文件的编写应简练明
的核查是现场评审的重点,因此也应该是实验室在迎审准备工作中的重点。
具体而言,实验室最好制定一个《新增检测项目的管理程序》,实质上这个程
不论是对于初次评审还是日常技术储备确,操作性强,不宜盲目追求数量和篇幅。序
编写质量手册时首先要确定组织机构图,明确职责划分,原则是不能遗漏也不能重复,