微生物生理生化反应实验

实验十 一 IMViC与硫化氢试验

指导教师：李海花 周六 第三组

学号：060122010041 姓名：宋天佳 专业：2010级水产养殖 学号：030212010025 姓名：皇 昊 专业：2010级化学1班 学号：060122010055 姓名：续鹏辉 专业：2010级水产养殖

一、实验目的

了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 二、实验原理

IMViC是I－吲哚（indol test）、M－甲基红（methyl red test）、V－伏-普（Voges-Prolauer test）和C－柠檬酸盐（citrate test）4个实验的缩写。这4个实验主要用来快速鉴别产气杆菌与大肠杆菌，多用于水的细菌检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水时若超过一定指标，则表示水质受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水是要将两者分开。硫化氢（H2S）实验也是检查肠道细菌的生化实验。 （一）吲哚试验（indol test）

吲哚试验是用来检测吲哚试验的产生，有些细菌分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红

实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验

摘要

本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。

关键词

微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验

前言

类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。

一、 实验目的

1、大分子水解试验

证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 2、糖发酵试验

了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 3、IMViC试验

了解IMViC的原理

微生物鉴定中的生理生化试验

一．实验目的

1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不

同的酶系统。

2. 掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。

3. 了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 4. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

二．实验原理

由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下：

1. 大分子水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使

微生物鉴定之生化实验大全

入社群：听大咖微课+看医学视频+会议直播微生物鉴定之生化实验大全

不同的细菌具有各自的独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要根据Shirling＆Gottlieb《International Journal of Systematic Bacteriology》中鉴定的有关试验。

（一）碳水化合物代谢实验： 糖（醇、苷）类发酵实验

（1）原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。

（2）基本培养基：在培养基中加入0.5%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等）。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。

（3）实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品

情境一：分离纯化和选育生产菌种 发酵工艺技术教材

项目2 保藏微生物菌种操作

◆ 学习目标 1.了解各种菌种保藏的基本原理和优缺点； 2.学会根据菌种的特点选择相应的保藏方法；学会采用不同方法进行保藏菌种操作。 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 当然保藏菌种使其不变异亦是相对而言的。实际上没有一种方法可使菌种绝对不变化，所以研究菌种保藏就是要采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。

菌种是国家的重要资源，世界各国对这项资源都给予极大重视，很早就设臵了各种专业性的保存机构，如ATCC、NRRL等。1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。 1 基础知识

菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通

微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察

姓名：俞华军 班级：09生科三班 学号：200900140157 日期：2010/12/04

组别：四 同组者：谢英健 张刚刚 岳永胜 余振洋

一．实验目的

1．证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同

微生物有着不同的酶系统。

2．掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3．了解糖发酵的原理在肠细菌鉴定中的重要作用。 4．掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5．了解吲哚、甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法

二．实验原理

1.大分子物质的水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。

A．淀粉水解试验

某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。

淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不再变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

如菌苔周围

微生物与生化药学专业

2009年硕士研究生入学复试具体实施办法

生物与制药工程学院“微生物与生化药学”专业2009年硕士研究生入学复

试办法按《武汉工业学院2009年硕士研究生复试办法》执行，具体实施办法如下：

一、复试内容

1、综合面试：包含外语听说能力测试、专业知识考核和面试及实践环节测试等复试内容。

（1）外语听说能力测试：主要包括专业外语和日常用语两方面的考核，采取口试形式，满分为100分。

（2）专业知识考核：满分为100分。重点考查考生对专业理论与技能及相关知识的掌握是否扎实、深厚和宽广，是否具备本专业研究生入学的基本要求。考核设天然药物资源利用、药物设计与合成、药物的微生物转化和提取、微生物与生化药物四个方向的问题。

（3）面试及实践环节测试：采取口试形式，满分为100分。主要考查政治思想品德、专业综合知识、实践动手能力、科学思维、创新能力和反应的能力等。

（4）计分方法：总分＝外语听说能力测试成绩×20%＋专业知识考核成绩×40%＋面试及实践环节测试成绩×40%。

说明：考生复试程序为：首先进行专业知识考核的考试，然后进行逐个面试。面试部分先进行英文自我介绍，导师提问，最后进行实践环节测试。

2、同等学历加试

同等学历加

实验二 理化因子对微生物的影响

实验目的：

1 了解紫外线对微生物生长的影响。 2 了解不同化学物质对微生物生长的影响。 3 了解理化因素抑制或杀死微生物的试验方法。 实验原理：

1 紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线波长是200-310nm，而以260nm左右的紫外线具有最高杀菌效应。作用机理是诱导胸腺嘧啶二聚体的生成，从而抑制DNA的复制。经紫外线照射受损伤的细菌细胞，如立即暴露于可见光下，则有一部分可恢复正常活力，称为光复活现象。

2 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用，因此，在实验室内及生产上常利用某些有效的化学药剂进行杀菌或消毒。不同的化学药剂对不同的细菌，杀菌能力并不相同，而一种化学药剂对不同细菌的杀菌效果也不一致。 实验材料：

1 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。 2 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3 器材与试剂：滤纸、镊子、培养皿、涂棒、试管支。 75%乙醇、 1%结晶紫、 0.2mg/L青霉素、 0.1%KMnO4、 实验方法： 一 紫外线杀菌实验

1 将已灭菌冷却到50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿中，水平放置待凝固。

2 用无菌吸管吸取0.1ml培养24h的枯草芽孢杆菌菌液加入上述平板

微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察

姓名：俞华军 班级：09生科三班 学号：200900140157 日期：2010/12/04

组别：四 同组者：谢英健 张刚刚 岳永胜 余振洋

一．实验目的

1．证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同

微生物有着不同的酶系统。

2．掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3．了解糖发酵的原理在肠细菌鉴定中的重要作用。 4．掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5．了解吲哚、甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法

二．实验原理

1.大分子物质的水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。

A．淀粉水解试验

某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。

淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不再变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

如菌苔周围