各种DNA提取方法的优缺点

各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法

一，基因组DNA提取方法

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等

试验步骤： 1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。 2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。 3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl0.1mol/LEDTAo.5%SDS)混匀。 4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相 6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。 7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管

蛋白质各种定量方法的优缺点的比较

1．蛋白质的常规检测方法

1.1 凯氏（Kjeldahl）定氮法

一种最经典的蛋白质检测方法。

原理：样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化,含氮有机物分解产生氨,氨

又与硫酸作用变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨,氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 优点：范围广泛、测定结果准确、重现性好 缺点：操作复杂费时、试剂消耗量大

1.2 双缩脲法

常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质检测。

原理：双缩脲（NH3CONHCONH3）是 3 分子的脲经180℃左右加热，放出1分子氨后得到

的产物。 在强碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物（肽键中的氮原子和铜离子配价结合），称为双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，因此可用来测定蛋白质含量。

测定范围：1~10mg（有的文献记载为1~20mg）

优点：较快速，干扰物质少，不同蛋白质产生的颜色深浅相近 缺点：①灵敏度差；

② 三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。

1.3 Folin-酚试剂法

原理：Folin-酚法的原理与双缩脲法大体相同，利用蛋白质中的肽键与铜结合产生双缩脲反应。同时也由于

图解各种悬挂形式的优缺点

前言：在我们看车买车的过程中经常会在车辆的简介表中见到诸如麦弗逊式，双叉臂式，多连杆式，双连杆式，四连杆式，扭力梁式，拖拽臂式等多种前后悬挂系统。这些专业名词，看着就让人头晕．有些人索性置之不理，其实汽车悬挂系统是选择汽车极其重要的参考依椐，它决定着汽车的稳定性，舒适性，安全性是汽车关键的部件之一。

详细解析各种悬挂形式的优缺点

简单的来说悬挂系统就是指由车身与轮胎间的弹簧和避震器与车架连接部分组成的整个支持系统。悬挂系统应有的功能是支持车身，改善驾驶与乘坐的感觉，因为使用不同的悬挂系统，会使驾驶者与乘客在车辆行驶过程中都有不同的感受。

而现在大多数厂家在自己的车型上无论装配什么样的悬挂系统，都通通宣传自己的操控性如何好，乘坐如何舒适，这种宣传也在某种程度使驾驶者产生了误区，出现一些因车辆失控造成的车祸。一般说来汽车的悬挂系统分为二种即非独立悬挂和独立悬挂，由于人们对车子操控性与乘坐舒适性的要求越来越高，所以非独立悬挂系统已渐渐淘汰。

定义：

1、非独立悬挂系统

非独立悬挂系统的结构特点是两侧车轮由一根整体式车架相连，车轮连同车桥一起通过弹性悬挂系统悬挂在车架或车身的下面。非独立悬挂系统具有结构简单

DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, Hilden, Germany)试剂盒中文操作说明书 作者: Allanflying (站内联系TA) 发布: 2012-09-11

一．利用DNeasy? Blood & Tissue试剂盒提取样本总DNA 1．前处理： 注意：

1） 石蜡包埋组织的DNA一般小于650bp，还要视样本类型与保存年限而定。 2） 固定剂一般为福尔马林或酒精。不推荐用蛾酸固定的样本。 3） 溶解时间随样本类型和溶解状态而定。 4） 产量视样本类型和保存年限而定。推荐用50-100ul的AE缓冲液洗脱纯化的DNA。 5） 开始前要预热孵化器或水浴锅至37℃，用于操作步骤9）。 1.石蜡包埋组织的前处理 操作步骤：

1） 将小片石蜡包埋的组织（小于25mg）放入2ml离心管中（自备）。 2） 加入1200ul的二甲苯，用力涡旋震荡。 3） 最大转速室温（15-25°）离心5分钟。 4） 移液枪吸去上清。小心不要吸去沉淀。

5） 往沉淀中加1200ul的

各种消毒剂优缺点

（备注：气体检测浓度单位ppm与毫克/立方米的换算关系）

2008-12-29 12:07:41| 分类： 默认分类 阅读251 评论0 字号：大中小 订阅

一、 含氯消毒剂

凡是能溶于水，产生次氯酸的消毒剂统称含氯消毒剂。它是一种古老的消毒剂，但至今仍然是一种优良的消毒剂。通常所说的含氯消毒剂中的有效氯，并非指氯的含量，而是消毒剂的氧化能力，相当于多少氯的氧化能力。该消毒剂分为以氯胺类为主的有机氯和以次氯酸为主的无机氯。前者杀菌作用慢，但性能稳定，后者杀菌作用快速，但性能不稳定。

常见消毒剂型：

① 液氯，含氯量大于99.5%（V/V）； ② 漂白粉：含有效氯25%（W/W）； ③ 漂白粉精：含有效氯80%（W/W）； ④ 三合二，含有效氯56%（W/W）；

⑤ 次氯酸钠，工业制备的含有效氯10%（W/W）； ⑥ 二氯异氰尿酸钠，含有效氯60%（W/W）； ⑦ 三氯异氰尿酸，含有效氯85-90%（W/W）； ⑧ 氯化磷酸三钠，含有效氯2.6%（W/W）。 杀菌原理：含氯消毒剂的杀菌机理有3点：

① 次氯酸的氧化作用：次氯酸为很小的中性分子，它能通过扩散到带负电荷的菌体表面，并通过细胞壁穿透到菌体内部起氧化作用，破坏细菌的磷

DNA提取

191

论　著 　

线粒体DNA提取方法的比较3

李伟文　陆松敏　刘建仓　武　凡　李　萍　柏干荣

第三军医大学野战外科研究所(重庆,400042)

　　摘要　目的将提取线粒体DNA的碱变性法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线Triton法、粒体DNA的方法。方法分离Wistar大鼠小肠上皮细胞,用3种方法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase8亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA。结果改进高盐沉淀法线粒体DNA量最多,Triton法最少。OD260 ～1.85间。将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于OD280均在1.78结论改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,PCR扩增,测定出了线粒体DNAATPase8亚基基因序列。产量多的优点,该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序。

关键词　线粒体;DNA;分子遗传学

　　1981年,Anderson用氯化铯密度梯度分离得到线粒体DNA(mtDNA),进行了全序列分析。此后,mtDNA的研究日益得到重视。本实验将Triton法、碱变性法与改进高盐沉淀法进行了比较,发现后者具有简便、经济、易重复等优点。1　材料和方法111112　细

介绍了目前常用的各种数据融合方法的优缺点。

数据融合方法

随着交通运行状态评价研究的不断发展，对数据的准确性和广泛覆盖性提出了更高的要求，在此基础上，不同的数据融合模型被引进应用于交通领域中来计算不同检测设备检测到的数据。现阶段，比较常用的数据融合方法主要有：表决法、模糊衰退、贝叶斯汇集技术、BP神经网络、卡尔曼滤波法、D．S理论等方法。

1现有方法应用范围

结合数据融合层次的划分，对数据融合方法在智能交通领域的应用作以下归纳总结：

表 数据融合层次及对应的方法

2各种融合方法的优缺点

主要指各种融合方法的理论、应用原理等的不同，呈现出不同的特性。从理论成熟度、运算量、通用性和应用难度四个方面进行优缺点的比较分析，具体内容如下：

(1)理论成熟度方面：卡尔曼滤波、贝叶斯方法、神经网络和模糊逻辑的理论已经基本趋于成熟；D—S证据推理在合成规则的合理性方

介绍了目前常用的各种数据融合方法的优缺点。

面还存有异议；表决法的理论还处于逐步完善阶段。

(2)运算量方面：运算量较大的有贝叶斯方法、D．S证据推理和神经网络，其中贝叶斯方法会因保证系统的相关性和一致性，在系统增加或删除一个规则时，需要重新计算所有概率，运算量大；D．S证据推理的运算量呈指数增长，神经网络的运算量随

DNA提取

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论　著 　

线粒体DNA提取方法的比较3

李伟文　陆松敏　刘建仓　武　凡　李　萍　柏干荣

第三军医大学野战外科研究所(重庆,400042)

　　摘要　目的将提取线粒体DNA的碱变性法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线Triton法、粒体DNA的方法。方法分离Wistar大鼠小肠上皮细胞,用3种方法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase8亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA。结果改进高盐沉淀法线粒体DNA量最多,Triton法最少。OD260 ～1.85间。将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于OD280均在1.78结论改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,PCR扩增,测定出了线粒体DNAATPase8亚基基因序列。产量多的优点,该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序。

关键词　线粒体;DNA;分子遗传学

　　1981年,Anderson用氯化铯密度梯度分离得到线粒体DNA(mtDNA),进行了全序列分析。此后,mtDNA的研究日益得到重视。本实验将Triton法、碱变性法与改进高盐沉淀法进行了比较,发现后者具有简便、经济、易重复等优点。1　材料和方法111112　细

在我们施工中常使用四种接头连接技术： 1、通常使用的钢筋闪光对焊；2、钢筋电渣压力焊；3、钢筋气压焊；4、钢筋直镙纹连接。 对于钢筋闪光对焊通长主要问题是易偏心和焊接电流不够，其它性能还是不错的；对于钢筋电渣压力焊的主要难控制问题是焊包不均匀和脆断；对于钢筋气压焊施工质量还是可靠的，但在工人施工是如果接头打磨不到位、打磨好的接头被二次污染或开始加热是烟炭污染就可能造成接头脆断；对于钢筋直镙纹连接，要特别注意丝纹的完整性和拧入长度问题。 一般柱构件里用钢筋电渣压力焊和钢筋直镙纹连接。梁构件里用钢筋直镙纹连接，板里钢筋用气压焊。 其实不管是那一种连接方式，最关键的还是我们要认真地去勤检查、多管理才能对结构有保证，才能出好活。

各种钢筋机械连接方式优缺点分析

我国粗钢筋机械连接技术是八十年代中后期才发展起来的，随着套筒冷挤压开发应用，近年来，钢筋机械连接发展较快，相继开发出锥螺纹、镦粗切削直螺纹、挤压肋滚压直螺纹、剥肋滚压直螺纹连接技术。

1、套筒冷挤压连接

是用高压油泵作动力源，通过挤压机将连接套筒沿径向挤压，使套筒产生塑性变形，与钢筋相互咬合，形成一个整体来传递力的。由于设备笨重，工人劳动强度大，设备保养不好易产生漏油污染钢筋，影响效力

TSP的几种求解方法及其优缺点

一、什么是TSP问题

旅行商问题，简称TSP，即给定n个城市和两两城市之间的距离，要求确定一条经过各城市当且仅当一次的最短路线。其图论描述为：给定图G=（V，A），其中V为顶点集，A为各顶点相互连接组成的边集，设D=（dij）是由顶点i和顶点j之间的距离所组成的距离矩阵，要求确定一条长度最短的Hamilton回路，即遍历所有顶点当且仅当一次的最短距离。

旅行商问题可分为如下两类：

1）对称旅行商问题（dij=dji，Πi，j=1，2，3，?，n）； 2）非对称旅行商问题（dij≠dji，?i，j=1，2，3，?，n）。

非对称旅行商问题较难求解，我们一般是探讨对称旅行商问题的求解。

若对于城市V={v1，v2，v3，?，vn}的一个访问顺序为T={t1，t2，t3，?，ti，?，tn}，其中ti∈V（i=1，2，3，?，n），且记tn+1=t1，则旅行商问题的数学模型为：minL=。

TSP是一个典型的组合优化问题，并且是一个NP完全难题，是诸多领域内出现的多种复杂问题的集中概括和简化形式，并且已成为各种启发式的搜索、优化算法的间接比较标准。因此，快速、有效地解决TSP有着重要的理论价值和极高的实际应用价值。