免疫共沉淀名词解释
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免疫共沉淀
免疫共沉淀 from WHU SKY
1用细胞刮子收细胞,3000rpm,5min,离心,去上清;或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温,冰上或4度冰箱或4度离心机。
2 PBS清洗,重复步骤1
3选择合适的bufer裂解细胞,现加1000XAL(一般核质均分布的建议使用NP-40,核内分布的建议使用High Salt ,只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer),加入1ml Buffer (106-107个细胞),4℃,30min(在功能旋转仪上旋转裂解)。 4 12000rpm,15min,离心取上清(若上清仍浑浊,可重复离心1-2次)50ul上清作为 Input,其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug(可根据抗体效价酌情增减),4℃,旋转2-4h,
加抗体时要计算使用相同抗体的样品数,取(N+1~2)*1ug,用小量裂解buffer
稀释,再均分到各样品中,以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间,准备Protein G(一个反应20ul纯beads,如果beads原管中液体和beads体积比是1:1,一个样品取总体积40ul,多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物)
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
免疫学名词解释
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免疫学名词解释
1、免疫(Immunity):免疫是指机体识别和清除一切抗原异物以保持自身稳定的生理反应,如果免疫系统失调,免疫反应过强、过弱或对自身成分发生免疫应答都将对机体造成损害。
2、免疫防御(immunologic defense):免疫防御指防止外界病原体入侵和清除已入侵病原体及有害的生物性分子,此功能就是机体的抗感染免疫。但异常情况下,免疫反应过强可引起超敏反应,而免疫功能过低则表现为易受感染或免疫缺陷病等。
3、免疫自稳:(immune homeostasis):免疫自稳指机体对自身成分的耐受,对自身衰老和损伤细胞的清除,阻止外来异物入侵并通过免疫调节达到维持机体内环境稳定的功能。
4、免疫监视(immunologic surveillance):免疫监视是指监督机体内环境出现的突变细胞及早期肿瘤,并予以清除。若此功能失调,体内突变细胞失控,可导致肿瘤发生,若病毒感染不能及时被清除,而出现病毒持续性感染状态。
5、淋巴细胞归巢(lymphocyte homing ):成熟淋巴细胞
免疫学名词解释
1、Lymphocyte homing(淋巴细胞归巢):The process by which particular subsets of lymphocytes selectively enter and residue in peripheral lymphoid organs. It’s mediated by homing receptor on T lymphocytes and addressin on endothelial cells.
2、Lymphocyte recirculation(淋巴细胞再循环):is the process by which lymphocytes continuously move between sites throughout the body through blood and lymphatic vessels, and it’s critical for the initiation and effectors phase of immune response.
3、Hapten(半抗原):Substances which can combine with TCR, BCR or A
免疫学名词解释
1、Lymphocyte homing(淋巴细胞归巢):The process by which particular subsets of lymphocytes selectively enter and residue in peripheral lymphoid organs. It’s mediated by homing receptor on T lymphocytes and addressin on endothelial cells.
2、Lymphocyte recirculation(淋巴细胞再循环):is the process by which lymphocytes continuously move between sites throughout the body through blood and lymphatic vessels, and it’s critical for the initiation and effectors phase of immune response.
3、Hapten(半抗原):Substances which can combine with TCR, BCR or A
免疫学名词解释
Dongke 0904 I love the way you lie. Copyright Zhoujia
《免疫学》名词解释
? 抗原(antigen, Ag):又称免疫原(immunogen),能够刺激机体产生抗体或效应淋巴细胞并且能与之特
异性结合的物质。
? 免疫原性(immunogenicity):抗原刺激机体免疫系统产生抗体和致敏淋巴细胞的性能。
? 反应原性(reactigenicity):抗原能与相应的免疫应答产物(抗体和致敏淋巴细胞)在体内或体外发生特
异性结合的性能
? 完全抗原(complete antigen):既具有免疫原性又具有反应原性的抗原。
? 不完全抗原(incomplete antigen):不具有免疫原性,只具有反应原性的抗原称不完全抗原,又称为半抗
原(hapten)。
? 载体:是能赋予半抗原以免疫原性的大分子物质,如BSA。
? 抗原决定簇(antigenic determinant,AD):抗原分子表面具有特殊立体构型和免疫活性的化学基团,又
称为抗原表位(epitope)
? 特
免疫学名词解释
1. 医学免疫学名词解释部分
免疫(immunity):是指机体识别“自己”与“非己”抗原,对自身抗原形成天然免疫耐受,对非己抗原发生排斥作用的一种生理功能。正常情况下,对机体有利;免疫功能失调时,会产生对机体有害的反应。
1. 固有免疫应答(innate immune response):也称非特异性或获得性免疫应答,是生物体在长期种系发育和进化过程中逐渐形成的一系列防御机制。
此免疫在个体出生时就具备,可对外来病原体迅速应答,产生非特异性抗感染免疫作用,同时在特异性免疫应答过程中也起作用。
2. 适应性免疫应答(adaptive immune response):也称特异性免疫应答,是在非特异性免疫基础上建立的,该种免疫是个体在生命过程中接受抗原性
异物刺激后,主动产生或接受免疫球蛋白分子后被动获得的。
3. 免疫防御(immunologic defence):是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。该功能正常时,机体可抵御病原微生物及其毒性产物的感染
和损害,即抗感染免疫;异常情况下,反应过高会引起超敏反应,反应过低或缺失可发生免疫缺陷。
4. 免疫自稳(immunologic homeostasis):是机体免疫系统维持内环境稳定的一种
免疫学名词解释
1. 医学免疫学名词解释部分
免疫(immunity):是指机体识别“自己”与“非己”抗原,对自身抗原形成天然免疫耐受,对非己抗原发生排斥作用的一种生理功能。正常情况下,对机体有利;免疫功能失调时,会产生对机体有害的反应。
1. 固有免疫应答(innate immune response):也称非特异性或获得性免疫应答,是生物体在长期种系发育和进化过程中逐渐形成的一系列防御机制。
此免疫在个体出生时就具备,可对外来病原体迅速应答,产生非特异性抗感染免疫作用,同时在特异性免疫应答过程中也起作用。
2. 适应性免疫应答(adaptive immune response):也称特异性免疫应答,是在非特异性免疫基础上建立的,该种免疫是个体在生命过程中接受抗原性
异物刺激后,主动产生或接受免疫球蛋白分子后被动获得的。
3. 免疫防御(immunologic defence):是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。该功能正常时,机体可抵御病原微生物及其毒性产物的感染
和损害,即抗感染免疫;异常情况下,反应过高会引起超敏反应,反应过低或缺失可发生免疫缺陷。
4. 免疫自稳(immunologic homeostasis):是机体免疫系统维持内环境稳定的一种
免疫学名词解释
Dongke 0904 I love the way you lie. Copyright Zhoujia
《免疫学》名词解释
? 抗原(antigen, Ag):又称免疫原(immunogen),能够刺激机体产生抗体或效应淋巴细胞并且能与之特
异性结合的物质。
? 免疫原性(immunogenicity):抗原刺激机体免疫系统产生抗体和致敏淋巴细胞的性能。
? 反应原性(reactigenicity):抗原能与相应的免疫应答产物(抗体和致敏淋巴细胞)在体内或体外发生特
异性结合的性能
? 完全抗原(complete antigen):既具有免疫原性又具有反应原性的抗原。
? 不完全抗原(incomplete antigen):不具有免疫原性,只具有反应原性的抗原称不完全抗原,又称为半抗
原(hapten)。
? 载体:是能赋予半抗原以免疫原性的大分子物质,如BSA。
? 抗原决定簇(antigenic determinant,AD):抗原分子表面具有特殊立体构型和免疫活性的化学基团,又
称为抗原表位(epitope)
? 特