原代细胞污染原因

交流

养成良好的无菌操作的习惯拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。

决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！

我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）

另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！

还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！ 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

1. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。

4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

2. 1.注

交流

养成良好的无菌操作的习惯拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。

决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！

我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）

另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！

还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！ 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

1. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。

4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

2. 1.注

综合设计性实验报告

学 院

課 程 实验项目 实验题目 专 业 年级、班别 姓 名 学 号 任课教师 完成日期

1

实验六 细胞培养

——小鼠表皮细胞的原代培养

摘要 目的 探讨体外分离和培养小鼠表皮细胞的方法。方法 采用脱臼法处死新生小鼠，结合

酶消化法和组织块法对新生小鼠表皮细胞进行了体外分离、培养。（用眼科剪把新生小鼠表皮细胞组织剪成小于1mm3大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将组织块接种于培养瓶中进行体外培养。）结果 新生小鼠表皮细胞克隆2~3d后开始形成，细胞呈梭形，体外培养一个星期后仍能够保持良好的生长状态。结论 采用该方法能够实现对小鼠表皮细胞的体外原代培养，并且细胞贴壁生长的速度比单纯采用酶消化法和组织块法大大提高。

［1］

关键词 原代培养 小鼠表皮细胞 酶消化法 组织块法

2

1前 言

目的 ：初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌

握无菌操作方法。意义 ：细胞培养技术目前已经广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学等领域，已发展成为一种重要的生物技术。为此

实验四 乳鼠肺细胞原代培养

一、实验目的

1.了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。

2.学习细胞消化、细胞计数方法。

二、实验原理

原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的地生长及繁殖。

三、实验用品

1.设备

CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、恒温水浴箱、离心机等。

2.器材

眼科剪（尖头、弯头）、眼科镊（尖头、弯头）、培养皿、纱布块（或不锈钢网）、玻璃漏斗、量筒、移液管、试管、锥形瓶、吸管、橡皮头、培养皿等。

上述器材均须彻底清洗、烤干、包装好，15磅灭菌30min。此外，还需显微镜、血细胞计数板、酒精灯、酒精棉球等。

3.试剂

（1）D-Hanks平衡盐溶液：即无钙、镁离子的Hanks液。

（2）细胞消化液：0.25％胰蛋白酶液（0.25g胰蛋白干粉，加D-Hanks平衡盐溶液100mL，溶解后过滤除菌，调pH值7.4）

（3）7.4％NaHCO3溶液。

（4）RPMI1640培养液。

以上溶液均经适当包装，除菌后备用。此外，还需胎牛血清和1000U/mL的青、链霉素液（双抗）。在RP

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

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新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代分离、培养与鉴定

作者：曾静玲

来源：《医学信息》2014年第09期

摘要：目的探究新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡepithelial cell， AT-Ⅱ）的原代分离、培养及鉴定方法，建立体外细胞模型。方法取SPF级新生Wistar大鼠肺脏，采用胰蛋白酶联合胶原酶消化法分离AT-Ⅱ，免疫黏附法纯化细胞，体外培养并进行传代研究，透射电镜鉴定细胞。结果 AT-Ⅱ细胞原代培养和传代研究成功，细胞生长状态良好。电镜观察到板层小体。结论采用改良方法获得的AT-Ⅱ细胞符合体外实验要求，第24～72h内处于最佳生长状态，是进行实验研究的良好时间段。

关键词：新生大鼠；肺泡Ⅱ型上皮细胞；原代培养；鉴定

肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡepithelial cells，AT-Ⅱ）是肺泡上皮细胞的干细胞，又被称为"颗粒性肺泡细胞"和"分泌细胞"，是一种多功能细胞。AT-Ⅱ除了能增殖成新的AT-Ⅱ细胞，还可分化为肺泡Ⅰ型上皮细胞（alveolar typeⅠepithelial cell，AT-Ⅰ）[1]。AT-Ⅰ和AT-Ⅱ共同组成肺泡上皮屏障。AT-Ⅱ约占肺泡细胞群的60%[2]，细胞形态为

如何阅读原代码

阅读代码作为开发人员是一件经常要做的事情。一个是学习新的编程语言的时候通过阅读别人的代码是一个最好的学习方法，另外是积累编程经验。如果你有机会阅读一些操作系统的代码会帮助你理解一些基本的原理。还有就是在你作为一个质量保证人员或一个小领导的时候如果你要做白盒测试的时候没有阅读代码的能力是不能完成相应的任务。最后一个就是如果你中途接手一个项目的时候或给一个项目做售后服务的时候是要有阅读代码的能力的。

收集所有可能收集的材料

阅读代码要做的第一件事情是收集所有和项目相关的资料。比如你要做一个项目的售后服务，那么你首先要搞明白项目做什么用的，那么调研文档、概要设计文档、详细设计文档、测试文档、使用手册都是你要最先搞到手的。如果你是为了学习那么尽量收集和你的学习有关的资料，比如你想学习linux的文件系统的代码，那最好要找到linux的使用手册、以及文件系统设计的方法、数据结构的说明。(这些资料在书店里都可以找到)。 材料的种类分为几种类型 1.基础资料。

比如你阅读turbo / c2的源代码你要有turbo c2的函数手册，使用手册等专业书籍，msc 6.0或者java 的话不但要有函数手册，还要有类库函数手册

原代码的阅读方法

源码就是指编写的最原始程序的代码。运行的软件是要经过编写的，程序员编写程序的过程中需要他们的―语言‖。音乐家用五线谱，建筑师用图纸，那程序员的工作的语言就是―源码‖了。人们平时使用软件时就是程序把―源码‖翻译成我们可直观的形式表现出来供我们使用的。任何一个网站页面，换成源码就是一堆按一定格式书写的文字和符号，但我们的浏览器帮我们翻译成眼前的模样了。网站源码作为软件的特殊部分，可能被包含在一个或多个文件中。一个程序不必用同一种格式的源代码书写。例如，一个程序如果有C语言库的支持，那么就可以用C语言；而另一部分为了达到比较高的运行效率，则可以用汇编语言编写。 较为复杂的软件，一般需要数十种甚至上百种的源代码的参与。为了降低种复杂度，必须引入一种可以描述各个源代码之间联系，并且如何正确编译的系统。在这样的背景下，修订控制系统（RCS）诞生了，并成为研发者对代码修订的必备工具之一。还有另外一种组合：源代码的编写和编译分别在不同的平台上实现，专业术语叫做软件移植。

源码模板有很多种类，在这里我主要讲的是ZBLOG风格模板如何修改，此方法可以举一反三。对于WordPress、PJBLOG、动易CMS、织梦CMS、风讯CMS的风格模板修改

重金属污染物在土壤中的传播特征

重金属系指密度4.0以上约60种元素或密度在5.0以上的45种元素。砷、硒是非金属，但是它的毒性及某些性质与重金属相似，所以将砷、硒列入重金属污染物范围内。环境污染方面所指的重金属主要是指生物毒性显著的汞、镉、铅、铬以及类金属砷，还包括具有毒性的重金属锌、铜、钴、镍、锡、钒等污染物。 随着全球经济化的迅速发展，含重金属的污染物通过各种途径进入土壤，造成土壤严重污染。土壤重金属污染可影响农作物产量和质量的下降，并可通过食物链危害人类的健康，也可以导致大气和水环境质量的进一步恶化。因此引起世界各国的广泛重视。目前，世界各国土壤存在不同程度的重金属污染，全世界平均每年排放Hg约1.5万 t、Cu为340万 t、Pb为500万 t、Mn为1500万 t、Ni为100万 t[1]。中国北方大城市的蔬菜基地和部分商品粮基地也存在着不同程度的重金属污染，如北京、天津、西安、沈阳、济南、长春、郑州等地；。

南方相对较轻，如福州、宁波、上海、武汉、成都等地。土壤重金属污染将会造成生态系统的严重破坏。从中国土壤资源状况看，到2000年底中国人均耕地仅为0.1 hm2，而且随着今后中国经济社会的发展如生态退耕、农业结构调整及自然灾害