小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验

实验四 小鼠巨噬细胞吞噬的观察 一、实验目的： 实验目的： 通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的实验， 通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的实验， 了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能。 了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能。 了解吞噬在机体非特异免疫中的重要作用。 了解吞噬在机体非特异免疫中的重要作用。

二、实验原理： 实验原理： 高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞，具有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中，在机体 的非特异免疫功能中起着重要的作用。当病原微生物或其 他异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又具有 趋化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异 物移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区 域的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质， 形成吞噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合， 形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。

三、实验仪器、材料和试剂 实验仪器、 (1)仪器、用具：显微镜、、解剖盘、注 )仪器、用具：显微镜、、解剖盘、 、、解剖盘 射器、吸管、载玻片、盖玻片。 射器、吸管、载玻片、盖玻片。 (2)材料：小鼠(体重 左右),鸡血。 )材料：小鼠(体重20g左右),鸡

安徽农学通报， An h u i A . S c i . B u l 1 . 2 0 1 3, 1 9 ( 2 3 )

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“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验"方法的改进与研究顾曙余梁鲁晓雪 李莲张雪茜李静曹祥荣(南京师范大学生命科学学院，江苏南京 2 1 0 0 2 3 )

摘

要：连续3 d给小鼠腹腔注射淀粉液，诱导并激活巨噬细胞，使用鱼红细胞为吞噬物，替代细胞实验教材所用的

鸡红细胞、羊红细胞，探索和改进实验方法，以便更清晰、有效地观察， J、鼠腹腔巨噬细胞对外来异物的吞噬作用。取鼠腹腔液制备涂片并固定，用G i e ms a染色法进行染色，显微观察巨噬细胞对鱼红细胞的吞噬作用。结果显示，采

用鱼红细胞作为吞噬物，细胞染色清晰，吞噬结果明显，可清晰显示大量吞噬鱼红细胞的巨噬细胞，吞噬百分率高， 便于实验观察和计数，有助于学生对巨噬细胞吞噬作用的理解和掌握。关键词：巨噬细胞；鱼红细胞；实验方法；吞噬

中图分类号

G 6 4 2 . 0

文献标识码

A

文章编号

1 0 0 7— 7 7 3 1 ( 2 0 1 3 ) 2 3 - 1 7 - 0 2

Ex pe r i me n t I m pr o v e me nt f o r t he Pha

四川大学实验报告

题目：巨噬细胞吞噬作用的观察

实验目的

1. 通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非

特异性免疫中的功能。

2. 掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。

3. 学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。

实验原理

1. 向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细

胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养” 。连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。

2. 台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。活细胞的细胞质膜对台

盼蓝有不透过性。巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。是一种溶酶体染色的方法。

3. 当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小

鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程

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四川大学实验报告

．实验材料及设备

1. 实验材料：

a) 连续2~3 天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只

b) 鸡红细胞悬液

c) 生理盐水

2. 实验设备：

a) 普通光学显微镜

b) 载玻片、盖玻片若干

c) 注射器

d) 染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等

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采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/\基因组DNA的提取

一：仪器：同方法一

二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前

三：操作

1.5ml 对数生长期细菌细胞

离心，12000rpm,1-2min

沉淀

溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr

离心，12000rpm,8-10min

沉淀

溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr

加入1.2ml的CTAB

酵母DNA提取方法

方法一：

石英砂法

1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于 200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入 3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡 13min，每隔 4min 将离心管取出用力甩几下，然后 65℃水浴 10min。 2、加入 200μL 5mol/L KAc，冰浴 8min； 3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；

4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇 200μL混匀后冰浴 8min，12000rpm×5min收集沉淀；

5、200μL TE 溶解，加入 RNase10μL，65℃水浴 10min； 6、加入 200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；

7、温柔地取上清 150μL ，加入 20μL 3 mol/L NaAc 及 375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集 DNA；

8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后 TE 溶解，-20℃保藏。

方法二：

蜗牛酶法

1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在

微生物实验报告

酵母菌的培养及观察实验

刘欣怡201100140057

生物科学基地班

组别：周一下午三组

同组者：曹平平，周楠，

刘艺，刘希伟

实验完成时间：2012年11月19号

一、实验目的

1、了解酵母菌的形态及出芽方式 2、学习区分酵母菌的死细胞和活细胞 3、掌握酵母菌子囊孢子的观察方法 4、巩固显微镜操作技术和无菌操作技术

二、实验器材

1．菌种 ：

酿酒酵母7d麦氏培琼脂（产孢培养基）斜面培养物，酿酒酵母2d YPD（酵母合成培养基）液体培养物。 2. 培养基 ：

酵母合成培养基，麦氏琼脂斜面 3、试剂：

0.01%美蓝水溶液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇，蒸馏水、香柏油、去离子水等。 4. 仪器

试管，锥形瓶，酒精灯，显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶，接种环，滴管，滤纸，镊子、培养皿等。

三、实验原理

1、培养基：

酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用

《生命科学文献与论文写作》课程论文

利用酵母菌生产蛋白质

摘要：蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着十分重要的作用，是生命机体几乎所有重要活动的承担者。酵母菌应用于生物领域由来以久。6000年来人们用这种微小的真菌制作面包、啤酒和酒。现今用于直接治疗疾病的人类蛋白质的生产，已经成为一个每年有着190亿美元产值的产业。但是这种生物大分子目前却不能大批量的生产。它们大都是费时费力的从培养皿中培养的动物（如中国仓鼠）细胞分泌提取的。基因工程研究人员发现了一种用低等的酵母菌来生产人类蛋白质的新技术。这种技术开辟了一条大量生产生物药品的新途径。酵母菌能够用来生产复杂的人类糖蛋白，这种技术对于治疗用人类蛋白的生产有着革命性的意义。更好、更便宜、更快、更安全，并提供了一个对产品的最终质量进行控制的手段。作为宿主的酵母最常用的是毕赤氏酵母和酿酒酵母。 关键词：酵母菌;生产;蛋白质

Production of proteins using the yeast

Abstract: Protein in cells and organisms of biological processes, play an important role in almost

山东大学实验报告2017年11月20日

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科目：微生物学实验题目：酵母菌死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：丁志康

一、 目的要求

1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 3、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。

二、 基本原理

1、酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍。大多数酵

母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方法。

2、美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化形成蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化性变为无色的还原性。因此。具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

3、子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中

利用重组酵母菌生产人胰岛素

摘要：利用重组酵母菌生成人胰岛素为以下流程：获得目的基因→构建重组质粒→构建基因工程菌→工程菌发酵→产物分离纯化→产品检验。其中前三个流程为产人胰岛素酵母工程菌的构建，根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码子， 采用基因半合成技术合成人胰岛素基因。将合成的胰岛素基因克隆到pPIC9质粒，构建了毕赤(Pichia)酵母重组表达载体pPINS319，用BglII线性化后用电转化法导入毕赤酵母GSll5菌株，经过营养筛选和PCR 复筛，得到含人胰岛素基因的毕赤酵母工程菌株。后三个流程为胰岛素的大规模发酵生产，通过补料-分批发酵获得发酵液，分离纯化后获得人胰岛素。纯化后的重组人胰岛素产品经SDS-PAGE检测，氨基酸组成分析及小鼠惊厥实验证明制得产品为有生物活性的人胰岛素。

关键词：重组酵母；人胰岛素；发酵；纯化；鉴定

Using recombinant yeast to produce human insulin

HuSheng 1142043040

Abstract：The proceedings of produce human insulin by recombinant yeast show as foll

实验一 酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

预习内容：

1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页） 2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页） 预习思考题：

1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？

2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？

3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？

4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它? 一、实验目的与要求

1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法； 2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、实验原理

1. 酵母菌

酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖