组织切片修块

1.从组织中提取材料的方法是制作切片的重要步骤。根据教学，科研和外部检查的具体要求，从人体（手术标本，活检标本，尸检标本）或动物中提取，确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学，组织学和病理学的基本理论知识，还需要掌握实际的手术技术。每个组织器官都有一定的位置和方法，不能随意切割组织作为生产材料，否则就无法实现教学，科研和临床诊断。具体要求如下：

（1）材料的新鲜度：获得的组织越新鲜越好。通常将人体组织分离，并杀死动物组织后将其快速固定以确保原始的形态结构。

（2）纸巾块的大小：所取纸巾块的理想体积为50px×50px×7.5px，以使固定液能快速，均匀地渗透到组织中，但纸巾块的理想体积因不同的准备材料和目的。例如，在进行病理检查和科学研究切片时，可以将组织块变薄0.1?5px，这可以缩短固定脱水的时间和透明度。如果制作示教部分，则厚度为0。

（3）请勿挤压纸巾块：用于切割纸巾块的刀子和剪刀应锋利，并且在切割过程中切勿来回锉刀。请勿将组织夹得太紧，以免因挤压而使组织和细胞变形。

（4）标准化采样位置：准确地根据解剖位置，并根据不同的病理位置和性质标准化病理标本的采样。

（5）选择组织块的切片：根据各器官的组织结构，确定切片的方向。纵向或横向切割通常是

切片法主要步骤 1、取材与固

（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。取材的动物要健康，材料愈新鲜愈好，应在致死后立即取材，防止组织细胞自溶变性；取材的器械要锋利；所取材料力求小而薄（以不超过0.5cm为宜），不能挤压和损伤。

（2）固定：将所取的材料立即投入固定液中，目的是使组织蛋白迅速凝固，使细胞内的结构和成分不再发生变化，保持组织细胞与活体相似的形态结构，固定后的组织块变硬，便于进一步处理。常用的固定剂有甲醛、乙醇、苦味酸或混合固定液。实验室常用Bouin固定液，固定时间为12～24小时，其固定的组织块不需进行水洗，可直接进行脱水。 2、脱水与透明

（1）脱水：固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去，以便石蜡的浸入。常用的脱水剂为乙醇，脱水过程必须循序渐进，从低浓度开始，逐步升高，使组织块中的水分逐渐被乙醇所取代。具体操作为：Bouin固定液固定的组织块可直接进入70％的乙醇进行脱水，时间12小时左右。（若材料暂不制片，可保存于70％乙醇中。）然后将组织块依次移入85％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ

石蜡切片的制作及注意事项

1脱水

将固定的组织取出，依次经过：50%酒精（已保存在70％的酒精中可省略）→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精（两次），每级35－45分钟，100%酒精第二次可适当缩短时间。

酒精浓度越高组织越容易变脆，时间不能太长。每次从低浓度更换到高浓度的酒精时，要把组织块用吸水纸吸干。

2 透明

100%C2H5OH＋二甲苯( 1 : 1 )30-40分钟， 二甲苯（Ⅰ）15分钟→ 二甲苯（Ⅱ）15分钟（易脆的组织可省略）。

二甲苯的收缩性强，极易使组织变脆，透明时间根据不同的组织适当调整。 3 透蜡

二甲苯 ＋石蜡 （ 1:1 ）30分钟， 石蜡（Ⅰ）40分钟→ 石蜡（Ⅱ）30分钟

浸蜡是将包埋剂取代二甲苯渗透入整个组织的过程,通常在恒温箱中进行,恒温箱的温度应该设置成高于石蜡熔点2～3 ℃。

浸蜡的时间长短根据不同的组织器官适当调整。

4 包埋

5切片

将凝固的蜡块修整成合适的方块，上下边要平行，并固定在小木块上，切片厚度6-12um，一般7-8um。

切片刀倾斜角一般以20—30度为宜，切片时力要均匀一致，以每分钟40-50转为宜。

夏季切片时,为保持蜡块硬度，可把蜡块放于冰柜中,切片时再取出；胶质成分较多的组织蜡块,

组织块石蜡包埋的步骤：

1. 取材：尽量活杀，在处死30min内取材完毕，组织块的大小一般为（1.0-1.5cm）

*1.0cm*(0.2-0.3cm) 2. 固定：常用甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1:9比例配制而成。固定时间

以12-24h为宜。（4℃冰箱可放置1-3个月） 3. 冲洗：将组织块放在固定的容器中用流水冲洗24h.

4. 脱水：一次70%酒精2h, 80%酒精2h, 90%酒精1h, 95%酒精40min,无水乙醇Ⅰ40min, 无水乙醇Ⅱ30min。可将组织放于70%酒精中过夜。 5. 透明：将脱水后组织直接浸入二甲苯透明剂中（二甲苯Ⅰ, 二甲苯Ⅱ），每次透明

为10min。 6. 浸蜡：常规制片常用熔点高于56℃以上的石蜡，普通采用56℃-58℃石蜡。先将组

织浸入软蜡Ⅰ1h左右, 再浸入软蜡Ⅱ40min；硬蜡Ⅰ40min, 硬蜡Ⅱ1h。（一般浸蜡时间为3-4h）软蜡熔点为45℃-50℃，硬蜡熔点为55℃-60℃。 7. 包埋：将蜡液注入包埋硬具中，迅速将组织块平放入蜡液中，摆正并铺平，然后移

至冷却台，使组织块同蜡液凝固在一起的过程。（硬蜡凝固定型）

石蜡切片法：

在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为“

病理组织切片的制作过程

1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：

(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材

组织病理切片的制作过程

1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：

(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3

～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块:

切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位:

要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5)

组织病理切片的制作流程

1． 取材

组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：

(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求

冷冻切片

实验材料：固定好的鼠脑 试剂：30%蔗糖；包埋剂；1*PBS 用品与仪器：冷冻切片机；刀片；24孔板

实验步骤：（切片的地点在1楼和6楼，1楼的切片机在使用前需要预约）

1、将前一天放于4%PFA中固定的鼠脑样品取出放入30%蔗糖中进行固定。（鼠脑刚放入时会浮在液面上，放置过夜，待沉淀后可进行切片操作）

2、进行切片操作之前要进行一些准备工作，首先，在24孔板（每个鼠脑大概需要2个24孔板）每个孔中加入1ml PBS，用来舒展脑片。其次，具有自带荧光的鼠脑的切片需要使用包有锡纸的24孔板，防止其荧光淬灭

3、开切片机，将CT和OT温度都调节为-20℃，切片厚度设定为40μm。

4、用包埋剂包埋底座，凝固后将底座置于切片机相应位置上，调整好底座的位置，使之与刀片平行，转动切片转轮，将底座切平，注意不要让底座的厚度太大，根据切口的情况调整切片机使之运作良好。（注意切片的转轮要在每一次切片完成后锁定，防止切伤手指） 5、沿与冠状切平行的方向将鼠脑的小脑部分切除，将剩余的脑放置在底座上（注意鼠脑的中缝线要对准底座上的豁口），底座平行放置于-20℃环境下，可看到鼠脑由底座部分向上逐渐变白。

6、待鼠脑完全变白后，向鼠脑上添加包埋剂，等待鼠脑

1. 体式显微镜下，用显微剪刀沿角膜缘剪下角膜，将眼杯置于固定液内（0.2M NaH2PO4

10ml + 0.2M Na2HPO4 40ml + 8%多聚甲醛 50ml），４℃固定过夜

2. 体式显微镜下，用显微剪剪除虹膜，并剪断晶体悬韧带，晶体自动游离出眼杯，尽量减

少对眼杯扰动，将眼杯置于30%蔗糖（sucrose）溶液内（0.1M PB配置 PH=7.4），４℃脱水过夜沉底

3. 将眼杯由30%蔗糖溶液取出，置于20%蔗糖溶液与OCT包埋剂（TFM? Tissue Freezing

Medium）2：1体积比例混合液中，室温浸泡摇动30min 4. 体式显微镜下，于平皿内用软纸采用虹吸方式吸干眼杯内外水份，尽量减少对眼杯扰动 5. 在模具（tissue-tek 4565）上标记样品情况，向模具内倒入20%蔗糖溶液与OCT包埋剂

2：1体积比例混合液，将眼杯开口向上置于液体上，先用显微镊子按压一侧眼球（下方），使液体缓慢浸满眼杯，而后将眼杯在琼脂糖翻转，杯口朝下置底，上方眼球标记点朝向模具标记位置并置中，并使鼻侧或颞侧眼球靠近模具壁，将模具置于钢板上，移至-80℃冰箱（保证眼杯在内不动），静置10min

6. 将模具置于冰冻切片机恒冷箱内1

病理学实验教学组织切片示教图选汕头大学医学院病理教研室

组织损伤与修复Tissue and Cellular Injury

左正常气管上皮，右鳞状上皮化生(Left: Normal columnar ciliated epithelium Right: Squamous metaplasia in bronchitis) (Prof. Orr提供)

变性-结缔组织玻璃样变(Hyaline degeneration of connective tissue)

变性-1.17 血管壁玻璃样变(Hyaline degeneration of vesscular wall)

局损示教2--脾中央动脉玻变400倍(Arteriolar hyaline in the spleen)

变性-1.18 血管壁玻璃样变(Hyaline degeneration of vesscular wall)

变性-1.21 粘液样变性(Mucoid degeneration)

粘液样变性(Mucoid degeneration)

肝内含铁血黄素, Prussian blue 反应阳性，证明含铁离子. (Hemosiderin granules in liver .Left HE stai