有关pcr主要过程包括

一、选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。 1．以下哪种物质在PCR反应中不需要（ ）

A．Taq DNA聚合酶 B．dNTPs C．Mg2+ D．RNA酶 E．合适pH缓冲液 2．以下哪种酶可耐高温（ ）

A．Taq DNA聚合酶 B．Hind Ⅲ C．T4连接酶 D．RNA酶 E．Klenow片段 3．PCR反应正确过程应为（ ）

A．退火→变性→延伸 B．变性→退火→延伸 C．退火→延伸→变性 D．变性→延伸→退火E．延伸→变性→退火

4． PCR技术的本质是（ ）

A． 核酸杂交技术 B． 核酸重组技术C． 核酸扩增技术 D． 核酸变性技术 E． 核酸连接技术 5．Taq DNA聚合酶酶促反应最适温度为（ ）

A．37℃ B．50℃～55℃ C．70℃～75℃ D．80℃～85℃ E．94℃～95℃ 6．能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为（ ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光PCR仪 E．实时PCR仪 7．在下列哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（ ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光实时PCR仪E．定性PCR仪 8．

PCR引物设计过程

（一）设计引物前应的准备工作：

1．准备载体图谱，大致准备把片断插在那个部分 2．对片断进行酶切分析，确定一下那些酶切位点不能用 3．准备一本所买公司的酶的商品目录，便于查酶的各种数据及两种酶是否可以配用

（二）引物的结构：5’—保护碱基+酶切位点+引物配对区—3’ 1．两个酶切位点 2．酶切位点的保护碱基 3．5’端保护碱基 4．3’端保护碱基 5．引物配对区

（三）设计引物所要考虑的问题 1．酶切位点

两个酶切位点应是载体上的，所连接片断上没有这两个位点，且距离不能太近，否则往往导致两个酶都切不好。因此，两个酶切位点要紧挨在一起，只能切一个，除非恰好是与上面两个酶在一起的酶切位点，最好隔四个核苷酸。且不能有碱基的交叉，比如AGATCTTAAG，这样的位点比较难切。 2．酶的选择

最好使用双酶切效率高的，但两个酶切点最好不要是同尾酶（切下来的残基不要互补），否则效果相当于单酶切，最好使用具有共同buffer，且较常用的酶（如hind3，bamh1，ecor1等），这样可以省钱。 3．Tm的计算。

Tm是由互补的DNA区域决定的，而不互补的区域对DNA的溶解是没有作用的。因此，对于引物的Tm，只有和模板互补的区

PCR引物设计过程

（一）设计引物前应的准备工作：

1．准备载体图谱，大致准备把片断插在那个部分 2．对片断进行酶切分析，确定一下那些酶切位点不能用 3．准备一本所买公司的酶的商品目录，便于查酶的各种数据及两种酶是否可以配用

（二）引物的结构：5’—保护碱基+酶切位点+引物配对区—3’ 1．两个酶切位点 2．酶切位点的保护碱基 3．5’端保护碱基 4．3’端保护碱基 5．引物配对区

（三）设计引物所要考虑的问题 1．酶切位点

两个酶切位点应是载体上的，所连接片断上没有这两个位点，且距离不能太近，否则往往导致两个酶都切不好。因此，两个酶切位点要紧挨在一起，只能切一个，除非恰好是与上面两个酶在一起的酶切位点，最好隔四个核苷酸。且不能有碱基的交叉，比如AGATCTTAAG，这样的位点比较难切。 2．酶的选择

最好使用双酶切效率高的，但两个酶切点最好不要是同尾酶（切下来的残基不要互补），否则效果相当于单酶切，最好使用具有共同buffer，且较常用的酶（如hind3，bamh1，ecor1等），这样可以省钱。 3．Tm的计算。

Tm是由互补的DNA区域决定的，而不互补的区域对DNA的溶解是没有作用的。因此，对于引物的Tm，只有和模板互补的区

如何防止PCR形成引物二聚体？

在PCR后的电泳带形成很宽很亮的带，对照marker时都不容易看出其大小，具体是什么原因呢？PCR时模板DNA浓度一般是多少最合适？

答：1这条亮带如果在100bp一下就可以考虑是引物二聚体了，形成引物二聚体的原因很多，如引物设计的不好，在两端容易形成回文结构或是两条引物之间也可能会互补配对；退火温度没有达到最佳，实在不行就做个温度梯度吧；再就是试着改变一下循环数，也许会有帮助。

PCR模板大约在104-106个拷贝。

答2：我觉得是目的条带含量太多了，如果点样太多，负载量太大，就会造成跑胶时条带太宽。可以试着减少模板量，稀释10倍或是减少循环数。

答3：1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法； 2. 可能模板有问题；PCR后的电泳带形成很宽很亮的带，可能是模板浓度过高或者循环次数过多所导致；

3. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度；

4. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的； 5. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的D

听课记录包括两个主要方面。一是教学实录；二是教学评点。 课堂实录包括：

1、听课年、月、日、地点、专业、年级、教师姓名、性别、年龄、职称、课程名称和章节等。 2、教学过程。（包括教学环节和教学内容）

A课程引入 、B 新课内容，简要记录主要教学内容（板书要点，课堂操作演示，学生活动情况）、C 课堂小结 课堂点评：

听课者必须对本节课教学的优缺点做评估以及提出的建议。主要包括如下几个方面：

A 对教材处理的评价：备课是否认真，对教学内容是否熟悉，中心是否突出（教学重点和难点）。

B对教学方法及目标的评价：方法选择是否恰当，有无贯彻启发性原则，有无注重能力的培养，能否调动学生的学习积极性。

C 对教学语言和教态的评价：语言表达是否准确、生动，教态是否端正自然，声音是否宏亮，普通话是否准确。

D 对板书的评价：板书是否设计合理、重点突出、脉络清晰、字迹端正。

具体些，一堂课的基本评课条目包括

1、备课认真，准备充分、教学内容熟悉，教学环节各部分时间安排合理。 2、能基本达到教学目标，突出了重点，突破了难点。

3、能精心设计好如何提出问题，提出问题有针对性,能激发思维。 4、教学语言表达准

怀孕期间注意事项主要包括：

1、避免饮浓茶、浓咖啡及可乐等饮料，其实，孕妇最理想的饮料是白开水。 2、尽量避免到剧院、舞厅、商店等人集聚的地方,避免与患流感、风疹、传染性肝炎等患者接触。避免滥用药物。病毒及药物都会影响小孩的发育。

3、远离电磁污染，听音响、看电视时要保持一定的距离。尽量少用电脑、微波炉、手机等辐射性工具。

4、在切生肉后一定要洗手，吃涮羊肉等时必须要把肉炒熟涮透，防止生肉中的弓形体原虫感染胎儿。

5、洗衣要时用肥皂,不要用洗衣粉；洗碗要选用不含有害物质的洗洁精。 6、淘米、洗菜不要将手直接浸入冷水中,因为寒冷刺激会引起流产的危险。 7、养成良好的饮食习惯,不挑食、不偏食，保持营养平衡。

你好！怀孕一个月主要营养是叶酸，补充叶酸可以防止贫血、早产，防止胎儿畸形，这对妊娠早期尤为重要，因为早期正是胎儿神经器官发育的关键。孕妈妈要常吃富含叶酸的食物，如面包、面条、白米和面粉等谷类食物，以及牛肝、菠菜，龙须菜、芦笋、豆类及苹果、柑橘、橙子等。除了食补以外，还可以口服叶酸片来保证每日所需的叶酸。另外可以多喝鲫鱼豆腐汤，鸡汤，对孕妇的营养是很有帮助的。

深圳健安医院妇产科祝你健康，生活愉快！

叶酸要一直吃。。要补钙 饮食方

《写作参考材料1》课题研究方案主要包括以下几个方面：

（一）课题名称

课题名称就是课题的名字。这看起来是个小问题，但实际上很多人写课题名称时，往往写的不准确、不恰当，从而影响整个课题的形象与质量。这就是平常人们所说的“只会生孩子，不会起名字”。那么，如何给课题起名称呢

第一，名称要准确、规范。

准确就是课题的名称要把课题研究的问题是什么，研究的对象是什么交待清楚，课题的名称一定要和研究的内容相一致，不能太大，也不能太小，要准确地把你研究的对象、问题概括出来。

规范就是所用的词语、句型要规范、科学，似是而非的词不能用，口号式、结论式的句型不要用。因为我们是在进行科学研究，要用科学的、规范的语言去表述我们的思想和观点。课题就是我们要解决的问题，这个问题正在探讨，正开始研究，不能有结论性的口气。

第二，名称要简洁，不能太长。

不管是论文或者课题，名称都不能太长，能不要的字就尽量不要，一般不要超过20个字。这次各个学校课题申报表中，我看名称都比较简洁，我就不再多说了。

（二）课题研究的目的、意义

研究的目的、意义也就是为什么要研究、研究它有什么价值。这一般可以先从现实需要方面去论述，指出现实当中存在这个问题，需要去研究，去解决，本课题的研究有什么实际作用，然后，再写课

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基本理论

1、网络系统集成主要包括哪些内容？

需求分析、网络规划、产品选型、网络系统设计、系统集成的实施、应用软件开发及调试、系统的测试、用户培训、竣工文档编制、项目验收、售后技术支持和系统维护与质保等

2、在网络安全结构设计中，主要有双宿主机、主机过滤和子网过滤三种基本结构，请结合示意图简述它们的特点。

（1）双宿主机是一台具有多个网络接口的主机，它可以进行内部网络与外部网络之间的寻径，可以充当与这台主机相连的若干网络之间的路由器。

（2）主机过滤结构防火墙由过滤路由器和堡垒主机共同组成。

（3）在这种结构中，有两台过滤器连接到公共子网，一台位于公共子网与内部网络之间，而另一台位于参数网络与外部网络之间。这样，入侵者必须通过两台路由器和堡垒主机的安全控制才能抵达网络，同时还可以限制某些服务使之只能在指定的主机上与内部网络站点之间传递。

3、在项目管理中，网络项目质量控制的方法有哪些？

（1）工程化方法

（2）阶段性冻结与改动控制

（3）里程碑式审查与版本控制

（4）面向用户参与的原型演化

（5）强化项目管理，引入外部监理与审计

（6）全面测试

4、什么是项目管理？它有哪些特点？

项目管理就是把各种知识、技能、

《写作参考材料1》课题研究方案主要包括以下几个方面：

（一）课题名称

课题名称就是课题的名字。这看起来是个小问题，但实际上很多人写课题名称时，往往写的不准确、不恰当，从而影响整个课题的形象与质量。这就是平常人们所说的“只会生孩子，不会起名字”。那么，如何给课题起名称呢？ 第一，名称要准确、规范。

准确就是课题的名称要把课题研究的问题是什么，研究的对象是什么交待清楚，课题的名称一定要和研究的内容相一致，不能太大，也不能太小，要准确地把你研究的对象、问题概括出来。

规范就是所用的词语、句型要规范、科学，似是而非的词不能用，口号式、结论式的句型不要用。因为我们是在进行科学研究，要用科学的、规范的语言去表述我们的思想和观点。课题就是我们要解决的问题，这个问题正在探讨，正开始研究，不能有结论性的口气。 第二，名称要简洁，不能太长。

不管是论文或者课题，名称都不能太长，能不要的字就尽量不要，一般不要超过20个字。这次各个学校课题申报表中，我看名称都比较简洁，我就不再多说了。

（二） 课题研究的目的、意义

研究的目的、意义也就是为什么要研究、研究它有什么价值。这一般可以先从现实需要方面去论述，指出现实当中存在这个问题，需

（一）、管理缺失

现金流量是企业资金管理的生命。部分项目缺少对现金流量的认识，不讲资金预算管理 盲目采购，超定额储备不考虑市场因素随意生产，使企业库存物资不断积压，资金长时间得不到周转，一些项目投产后因缺乏流动资金而无法启动生产。由于管理的缺失直接导致企业贷款利息和管理费用支出的增加，最终影响资金使用效率和企业经济效益资金分配失衡 。 （二） 资金运筹不合理

不少企业只根据国家规定对资金实行跟踪管理，对资金管理的缺失致使资金运筹不合理 资金流向过于分散，使用效率低下，资金被滞留在一些不足轻重的项目里，沉淀的资金往往得不到充分的利用，无法发挥其应有的作用，使得资金的时间效益完全丧失。 （三） 资金管理意识的差

资金管理意识的差，导致一些企业经营管理者缺少对资金时间价值的认知，在对资金进行筹集、运用、分配时缺乏科学性、合理性和计划性。例如有些企业一味地追求产量和产值 对高成本的产量风险投入过多甚至不惜负债经营，使资金分配比例失衡，长期项目投资过多给企业资金运转带来困难，财务风险增加。 （四） 监管不力

目前，企业之间经济纠纷不断，资金相互拖欠，其主要原因就在于企业缺乏有效的监管机制，导致资金管理严重失控，资金流量不明，流动资金不足。