人外周血中性粒细胞分离液

中性粒细胞分离实验步骤

一、中性粒细胞初步分选

试剂与耗材：人淋巴细胞分离液、RP16４0、1５mｌ离心管4支,棉球,止血带、碘伏、采血针,５mlEＤTA抗凝采血管2支。1mｌ枪及枪头.

分离步骤:

1.所有试剂恢复至室温;

2.EDTA抗凝采血管收集人外周血10mｌ;

3.分别将5mｌ外周血加入５mｌ人淋巴细胞分离液中（15ml离心管中进行)；

注意动作轻柔缓缓加入;

4.５00g离心,3０-３5分钟,室温；

5.离心后收集低带中性粒细胞，分两层,第一层为单核细胞,第二层为中性粒细

胞;(若离心后分层不明显则多离心5—10分钟)

6.将RP１6４０用纯水稀释为50％RP１64０用于重悬中性粒细胞,恢复细胞活

性。(5-１0分钟)

7.４00g离心10分钟,去上清，收集中性粒细胞，重悬于ＲP16４0中,细胞计数。

二、中性粒细胞磁珠分选

试剂耗材及设备：磁力分选器,磁柱，CD15磁珠试剂盒，磁珠分选缓冲液50ml，RP1６４０，1ｍl枪及枪头,２0微升枪与枪头,１5ｍl离心管4支，细胞计数板。步骤:

1.制冰,保证磁力分选器可以放入冰盒内操作，在４—8℃内进行分选；

2.配液磁珠分选缓冲液（50ml PBS液中含2mmｏl/L EDＴA,０.5%BＳA，P

Ｈ=7。2);

3.将

中性粒细胞胞外诱捕网和自身免疫性肾炎相关性的研究 1.1自身免疫性肾炎简介

现研究认为，肾炎的最常见的病因是免疫系统的损害，绝大多数的肾炎都归因于自身免疫性肾炎。自身免疫性肾炎的诊断依赖于肾穿刺活检，其病理形态的分类在帮助判断病因方面只能起到相对小的作用，因为大部分情况下，相似的病理形态表现可能是由不同的病因引起的，只有某种特定的病理形态往往能提示特定的病因。但病理分型对于用药指导有很大的帮助。自身免疫性肾炎的分类复杂，因为根据不同的分类方法可以有不同的分类，而且同一分类方法下的各分类之间是相互包含交叉的，没有一清二楚的分界[1]。自身免疫性肾炎可以发生在任何年龄的人群，调查显示，在美国和澳大利亚16%的成人表现出蛋白尿、血尿、低肾小球率过滤等肾炎症状[2, 3]，发展中国家80%以上的儿童都患有微小病变性肾炎，提示患病率很高，中国还没有相关的统计数据。根据最近的一次大规模肾活检统计结果，原发性肾小球肾炎仍是中国肾病最重要的病因。按照病理类型分析，IgA肾病占原发性肾病的45.26%，其次为非IgA间质增生性肾炎和膜性肾病[4]。过去的几十年中，随着对自身免疫性肾炎分子机制逐层深入的认识和肾穿刺活检的普遍开展，使自身性免疫性肾炎的早期诊治和生

目的 探讨猪外周血单个核细胞(PBMC)最佳分离条件,为寄生虫免疫学研究提供有效的方法。方法使用猪淋巴细胞分离液,在不同离心转速和时间条件下分离猪PBMC,观察所得云雾状PBMC层的厚度,计算细胞得率及细胞活力,以确定猪淋巴细胞分离液分离猪PBMC的最佳实验条件。同时采用文献报道的人淋巴细胞分离液分离猪PBMC的分离条件(1500r／min,30min)分离猪PBMC,比较两者分离PBMC

维普资讯

9 12

中国血吸虫病防治杂志 2 0 0 7年第 1第 3 9卷期 C i JS hsoC nrl 0 7Vo.9 N . hn c i o t 0, 11, o 3 t o2

[章编号] 1 0—6 1 20 ) 30 9— 4文 0 56 6 (0 7 0—1 20

论著

Fcl密度梯度离心法分离猪外周血 iol单个核细胞条件的探讨张素华，林丹丹，张关娟，陈雪松，徐进梅，单昊，吴观陵，海玮吴[要]目的摘的方法。方法

探讨猪外周血单个核细胞 (B P MC)佳分离条件，寄生虫免疫学研究提供有效最为使用猪淋巴细胞分离液，不同离心转速和时间条件下分离猪 P MC,察所得云在 B观

雾状 P MC层的厚度，算细胞得率及细胞活力， B计以确定猪淋巴细

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

结缔组织病和风湿病

2013-6-20

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

风湿(rheumatism)是指骨骼肌肉的慢

性疼痛。 风湿性疾病是泛指累及骨，关 节及其周围软组织的一组疾病，而无论 其病因是什么(感染性，免疫性，代谢 性，内分泌性，退行性，地理环境性， 遗传性，肿瘤性)都包括在内，范围相 当广泛，根据美国风湿病学会编著的 《风湿病概要》一书将风湿病分为十大 类，弥漫性结缔组织病(CTD)只是其 中的一类。

2013-6-20

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

结缔组织是人体的支架，具有保护重要 脏器和机体行动的功能。其包括皮肤， 骨骼，肌腱，筋膜，血管和所有脏器的 间质，均属于结缔组织，由于结缔组织 分布广，所以结缔组织病大多是一种多 系统多器官的病变。

2013-6-20

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

一.结缔组织病的共同临床特点 (一)大多有发热和疼痛为主的临床表

现：关节，肌肉，皮肤或内脏疼痛。 (二)病程大多呈慢性，甚至终身不愈， 常可导致肢体残疾或脏器功能障碍，病 情往往有发作—缓解—发作的特点。少 数呈急性或暴发性过程。 (三)同一种结缔组织病表现可有很大 差异，而不同的结缔组织病又有相似的 表现。病变累及多个系统

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

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2013-6-20

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

风湿(rheumatism)是指骨骼肌肉的慢

性疼痛。 风湿性疾病是泛指累及骨，关 节及其周围软组织的一组疾病，而无论 其病因是什么(感染性，免疫性，代谢 性，内分泌性，退行性，地理环境性， 遗传性，肿瘤性)都包括在内，范围相 当广泛，根据美国风湿病学会编著的 《风湿病概要》一书将风湿病分为十大 类，弥漫性结缔组织病(CTD)只是其 中的一类。

2013-6-20

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

结缔组织是人体的支架，具有保护重要 脏器和机体行动的功能。其包括皮肤， 骨骼，肌腱，筋膜，血管和所有脏器的 间质，均属于结缔组织，由于结缔组织 分布广，所以结缔组织病大多是一种多 系统多器官的病变。

2013-6-20

白细胞减少症和粒细胞缺乏症

一.结缔组织病的共同临床特点 (一)大多有发热和疼痛为主的临床表

现：关节，肌肉，皮肤或内脏疼痛。 (二)病程大多呈慢性，甚至终身不愈， 常可导致肢体残疾或脏器功能障碍，病 情往往有发作—缓解—发作的特点。少 数呈急性或暴发性过程。 (三)同一种结缔组织病表现可有很大 差异，而不同的结缔组织病又有相似的 表现。病变累及多个系统

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

一、采集血样，室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可；血量一般为1ml；一般地，1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞（PBMC，即淋巴细胞核单核细胞）。

二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的离心管，为管1，先加入500ul淋巴细胞分离液；另一个1.5ml 无菌无酶的离心管中，装有500ul血样的真空管和500ul PBS（磷酸盐缓冲液），1：1混匀的混合物，共1ml。然后缓慢把混匀的血样PBS混合液加入到有淋巴细胞分离液的管1中，注意要缓慢，使血样尽量位于提取液上层，不能太用力让血细胞扩散到下层，就没办法离心分层了。（这一步的操作应该尽量快速的完成，因为时间长了，红细胞就会在重力作用下沉降，混入到提取液中，对后面的离心造成影响）然后离心。1500rpm,15min,20摄氏度。 说明：

1、从采集血样到开始实验的时间最好不超过4小时。实验过程中一直保持室温条件，一般20摄氏度比较适中，因为细胞的最适温度是体温37摄氏度，但是温度降低又可以降低细胞的代谢，两者有些矛盾，所以取中间温度比较理想。

2、关于淋巴细胞分离液的注意事项：启封后应置4℃保存避免微

实验六 人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备

实验目的

1、了解人体外周血淋巴细胞短期培养的原理及方法。 2、初步掌握人外周血淋巴染色体的制备技术。 实验用品

1、器材：超净工作台（或无菌接种箱）、光学显微镜（附照相装置）、隔水式恒温培养箱、干燥箱、水平式离心机、冰箱、恒温水浴箱、高压蒸气消毒锅、真空泵（或电动吸引器）、10ml刻度离心管、10ml培养瓶（可用环磷酰胺药瓶代）、2ml注射器、吸管、滴管、试管架、三角烧瓶、染色缸、酒精灯、各种试剂瓶、载玻片、镊子、吸水纸、洗耳球、搪瓷盘、铝制饭盒、消毒用酒精棉球与碘酒棉球等。

2、材料：人外周血

3、试剂：RPMI l640培养液（含10~20％小牛血清）、碳酸氢钠（AR）、PHA、青霉素、链霉素、肝素、5％NaHCO3溶液、1mol／L HCl、三蒸水或双蒸水、0.075 mol／L KCl、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液，pH6.8的磷酸缓冲液。

实验原理

据测定，健康成年人体内的淋巴细胞总数约有500×109，其中约有2％在外周血中循环。在外周血的淋巴细胞中，以小淋巴细胞为主（每毫升血中的含量可达1~3×106个）。在通常情况下，它们都处于间期的G0或G1期，所以很难见到正在分裂的淋巴细

外周血细胞形态学检验及技巧 卫生部北京医院血液科 郑天林

卫生部临床检验中心 彭明婷 谷小林 陆红

一． 血液学及血细胞形态学临床应用：

● 是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验学的基础工作。

● 血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速简捷的要求。

● 近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞遗传学、融合基因、造血干细胞及其细胞因子、骨髓造血微环境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系细胞发生及其疾病表现，细胞增殖动力学与细胞凋亡以及骨髓组织病理学应用，推动了血液的临床与实验室的新知识迅猛发展。

● 当前血液病不能单凭临床与形态学 作出 诊断，必须以临床和血细胞形态学为基础，将免疫学、细胞遗传学及分子生物学新知识、新技术应用到血液学中，构成现代临床血液学与分子生物学诊断技术，弥补形态学的经验性与主观性带来负面缺陷，才能提高血液病的诊断与治疗水平。

● 进入 90 年代以来，国内外采用多学科联合技术综合诊断技术与方案：

○ FAB-AL （ 1976 ）、 NCL （美国国家癌症研究所）对 FAB-AL 分型的补充 （ 1995 ）、 AL-MIC 分（类）型， MIC 及

论文

１０７５

论著

Ｂ淋巴细胞刺激因子及其受体ＢＡＦＦ．Ｒ在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

何志翔蔡小燕林小军许艳丽唐莼叶静华秦曙光傅君舟

【摘要】目的探讨Ｂ淋巴细胞刺激因子（ｅｌｙｓ）＆其受体ＢＡＦＦ－Ｒ在系统性红斑狼疮（ｓＬＥ）患者外周

血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中的表达情况及临床意义。方法应用流式细胞仪技术，检测９０例ＳＬＥ患者ＰＢ ＭＣｓ中Ｂｌｙｓ及其受体ＢＡＦＦ－Ｒ的表达，井与４５例健康志愿者检测结果进行比较。分析Ｂｌｙｓ及ＢＡＦＦ－Ｒ的表达与ＳＬＥ病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系。结果①ＳＥＥ患者ＰＢＭＣｓ中Ｂｌｙｓ及ＢＡＦＦ—Ｒ的表述百分率比健康对照组高（均Ｐ＜０．００１）。其中，活动期和稳定期ｓＬＥ患者Ｂｌｙｓ和ＢＡＦＦ－Ｒ的表达率均高于健康对照组（Ｐ＜０．００１或Ｏ．０１）；活动期和稳定期比较，Ｂｌｙｓ的表达较高（Ｐ＜Ｏ．０５），而ＢＡＦＦ－Ｒ的表达无统计学差异。②ＳＬＥ患者ＰＢＭＣｓ中Ｂｌｙｓ的表达水平与ＳＬＥ疾病活动指数评分呈正相关（ｒ＝０．７２８，Ｐ＜０．００１），与免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ呈正相关（ｒ＝０．６９１，Ｐ＜０．００ｌ和ｒ＝０．４５３，Ｐ＜０．０１），与补体ｃ３、ｃ４呈负相关（ｒ＝一０．

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