哺乳动物表达系统与哺乳动物细胞表达系统

哺乳动物基因工程

基因工程1 基因工程的基本概念 2 基因工程的基本原理 3 基因工程所需的基本条件 4 基因工程的操作过程 5 目的基因的克隆与基因文库的构建 6 大肠杆菌基因工程 7 酵母基因工程 8 哺乳动物基因工程

9 高等植物基因工程

8 哺乳动物基因工程A 高等哺乳动物基因工程的基本概念 B 高等哺乳动物的受体系统 C 高等哺乳动物的载体系统 D 高等哺乳动物的基因转移 E 利用哺乳动物工程细胞生产重组蛋白

8 哺乳动物基因工程A 高等哺乳动物基因工程的基本概念高等哺乳动物基因工程高等哺乳动物转基因技术 高等哺乳动物细胞基因表达技术

转基因动物个体 哺乳动物遗传性状改良 药物筛选研究评价模型 人体基因治疗

动物工程细胞 蛋白多肽物质大规模生产 药物筛选研究评价模型

8 哺乳动物基因工程B 高等哺乳动物的受体系统高等哺乳动物细胞的生长特性 高等哺乳动物受体细胞的条件 高等哺乳动物受体细胞的遗传标记 常用的高等哺乳动物受体细胞

高等哺乳动物细胞的生长特性正常的哺乳类动物细胞具有下列四大生物学特征： 锚地依赖性：细胞必须附在固体上或固定的表面才能生长分裂 血清依赖性：细胞必须具有生长因子才能生长 接触抑制性：细胞与细胞接触后，生长便受到抑制 形态依赖性

【教材分析】

本节教学内容是第五单元生物圈中的其它生物第一章动物的主要类群的最后一节。在学生依次学习了腔肠动物、扁形动物、线形动物、环节动物、软体动物、节肢动物、鱼、两栖动物、爬行动物、鸟之后，来学习脊椎动物中最高等的类群——哺乳动物。教材从生活在各种环境中的哺乳动物入手，通过生活情境和图片观察等活动，使学生掌握研究动物的基本方法以及应用所学基本知识的能力。虽然生活在不同环境中的哺乳动物形态各异，但是它们都具备有哺乳动物的主要特征，能够适应各种不同的生活环境。第二部分内容从生活入手，从有利有害两个方面介绍哺乳动物与人类生活的关系，使学生辩证地认识哺乳动物与人类生活的关系，认同人与动物共处一个地球，应和谐相处。

【学情分析】

八年级的学生大多活泼、好动，有强烈的求知欲及好奇心。适于开发他们的非智力因素，发展学生的个性特长。但这个年龄段的学生仍然处于以形象思维为主，向抽象思维转化的阶段。因此教师应充分调动学生的积极性，挖掘他们的知识经验，再通过一些直观手段，使学生在鼓励、点拨、启发和建议下通过自己的亲自观察、探究掌握知识。所以本节课是基于感性认识为主，再结合学生的逻辑推理能力，转化为理性的理解。

【教学目标】 知识目标

1.概述哺乳动物的主要

【教材分析】

本节教学内容是第五单元生物圈中的其它生物第一章动物的主要类群的最后一节。在学生依次学习了腔肠动物、扁形动物、线形动物、环节动物、软体动物、节肢动物、鱼、两栖动物、爬行动物、鸟之后，来学习脊椎动物中最高等的类群——哺乳动物。教材从生活在各种环境中的哺乳动物入手，通过生活情境和图片观察等活动，使学生掌握研究动物的基本方法以及应用所学基本知识的能力。虽然生活在不同环境中的哺乳动物形态各异，但是它们都具备有哺乳动物的主要特征，能够适应各种不同的生活环境。第二部分内容从生活入手，从有利有害两个方面介绍哺乳动物与人类生活的关系，使学生辩证地认识哺乳动物与人类生活的关系，认同人与动物共处一个地球，应和谐相处。

【学情分析】

八年级的学生大多活泼、好动，有强烈的求知欲及好奇心。适于开发他们的非智力因素，发展学生的个性特长。但这个年龄段的学生仍然处于以形象思维为主，向抽象思维转化的阶段。因此教师应充分调动学生的积极性，挖掘他们的知识经验，再通过一些直观手段，使学生在鼓励、点拨、启发和建议下通过自己的亲自观察、探究掌握知识。所以本节课是基于感性认识为主，再结合学生的逻辑推理能力，转化为理性的理解。

【教学目标】 知识目标

1.概述哺乳动物的主要

哺 乳 纲 动 物 分 类

原兽亚纲

单孔目

鸭嘴兽科：仅鸭嘴兽一种 针鼹科：２种针鼹

兽亚纲

后兽下纲 有袋目

负鼠总科

分布于南美的有袋类

负鼠科：约67种

小［鼠儿］科：仅小［鼠儿］1种 新袋鼠科：7种

袋鼬总科：分布于大洋洲的有袋类 袋鼬科：包括袋鼬、袋獾等，约50余种 袋狼科：仅袋狼一种，已灭绝

袋［豸齿］科：仅［袋豸齿］一种，又称袋食蚁兽 袋鼹科：仅袋鼹一种 袋狸总科 袋狸科：约17种 兔袋狸科：2种兔袋狸 袋貂总科 袋貂科：约13种 袋鼯科：约22种 树袋熊科：仅树袋熊一种 ［鼠足］鼯科：6种 蜜貂科：1种

袋熊科：毛鼻袋熊等3种 鼠袋鼠科：又称，约10种

袋鼠科：包括袋鼠、树袋鼠、袋等，50余种

真兽下纲 食虫目

哺乳动物第三大目，现生兽类大多起源于此目

无尾猥总科

无尾猥科：无尾猥、稻田猥等30余种，主要分布于非洲马达加斯加岛

獭鼩科：3种

沟齿鼩科：2种，分布于海地和古巴 金鼹总科

金鼹科：特产于非洲，约21种 刺猬总科

刺猬科：刺猬、鼠猬等，约22种 鼩鼱总科

鼩鼱科：分布广泛的食虫类，包括鼩鼱、白齿鼩、水鼩等270余种 鼹鼠科：包括鼹鼠、鼩鼹等，约33种

跳鼩目

以前置于食虫目，１９８４年后单列一个目

跳鼩科：特产于

哺 乳 纲 动 物 分 类

原兽亚纲

单孔目

鸭嘴兽科：仅鸭嘴兽一种 针鼹科：２种针鼹

兽亚纲

后兽下纲 有袋目

负鼠总科

分布于南美的有袋类

负鼠科：约67种

小［鼠儿］科：仅小［鼠儿］1种 新袋鼠科：7种

袋鼬总科：分布于大洋洲的有袋类 袋鼬科：包括袋鼬、袋獾等，约50余种 袋狼科：仅袋狼一种，已灭绝

袋［豸齿］科：仅［袋豸齿］一种，又称袋食蚁兽 袋鼹科：仅袋鼹一种 袋狸总科 袋狸科：约17种 兔袋狸科：2种兔袋狸 袋貂总科 袋貂科：约13种 袋鼯科：约22种 树袋熊科：仅树袋熊一种 ［鼠足］鼯科：6种 蜜貂科：1种

袋熊科：毛鼻袋熊等3种 鼠袋鼠科：又称，约10种

袋鼠科：包括袋鼠、树袋鼠、袋等，50余种

真兽下纲 食虫目

哺乳动物第三大目，现生兽类大多起源于此目

无尾猥总科

无尾猥科：无尾猥、稻田猥等30余种，主要分布于非洲马达加斯加岛

獭鼩科：3种

沟齿鼩科：2种，分布于海地和古巴 金鼹总科

金鼹科：特产于非洲，约21种 刺猬总科

刺猬科：刺猬、鼠猬等，约22种 鼩鼱总科

鼩鼱科：分布广泛的食虫类，包括鼩鼱、白齿鼩、水鼩等270余种 鼹鼠科：包括鼹鼠、鼩鼹等，约33种

跳鼩目

以前置于食虫目，１９８４年后单列一个目

跳鼩科：特产于

摘 要

哺乳动物DNA聚合酶Pol δ，是一个由四亚基组成的复合物，四个亚基分别是p125、p50、p68和p12。它不但在真核生物DNA复制过程中起着重要的作用，而且也参与DNA的修复和基因重组。在维持细胞周期的正常调节以保证基因组结构的完整性和遗传的稳定性等方面具有特殊的重要意义。

DNA在细胞内外各种因素的作用下可产生严重的损伤，破坏了基因组的完整性。为了应对复制压力或基因损伤试剂造成的DNA损伤，细胞自身拥有一套防御机制─DNA损伤应答（DDR）。这一机制通过募集和装备一系列与修复相关的蛋白复合物来协调整个应答网络系统，包括DNA修复、细胞周期检查点的激活以及细胞的凋亡等。目前普遍认为DDR是一个复杂的过程，它能够使DNA进行修复，固定损伤突变的位置或者通过细胞的死亡来消除损伤。就像Derks等提到的，传感蛋白检测到DNA损伤，并将一系列的相关因子招募到损伤点。例如，修复因子等。相应的，这些感受器扩大对效应器的损伤信号，如p53和微小RNA，它们能够控制细胞多种通路的活性，如细胞周期的停滞和凋亡。传感器和DDR信号的转导主要依赖于蛋白质和蛋白质的相互作用以及蛋白质翻译后的修饰。转录组学、全基因组RNA转录表达水平和蛋白质组学的研究极大

他们都是什么生物呢？

第七节

哺乳动物

问题：说出你知道的哺乳动物 要求：说的多、快、对

一、常见的哺乳动物

就你所知道的告诉我吧！

你能否发现它们有哪些共同点？ 提示： 1.外部形态 2.感官 3.消化 4.内部结构 5.生殖发育

外部形态体表 被毛

感官和神经系统哺乳动物的神经系统 由脑、脊髓和神经组 成 。具有发达的大脑， 能对不同的刺激做出 不同的反应。

家兔的神经系统

哺乳动物的神经系统由 脑、脊髓和神经组成 。 具有发达的大脑，能对 不同的刺激做出不同的 反应。

消化

家兔的牙齿

虎的牙齿

牙齿的分化既提高 了哺乳动物的摄食 的能力，又增强了 门齿，适于切断食物 对食物的消化能力。 犬齿，适于撕裂肉食 臼齿，适于磨碎食物

观察兔的牙齿等特征

牙齿的作用：撕咬、切断和咀嚼食物

兔牙齿分为门齿和臼齿，门齿适于切断食物，臼齿适于 磨碎食物，与食草生活相适应； 狼的牙齿除具有门齿和臼齿外，还有犬齿，适于撕裂食 物，与食肉生活相适应。 牙齿的分化既提高了哺乳动物摄取食物的能力，又增强了对 食物的消化能力。

游泳健将——海豚

植食性动 物的盲肠 特别发达

家兔的内部结构胸腔肺 肝脏 小肠 盲肠 心脏

膈胃 大肠 膈是哺乳动物 的特有结构

腹腔

生 殖

胎生、哺乳

家兔6个月就成年，能繁殖后代

重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制技术评价一般原则

二OO六年十月

目 录 1 前言

1.1 目的和意义 1.2 适用范围 1.3 局限性

2 宿主细胞的选择

2.1 宿主细胞来源、历史和一般特性 2.1.1 宿主细胞来源和历史 2.1.2 宿主细胞一般特性

3 重组工程细胞克隆构建过程、筛选及鉴定 3.1 目的基因来源

3.2 表达载体的具体构建步骤

3.3 载体引入宿主细胞的方法及重组工程细胞的筛选 3.4 重组工程细胞的初步鉴定 4 重组工程细胞库的建立 4.1 细胞库建立 4.2 建库细胞的管理 5 细胞库检定 5.1 细胞鉴定

5.1.1 细胞种属的鉴定 5.1.2 致瘤性试验

5.1.3 目的基因和表达框架分析 5.1.4 表达产物检测 5.2 微生物污染检测

5.2.1 细菌、真菌和支原体检查 5.2.2 病毒因子的检查 5.2.2.1 体外试验 5.2.2.2 体内试验

5.2.2.3种属特异性病毒的检定 5.2.2.4 逆转录病毒的检测 5.2.2.4.1 感染性试验 5.2.2.4.2 逆转录酶检测 5.2.2.4.3 透射电镜检查 6 细胞稳定性研究 6.1 贮存条件下的稳定性

6.2 传代/扩增

项目名称： 哺乳动物后肾发育重要环节及关键调控

起止年限：依托部门：因子的研究

谢院生 中国人民解放军总医院 2011.1至2015.8 总后勤部卫生部

首席科学家：

二、预期目标

1、 本项目的总体目标

通过系统而创新性地研究肾脏发育过程中三个重要环节（后肾间充质和输尿管芽的相互作用、帽状间充质细胞分化为上皮细胞以及肾单位的形成）所涉及的关键分子的表达变化、功能作用及其主要分子信号通路，阐明哺乳动物后肾发育过程中细胞定向分化的分子调控机制。建立和完善肾脏输尿管发育异常和遗传性肾病患者及家系成员的临床信息及生物样本资源库，开展相关疾病的遗传分子诊断。提出并验证急性肾损伤修复再生的过程是肾脏发育某些过程的重现的学术观点，成功应用肾脏发育关键因子促进损伤肾脏的修复再生。

建立健全我国肾脏发育生物学研究的科研基地和技术平台，在肾脏发育生物学研究的国际前沿，取得一批具有自主知识产权的研究成果，提升我国在肾脏发育生物学研究领域的国际学术地位。建立、培养、锻炼一支从事肾脏发育生物学基础和应用研究的高素质、高水平的学术团队，培养一批热爱肾脏发育生物学研究并具有一定专业技术水平的博士后、博士和硕士研究生等后备队伍。

2、 五年预期目标

（1） 阐

Invitrogen公司

pcDNA=CMV; pEF=EF-1a; pUb=Ub;-TOPO=TOPO克隆，/Gateway；-His/V5/myc tagged;抗性Neo/Zeo/Hyg/Bsd

载体名称 pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO pEF5/FRT/V5-DST

pEF5/FRT/V5-D-TOPO pSecTag/FRT/V5-His-TOPO pcDNA5/FRT

分子增强内含

启动子 量 子 子 5.2 CMV 7.5 EF-1a

V5

5.8 5.2 CMV

/

/

/

V5,6*Igk信号，分泌表达

His 融合蛋白

RNA聚合酶

N端Tag C端Tag V5,6*

His

特殊序列

中止poly抗性检测表达方

复制起始 克隆 纯化

序列 A 筛选 方法 式

TOPO

Ni

稳定

Bsd Neo Bsd

备注

有

BGH pUC

Gatewa

抗V5y

抗体

Hyg

检测

TOPO

Ni

酶切 Neo

形成相同基因的细胞；必须和Fip重组表达载体pOG44共转染Fip细胞

pcDNA3.2/V5-G

W/D-TOPO pcDNA6.2/V5-G

W/D-TOPO pcDNA3.2