氨基酸的分离与测定方法

4.1 光度分析法[5] [6]

β-氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸的条件下可以生成蓝紫色物质[7]，其颜色深浅主要与β-氨基丙酸的浓度有关。因此可利用此显色反应采用比色法定量测量β-氨基丙酸。我在实验中发现很多因素如浓度、pH值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大的影响。如忽视这些因素会使实验产生很大的误差。就此显色反应的最佳条件我做了初步的探究。 4.1.1试剂的配制：

缓冲液的配制：配制pH= 6.00的NaAc－HAc缓冲溶液 β-氨基丙酸标准溶液的配制：

用电子天平准确称取1.020 gβ-氨基丙酸(生化纯)，溶于250ml pH=6.00缓冲溶液中，得到C = 4.080 g/L标准溶液。

茚三酮试剂的配制：称取0.5g茚三酮溶于100ml蒸馏水中，得到5g/L的茚三酮水溶液。

4.1.2标准曲线的确定

分别准确移取0.30ml、0.40ml、0.50ml、0.60ml、0.70ml、0.80ml、0.90ml、1.00ml标准液于8个比色管中，用pH=6.00的缓冲溶液稀释到5.00ml再加入1ml茚三酮水溶液充分摇匀，将其放在沸水浴中加热10min。冷却到室温，用7230型分光光度计在569nm下测其吸光度。以吸光

过程生化成分的变化

。

试验的初步结果看出

糖类物质中单糖是随氧化过程逐渐增加的分钟含量最高,。

,

淀粉和双糖却是不断儿茶素,、

减少

,

果胶指数是氧化

多酚类物质中,,

,

茶多酚总量。

、

黄酮类物质

都是随氧化时间延长而递减的化产物来看茶黄素氧化步结果。

与此相反,

非水溶性茶多酚却是不断增加的

从茶多酚的氧

一

分钟已达高峰

茶红素却不断增加分钟比较合适,

根据上述多种成份的变化

以及从茶黄素与茶红素的比例来看

酶性氧化

这是结合感观审评得出的初

茶叶中游离氨基酸的测定中国农科院茶叶研究所生理生化研究室近廿年来,氨基酸的分析方法有了很大的进展,

不仅操作精、

,

而且以全程自动化闻名

。

本文研究了茶叶中氨基酸的纸上层析分离法种氨基酸的关系,

,

利用单向层析

双向层析法从茶叶中分离出

,

并且进行了定性及定量工作。

,

对研究茶叶中氨基酸的组成与含量及其和茶叶品质

是一件必不可少的工作

方法如下取样品,,

一

,

用“

的帕甲酸水

肠乙醇提取

,

然后将过滤液蒸干加水以正丁醇,

进行点样肠乙醇

。

以正丁醇,冰醋酸水,

为展谱剂进行单向层析。

帕氨水。

二

酸相和正丁醇

作展谱剂进行双向层析

用苟三酮作为显色

剂

以纯品作对照确定各种氨基酸的位置进行定量

茶咖啡碱柱层分离测定法中国农科院茶叶研究所生理生化室茶样与氧化镁共热进行予热处理游离出咖

烟叶中游离氨基酸总量的测定

一、原理 游氨基酸可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物。在一定范围内，颜色的深浅游离氨基酸含

量成正比，可用分光光度计，在570nm下测得蓝紫色溶液的消光值，根据标准曲线计算未知样品中游离氨基酸的含量。 二、实验材料、仪器和试剂

1. 材料 新鲜烟叶 2. 仪器

（1）研钵、漏斗、三角瓶、滤纸 （2）具塞刻度试管20ml

（3）刻度吸管（5ml、1ml、移液枪0.1ml） （4）沸水浴电炉 （5）分光光度计 3. 试剂

（1）10％乙酸

（2）水合茚三酮试剂：称取0.6g茚三酮加入15ml正丙醇溶解，再加入30ml正丁醇及60ml乙二醇，最后加入9mlpH4.5乙酸—乙酸钠缓冲液，混匀，贮于棕色瓶于冰箱内保存，10日内有效。 （3）乙酸—乙酸钠缓冲液（PH4.5）：称取54g乙酸钠(NaAc·3H2O)，加入蒸馏水加热至沸，冷却后加30ml冰乙酸，用蒸馏水定容至100ml。

（4）氨基酸标准液：称取80℃烘干的亮氨酸46.8mg，以10％异丙醇溶解，并定容至100ml，取此液5ml用蒸馏水稀释至50ml，即为每毫升含氮5ug的标准液。 （5）0.1％的抗坏血酸：50mg溶于50ml水中，现用现

实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法

一、目的：

通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理：

层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。

层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。

层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。

纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。纸层析属于分配层析法。分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具

实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法

一、目的：

通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理：

层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。

层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。

层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。

纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。纸层析属于分配层析法。分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具

实验一 纸层析法分离氨基酸

一、实验目的

1．掌握纸层析的基本技术

2．学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸

二、实验原理

纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法：利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数、经层析而达到分离的目的。在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数，若以K表示分配系数：

层析溶剂(亦称展层剂或推动剂)是选用特定的有机溶剂和水组成的。滤纸纤维素与水有较强的亲和力(葡萄糖基的-OH基能与H2O通过氢键相互作用)，能吸附很多水分(可达22%滤纸重，其中约有6%的水与纤维素结合成复合物)，这部分被吸附的水因扩散作用降低而形成固定相。反之，展层剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可在滤纸的毛细管中自由流动而形成流动相。层析时，点有样品的滤纸一端浸入展层剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其的溶质依据自身的分配系数在这两相间不断进行分配，即随着有机溶剂不断向前移动，溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配，结果使溶质离开原点不断向前移动。由于溶质中各组分的分配系数不同，导致前行中出现移动速率差异，因而通过一定时间的层析，样品中的不同组分即可实现分离。 层析中某物质的移动速率以Rf值表示

HPLC 的使用之一

氨基酸分析测定及衍生化方法

2

吕莹果1，，张　晖2，孟祥勇2，陈能飞3

（1. 河南工业大学粮油食品学院，　河南郑州　450001；2. 江南大学食品学院，　江苏无锡　214122；

3. 广州江大和风香精香料有限公司，　广东广州　510660）

摘　要：该文综述氨基酸分析方法进展和分类，并对柱前衍生化RP–HPLC分析氨基酸方法及常

用衍生化方法进行比较和探讨。关键词：氨基酸；衍生化；RP–HPLC

Methods for amino acid analysis and derivatization

2

LV Ying-guo1，，ZHANG Hui2，MENG Xiang-yong2，CHEN Neng-fei3

（1. College of Grain Oil and Food，Henan University of Technology，Zhengzhou 450001，China；2. School of Food Science and Technology，Southern Yangtze University，Wuxi 214122，China；

3. Guangzhou ADD Co.， Ltd.， Guangzhou 51

分离工程 期末论文

氨基酸的提取与精制

Extraction and Separation of

Amino Acid

学 院：

化学工程学院

专业班级：

化学工程与工艺 化工081

学生姓名：

於马骥 学 号： 050811139

指导教师：

戴卫东（副教授）

2011年6月

期末论文中文摘要

氨基酸的提取与精制

摘 要：综合介绍了氨基酸提取过程中常用的分离技术以及近期的发展动态.如沉淀法、离子交换法、膜分离法和萃取法.并提出了氨基酸提纯精制的关键环节-结晶过程中应该注意的问题. 氨基酸是生物有机体的重要组成部分,是组成蛋白质的基本单元,具有极其重要的生理功能。提取和精制是氨基酸工业生产中的一个重要环节,在其投资费用中占有很大比例

关键词：氨基酸; 沉淀法; 离子交换法; 膜分离; 反应萃取; 反向微胶团

期末论文外文摘要

××××Title××××

Extraction and Separation of Amino Acid

Abstract: The separation techniques of amino acids extraction,such as precipi

蛋白质的酶促降解及氨基酸代谢

一.选择题

1．生物体内大多数氨基酸脱去氨基生成α-酮酸是通过下面作用完成的。( ) A.氧化脱氨基 B.还原脱氨基 C.联合脱氨基 D.转氨基 2．下列氨基酸中( )可以通过转氨作用生成α－酮戊二酸。 A.Glu B.Ala C.Asp D.Ser 3．转氨酶的辅酶是( )

A.TPP B.磷酸吡哆醛 C.生物素 D.核黄素 4．以下对L－谷氨酸脱氢酶的描述( )是错误的。 A.它催化的是氧化脱氨反应 B.它的辅酶是NAD或NADP

C.它和相应的转氨酶共同催化联合脱氨基作用 D.它在生物体内活力不强

5．鸟氨酸循环中，尿素生成的氨基来源有( )

A.鸟氨酸 B.精氨酸 C.天冬氨酸 D.瓜氨酸 6．磷酸吡哆醛可参与下面氨基酸的( )反应？

A.脱羧反应 B.消旋反应 C.氧化

氨基酸与核苷酸代谢

（一）名词解释

1．蛋白酶（Proteinase） 2．肽酶（Peptidase）

3．氮平衡（Nitrogen balance） 4．转氨作用（Transamination） 联合脱氨基作用

8．尿素循环（Urea cycle）

9．生糖氨基酸（Glucogenic amino acid） 10．生酮氨基酸（Ketogenic amino acid） 11．核酸酶（Nuclease）

12．限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease） 13．一碳单位（One carbon unit）

（二）英文缩写符号

1．GOT 2．GPT 3．APS 4．PAL 5．PRPP 6．SAM 7．GDH 8．IMP

（三）填空

1．生物体内的蛋白质可被 和 共同作用降解成氨基酸。

2．多肽链经胰蛋白酶降解后，产生新肽段羧基端主要是 和 氨基酸残基。 3．胰凝乳蛋白酶专一性水解多肽链由 族氨基酸 端形成的肽键。 4．氨基酸的降解反