端粒体延长的最佳方法

端粒长度检测方法：

实时荧光定量PCR分两部分进行，分别测定端粒和内参基因RPLPO（核糖体大亚基PO蛋白基因）的Ct值，每次反应需要设定标准曲线。端粒（T）重复拷贝数与单拷贝基因（S）的比率，即T/S比率可以得出端粒的相对长度，而T/S比率与端粒长度成正比关系。T/S计算公式如下：

T/S= [2CT(telomeres)/2CT(single copy gene)]=2-ΔCT

1基因组DNA的提取

1. 提取人外周血基因组DNA

以试剂盒提取获得人外周血基因组DNA。

2实时荧光定量PCR测定DNA端粒长度

1. 引物序列

端粒 Tel 1：浓度675 nmol/L

序列 5’-GGTTTTTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGT-3’

端粒 Tel 2：浓度1350 nmol/L

序列5’-TCCCGACTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTA-3’

RPLPO基因 hRPLPO1：浓度800 nmol/L

序列5’-CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA -3’

RPLPO基因 hRPLPO2：浓度800 nmol/L

序列5’-CAGCAAGTGG-GAAGGT

端粒长度测量方法:

DNA印迹法(Southern blot, SB)

SB已广泛应用于分析DNA和端粒结构. 用限制性核酸内切酶Hin fⅠ或Rsa Ⅰ消化DNA, 然后琼脂糖电泳分离不同大小的片段, 转移到硝酸纤维或尼龙膜上. 用32P同位素或生物素、碱性磷酸酯酶标记的端粒特异探针与其杂交(CCCATT)n. 末端限制酶切片段(TRF)通过光密度计定量测量. 选用Hin fⅠ或Rsa Ⅰ是因为这两种酶能频繁的切断DNA, 使亚端粒区域变得尽可能小. 用于SB分析的DNA应该是没有被打碎和纯度较高的, 但是因为DNA的高分子量、高黏度使得这点较难保证. TRF法得到的数据除代表所有染色体端粒的长度外, 还包括部分亚端粒区长度. 因此TRF法不能提供端粒的实际长度.

杂交保护分析法(hybridization protection assay,HPA)

HPA需要制备基因组DNA、细胞或组织溶胞产物同吖啶酯(AE)标记端粒的探针进行杂交, 检测发光强度, 确定端粒在Alu序列中比例. 研究表明, Alu序列中比例为0.01的端粒大约与2 kb的TRF法测量的端粒长度对应. HPA不需要完整的或没有修剪的DNA, 但是, 推荐使用下限为10

一、延长组地层划分及标志层

在准确划分直罗组、延安组地层的基础上；利用现场随钻录井资料与邻井资料对比，依靠岩性组合初步确定延长组的顶部层位；然后在下一步钻探过程中，加强地质观察，争取找准延长组的各个标志层；并不断对初步确认的上部地层进行校对，同时预测油层位置，为准确卡取油层做准备。

1.标志层

延长组地层对比划分中标志层主要有K1、K2、 K3、K9标志层及辅助标志层K4、K5、 K6 、K7、 K8。是小层对比划分的重要依据，在有些地区，进入延长组，顶部地层一般为长4+5，局部地区仅存长3部分地层， K7、 K8、K9标志层在本地区也不存在，所以本章对K7、 K8、K9标志层不再赘述。现将其它标志层岩性、电性特征及所处位置叙述如下：

① K6标志层：位于长4+5顶部，是长3与长4+5地层的分界线，为控制长3底界划分的主要标志。

电性特征：尖刀状低电阻、低感应、高声波时差、高伽玛值、大井径等特点。其下声波时差和自然伽玛曲线形态呈似锯齿状，锯齿段厚6～7米。

岩性特征：为薄层黑色泥岩（或凝灰质泥岩），其下也有薄层泥岩间断出现。

西XXX井录井剖面图自然电位(mv) -50 100 浅侧向 0 100 声波时差(微秒/米) 0 500 自然

端粒及其端粒酶的研究

端粒是真核生物线形染色体末端的一种特殊的异质化结构,在稳定染色体及防止染色体在复制时缩短方面有重要作用。其行为的异常被认为同细胞衰老及肿瘤的发生发展有密切关系。端粒酶是一个特殊的具有反转录活性的核糖核蛋白。近来的研究表明,端粒酶已不仅仅能维持端粒的长度,它更有助于肿瘤的形成。笔者综述了端粒的缩短所扮演的双重角色,以及端粒酶的激活与肿瘤之间的关系。

细胞的复制期限被认为由最终导致衰老的两个机制决定,一个是累积的DNA损伤,另外一个是端粒的进行性缩短。

但在人类端粒及端粒酶的基础研究中,还存在着许多难点,如:人端粒末端的精细结构,端粒的非端粒酶延伸机制;人端粒酶的具体结构及其基因所在的位置;端粒酶的激活机制及其活性调节等,均有待于回答。

衰老是一种多基因的复合调控过程,表现为染色体端粒长度的改变、DNA损伤(包括单链和双链的断裂)、DNA的甲基化和细胞的氧化损害等。这些因素的综合作用,才造成了寿命的长短。

人为什么会衰老,以至走向死亡呢?有研究者对导致人体细胞衰老的原因提出了程序假说和错误积累假说。人类的细胞并不能无限制地重复分裂,在分裂50~60次后便会停止。细胞不再继续分裂的机体组织,便呈现出衰老和机能低下的状态。随着细

端粒及端粒酶的主要结构特点及作用

端粒是真核生物线性染色体末端重要的DNA-蛋白质复合结构，由TTAGG重复序列和大量的端粒结合蛋白组成。主要是由六个端粒结合蛋白TRF1、TRF2、POT1TIN2、TPP1和Rap1组成的复合体起着保护端粒的作用，被称为是遮蔽蛋白。其中端粒重复序列结合因子TRF1和TRF2是两个主要的端粒结合蛋白，它们通过相互作用来维持端粒的正常结构和功能。

端粒的功能：1、保护染色体末端：真核生物的端粒DNA-蛋白复合物，如帽子一般，保护染色体末端免于被化学修饰或被核酶降解，同时可能还有防止端粒酶对端粒进行进一步延伸的作用。改变端粒酶的模板序列将导致端粒的改变，从而诱导细胞衰老和死亡。

2、防止染色体复制时末端丢失：细胞分裂、染色体进行半保留复制时，存在染色体末端丢失的问题。随着细胞的不断分裂，DNA丢失过多，将导致染色体断端彼此发生融合，形成双中心染色体、环状染色体或其他不稳定形式。端粒的存在可以起到缓冲保护的作用，从而防止染色体在复制过程中发生丢失或形成不稳定结构。

3、决定细胞的寿命：染色体复制的上述特点决定了细胞分裂的次数是有限的，端粒的长度决定了细胞的寿命，故而被称为“生命的时钟”。 4、固定染色体

摘要 端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构，对于维持染色体稳定性具有十分重要的意义． 端粒长度的维持则需要端粒酶催化完成， 端粒的长短和端粒酶的功能异常与细胞衰老和癌变有密切关联。

关键词 端粒 端粒酶 抗衰老

对于真核生物而言 ． 一个细胞核内往往存在多条染色体 ．而每条染色体末端都存在一个特殊结构——端粒 ( t e l o me r e s ) ．该结构对于防止不同染色体之间末端的融合和维持染色体 的完整性具有十分重要 的意义 ．一些研究还发现端粒 长度与衰老和癌症存在密切关系． 成为当前生命科学领域的研究热点之一 。 一、端粒与端粒酶的研究历史

早在 2 0世纪3 O年代， 缪勒( He r ma n n Mu l l e r1 9 4 6年的诺贝尔生理或 医学奖获得者) 发现被 x线打断的果蝇染色体末端极不稳定 ， 因而提 出染色体末端结构可能是 为了维持染 色体的稳定性和完整性， 并将希腊文末端 ( t e l o ) 和部分( me r o s ) 组成一词 将其命名为端粒 ( t e l o me r e ) （1）． Mu l l e r H J ．Th e r e ma k i n g o f c

在体周围神经记录复合神经动作电位的研究很少,尤其在体短距离细小神经记录复合神经动作电位尚未见有研究报道。中国复旦大学华山医院的劳杰教授与华山医院肌电图室合作多次探索进行预实验记录复合神经动作电位,不仅发现了记录的最佳方法,而且发现了小的不同电极之间的距离对复合神经动作电位参数有明显影响。

在体短距离细小神经记录复合神经动作电位的最佳方法

在体周围神经记录复合神经动作电位的研究很少，尤其在体短距离细小神经记录复合神经动作电位尚未见有研究报道。中国复旦大学华山医院的劳杰教授与华山医院肌电图室合作多次探索进行预实验记录复合神经动作电位，不仅发现了记录的最佳方法，而且发现了小的不同电极之间的距离对复合神经动作电位参数有明显影响。实验在完全游离大鼠正中神经后，难以记录到复合神经动作电位，但保留神经中部系膜，将地线置于系膜下，两端放置记录和刺激电极，即可恒定记录到复合神经动作电位。研究结果表明：在大鼠正中神经记录复合神经动作电位，记录电极间距离和刺激电极间距离均以5mm为最佳，刺激电极至记录电极间最佳距离为10mm，顺向记录优于逆向记录。该方法不仅可以为基础研究提供参考。也可为临床探索短的臂丛神经根部或干部记录复合神经动作电位提供新的研究思路。研究成果发表于

摘要 端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构，对于维持染色体稳定性具有十分重要的意义． 端粒长度的维持则需要端粒酶催化完成， 端粒的长短和端粒酶的功能异常与细胞衰老和癌变有密切关联。

关键词 端粒 端粒酶 抗衰老

对于真核生物而言 ． 一个细胞核内往往存在多条染色体 ．而每条染色体末端都存在一个特殊结构——端粒 ( t e l o me r e s ) ．该结构对于防止不同染色体之间末端的融合和维持染色体 的完整性具有十分重要 的意义 ．一些研究还发现端粒 长度与衰老和癌症存在密切关系． 成为当前生命科学领域的研究热点之一 。 一、端粒与端粒酶的研究历史

早在 2 0世纪3 O年代， 缪勒( He r ma n n Mu l l e r1 9 4 6年的诺贝尔生理或 医学奖获得者) 发现被 x线打断的果蝇染色体末端极不稳定 ， 因而提 出染色体末端结构可能是 为了维持染 色体的稳定性和完整性， 并将希腊文末端 ( t e l o ) 和部分( me r o s ) 组成一词 将其命名为端粒 ( t e l o me r e ) （1）． Mu l l e r H J ．Th e r e ma k i n g o f c

想知道如何丰胸吗？胸部保养对于丰胸很重要。运动丰胸和丰胸按摩都是很好的丰胸方法，能让预防胸部下垂。下面教你胸部保养的小动作，让你学会运动丰胸，同时洗澡后给胸部来个丰胸按摩也可给胸部保养，不怕胸部下垂，这样你就不必为如何丰胸而烦恼了。

丰胸是一个坚持的过程，在期间我用过很多东西，结果都不理想，在用了《667d。 c 0 m 》产品后才明白，按照上面介绍的方法我真的 升级到C罩杯

想知道如何丰胸吗?胸部保养对于丰胸很重要。运动丰胸和丰胸按摩都是很好的丰胸方法，能让预防胸部下垂。下面教你胸部保养的小动作，让你学会运动丰胸，同时洗澡后给胸部来个丰胸按摩也可给胸部保养，不怕胸部下垂，这样你就不必为如何丰胸而烦恼了。 你知道如何保养胸部吗?赶快来看看胸部保养小动作吧!

保养自己的胸部可採取扩充胸肌的健胸运动，其做法是：

伸开十指，两手反插，掌心向外，双腿分开，与肩同宽，踮起脚尖，收紧臀部。 高举双手，伸直身体，保持上身高举状态，身体下蹲，至脚跟踮起成欲跳跃姿势。起身站直，上身保持原状，然后再深蹲下去，直至臀部碰到脚后跟，如此上下反覆，组，放松30秒，继续重复，5组为一个训练过程。 5次1

返老还童--端粒和端粒酶

细胞里每个新部件的发现，都被有趣的故事所环绕，端粒和端粒酶也不例外。按照教科书的说法，端粒是染色体末端的一种特殊结构，是DNA与相关蛋白质的复合体。端粒主要有两大生理功能：维持染色体结构的完整性，防止染色体被核酸酶降解及染色体间相互融合；防止染色体结构基因在复制时丢失，解决了末端复制的难题。

早在1938年9月，著名遗传学家赫尔曼〃穆勒(Hermann Muller)，首次提出端粒这一概念，以英文telomere表示。它在题为《染色体改造》(The remaking of chromosomes)的文章中谈到，端粒一定具有某种特殊的功能，即可以对染色体的末端起到封闭的作用。从某种意义上讲，如果染色体不被这样封闭，染色体就不会持续存在。与此同时，另一位遗传学家芭芭拉〃麦克林托克(Barbara McClintock)也意识到这一问题。囿于实验条件和技术，他们未能继续深入研究端粒到底具有何种特殊功能？时间行驶至上世纪70年代。彼时刚兴起的基因重组技术，为科学家研究DNA打开一扇大门。随着人们对DNA聚合酶研究的深入，新的问题随之而来。DNA每复制一轮，末端都将损失一段DNA片段。如果没有补偿机制，DNA在经过万千代复制后