sgRNA设计原则种子序列

SgRNA设计方法

SgRNA（small guide RNA简称），是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分，早先发现的guide RNA，由两部分组成—tracRNA和crRNA, 两部分融合表达后，即sgRNA也能很好的行使guide的功能，与cas9蛋白结合，引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

SgRNA脱靶问题一直备受关注，如何设计特异性好的靶点成为大家关注的焦点，很多实验室开发了不同的设计软件，大体原则如下：

（1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右； （2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；

（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低 （4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率； （5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的ATG下游，最好位于第一或第二外显子；

（6）检查sgRNA靶向结合位点基因组序列是否存在SNPs； （7）如采用Cas9单切口酶，设计paired-gRNA需

10、种子发芽了 教学设计

教学目标：

1、了解种子的构造，开展种子发芽的对比实验并做记录，能设计简单的二维图表记录实验现象和结果，能对自己所观察到的现象做出合理解释。

2、能参与中长期的科学探究活动，在活动中愿意合作与交流；意识到人与自然要和谐相处。

3、知道种子萌发需要水、空气、营养等条件，了解影响种子萌发的主要因素，如水分、空气、温度等。 教学重难点：

开展种子发芽的对比实验并做记录，能参与中长期的科学探究活动。 教学准备：

教师材料：多媒体课件，一套解剖器。

学生分组材料：培养皿、放大镜、浸泡2天的芸豆种子。 教学过程：

课前活动：

课前检查仪器，认识培养皿、放大镜。 课中活动：

活动一 种子的构造 1、导入新课

用生活实例引出探究的主题，（课件二：）出示一盘热气腾腾的黄豆芽。 师：同学们，老师来做一个调查，喜欢吃黄豆芽的同学请举手？你知道黄豆芽是怎样生出来的吗？

（学生自由汇报）

师：是的，种子找到合适的环境它就会发芽生长。这节课我们就一起研究新的课题：种子发芽了（课件三）

（板书课题：10.种子发芽了） 2、自主观察

研究种子的内部构造。

师：一粒小小种子可以成长为一棵健康的植物，种子里面有什么？请同学们猜一猜。

（生猜测）

《应用时间序列分析》

课程设计指导书

一、课程设计的目的

熟练 Minitab等常用统计软件的应用，对软件处理后的数据和结论进行分析，加深理解本课程的研究方法，将书本知识应用于实践之中，培养自身解决实际问题的能力。

二、设计名称：

某城市过去63年终每年降雪量数据构成的时间序列进行平稳性检验、

模型拟合并预测五年内增长数据进行预测

三、设计要求：

1. 掌握用统计软件实现平稳时间序列平稳性检验、模型拟合并预测的方法和步骤

2.充分利用应用时间序列分析，决实际问题。 3. 数据来源必须真实，并独立完整

四、设计过程

1. 思考课程设计的目的，上网收集来源真实的数据； 2. 整理数据，简单分析数据间关系变化；

3. 利用Minitab数据进行详细分析，并得出相关数值； 4. 编辑实验报告，详细记录操作步骤和相关数据说明； 5. 结合相关的实验结论与知识背景，对于实验的出的结论提出自己的建议与意见。

五、设计细则：

1.对于网上搜集到的数据文件必须真是可靠，自己不得随意修改； 2.利用统计软件的数据分析功能充分处理数据，得出正确的结论； 3.认真编写实验报告，对于实验中的操作步骤应尽量详细； 4.实验分析结果要与实际问题背景相符合。

六、说明

Hereditas (Beijing) 2015年11月, 37(11): 1125―1136 www.chinagene.cn

综 述 CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估

谢胜松1，张懿2，张利生1，李广磊1，赵长志1，倪攀1，赵书红1

1. 华中农业大学，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 中国人民解放军第161医院妇产科，武汉 430010

摘要： 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术，已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种

的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点，而使用高效且特异的sgRNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前，已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sgRNA设计和/或脱靶效应评估软件，但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sgRNA 设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述，通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析，最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法，以及如何筛选高效且特异的sgRNA进行了归纳总结

敦小“121”学案设计

（

科）

第（）册 第（ ）单元

单元名称 课题名称 生物与环境 课时安排 共（ ）课时 第（ ）课时 种子发芽实验（二） 科学概念：绿豆种子发芽需要水和适宜的温度。 过程与方法：学习整理收集到的数据，依据数据得出科学的结论。 教学重点:通过实验知道绿豆种子发芽需要水和适宜的温度。 教学难点:学习整理收集到的数据，依据数据得出科学的结论。 交流实验中的发现： 整理分析实验信息： 1、我们种下的绿豆种子都发芽了吗？其他小组的绿豆种子呢？ 1、教师分发实验信息统计表，由组长负责收集相同实验小组的实验信息。 2、分析实验信息： （1）实验组和对照组的数据有什么不同？ （2）从实验数据中我们可以得出结论吗？ （3）实验结论和我们实验前的猜测一致吗？ 交流实验信息： 1、认真听取其他不同实验小组介绍他们的实验方法和获取的信息。 2、和其他的小组交流，了解他们在实验中有什么发现，听听他们怎样用数据来解释实验结果的。 3、汇集全班同学的实验，分析绿豆种子发芽需要的条件

扩频通信技术实现方法的研究和设计

——DS直接序列扩频

专业：通信工程

班级：2002级1班

姓名：佟 岩

引言

目 录

1扩频通信系统

3

6

6

1.2扩频通信的理论基础 6 1.3扩频通信的主要性能指标 8 1.4扩频通信的主要特点 10 1.5频谱扩展的实现和直接序列扩频 13 1.6扩频系统需要满足以下几个条件 17 1.7扩频通信特征 17

2直序扩频通信系统

18

2.1直序扩频通信系统框图 18 2.2直接序列扩频信号的产生原理 18 2.3直接序列扩频原理

设计模式

Design Pattern

面向对象研究的新领域

设计模式：起源起源

设计模式：起源

Gof (Gang Of Four ，“四人帮”

)

设计模式：起源

设计模式

什么叫模式

？

设计模式：研究现状设计模式的研究现

状

模式的分类(gof 提出的23个

)

Chain of Responsibility

Command

Iterator

Mediator Memento Observer State

Strategy

Visitor

Adapter (对象)Bridge Composite Decorator Facade Flyweight Proxy Abstract Factory Builder Prototype Singleton 对象Interpreter Template Method

Adapter (类)Factory Method 类

Bridge(桥梁)

模式案

例

Bridge(桥梁)模式 最初的设计
11

Bridge(桥梁)模式 需求变化：鸟类要会飞
12

Bridge(桥梁)模式 如果增加一种鸟类“企鹅”呢？
13

Bridge(桥梁)模式 改进方法：对“飞”使用多态
14

Bridge(桥梁)模式 改进方法：再次使用继承
15

Bridge(桥梁)模式 如果增加“游

一、选择题

1. 开放-关闭原则的含义是一个软件实体a。

（A）应当对扩展开放，对修改关闭（B）应当对修改开放，对扩展关闭 （C）应当对继承开放，对修改关闭（D）以上都不对 2. 下列属于面向对象设计基本原则的是( c) （A）继承（B）封装（C）里氏代换（D）都不是

3. 对于违反里式代换原则的两个类，可以采用的候选解决方案错误的是：（d）

A.创建一个新的抽象类C,作为两个具体类的超类，将A 和B 共同的行为移动到C 中，从而解决A和B 行为不完全一致的问题。 B.将B到A的继承关系改组成委派关系。

C.区分是“IS-a”还是”Has－a”。如果是“Is-a”，可以使用继承关系，如果是”Has－a”应该改成委派关系

D.以上方案都错误

4. 关于继承表述错误的是：（d）

A.继承是一种通过扩展一个已有对象的实现，从而获得新功能的复用方法。

B.泛化类（超类）可以显式地捕获那些公共的属性和方法。特殊类（子类）则通过附加属性和方法来进行实现的扩展。

C.破坏了封装性，因为这会将父类的实现细节暴露给子类。 D.继承本质上是“白盒复用”，对父类的修改，不会影响到子类。 5. 对于依赖倒转的表述错误的是（）

A.依赖于抽象而不依赖于具体，也就是针对

楼梯是楼层间的垂直交通枢纽 , 是楼房的重要构件。在高层建筑中虽然以电梯和自动扶梯作垂直交通的主要手段 , 但楼梯往往仍是必不可少的。楼梯在建筑中除具有重要的使用功能之外 , 还是一个引人注目的装饰景点。

楼梯设计应符合使用方便、安全疏散及富有装饰美的基本要求 , 同时应遵守《民用建筑设计通则》、《建筑设计防火规范》、《建筑楼梯模数协调标准》等规范的有关规定。

一、楼梯的构成

楼梯一般由梯段、平台、中间平台三大部分构成。其中, 中间平台也称休息平台(小型楼梯可不设此部分)。

楼梯的主体部分是梯段，它包括结构支承体、踏步、栏杆( 栏板)扶手等三部分。普通楼梯的装饰主要集中在踏步和栏杆扶手上。

二、楼梯的类型

楼梯有不同的分类方法:

(一) 、材料分:有木制楼梯、钢制楼梯、钢木楼梯和钢筋混凝土楼梯。

1.木制楼梯, 是全木制或主体结构为木制的楼梯。这种楼梯造型典雅、古朴,常用于住宅建筑的室内,但其防火性较差,施工中需作防火处理。此外,根据国家关于保护生态环境与森林资源的政策,这种楼梯应控制采用。

2.钢制楼梯, 是全钢制或主体结构为钢制的楼梯。它具有强度大、防火性好及轻便等特点,常见于工业建筑中。

3.钢木楼梯, 是主体结

楼梯是楼层间的垂直交通枢纽 , 是楼房的重要构件。在高层建筑中虽然以电梯和自动扶梯作垂直交通的主要手段 , 但楼梯往往仍是必不可少的。楼梯在建筑中除具有重要的使用功能之外 , 还是一个引人注目的装饰景点。

楼梯设计应符合使用方便、安全疏散及富有装饰美的基本要求 , 同时应遵守《民用建筑设计通则》、《建筑设计防火规范》、《建筑楼梯模数协调标准》等规范的有关规定。

一、楼梯的构成

楼梯一般由梯段、平台、中间平台三大部分构成。其中, 中间平台也称休息平台(小型楼梯可不设此部分)。

楼梯的主体部分是梯段，它包括结构支承体、踏步、栏杆( 栏板)扶手等三部分。普通楼梯的装饰主要集中在踏步和栏杆扶手上。

二、楼梯的类型

楼梯有不同的分类方法:

(一) 、材料分:有木制楼梯、钢制楼梯、钢木楼梯和钢筋混凝土楼梯。

1.木制楼梯, 是全木制或主体结构为木制的楼梯。这种楼梯造型典雅、古朴,常用于住宅建筑的室内,但其防火性较差,施工中需作防火处理。此外,根据国家关于保护生态环境与森林资源的政策,这种楼梯应控制采用。

2.钢制楼梯, 是全钢制或主体结构为钢制的楼梯。它具有强度大、防火性好及轻便等特点,常见于工业建筑中。

3.钢木楼梯, 是主体结