凝胶迁移实验

重庆大学研究生专业实验教学

实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

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实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

重庆大学研究生专业实验教学

实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

重庆大学研究生专业实验教学

实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

迁移实验（cell migration assay）

实验介绍

细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备：

可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1基质胶铺板：

用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使

从server2003直接迁移AD至server2016 AD

目的：因公司AD服务器软件为server2003。硬件为赛扬+512M的物理机古迹配置。硬件升级势在必行。

一、环境介绍：

首先说明环境，实验环境比较简单。环境中已经有Windows server 2003 的域控。 新Server 2016 X64

试验用客户 XP win7 win10各一台 域名为test.org 系统 Server 2003 R2 服务 主机名称 IP地址 192.168.0.1 192.168.0.188

主AD，FSMO五角色主机及GC Win2003 Win2016 Server 2016 X64 升级目标服务器 二、实验步骤

1、 win2016加域test.org

2、 win2016加域重启，使用server2003域用户登录server2016

3在server2003的将自己的域用户添加至Domian Admins和Enterprise Admins组中。

3、 在server2016上安装AD角色管理工具

安装用时的几分钟完成。

4、在server2003上提升将林架构（域和信任）和域架构（用户和计算机）的提升至windows s

迁移实验（cell migration assay）

实验介绍

细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备：

可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1基质胶铺板：

用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使

实验一：琼脂糖凝胶电泳对DNA提取

实验目的：学习使用水平式琼脂糖凝胶电泳进行DNA的提取。

实验原理：琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用生物染料嵌入DNA分子后在紫外下显色。

1）在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。由于糖——磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。

2）在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。

3）生物染料在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，生物染料从正极向负极移动，就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在生物染料足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。

实验材料：微量移液器(2μl和4μl)，高压灭菌锅，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置，微波炉等。TAE电泳缓冲液，琼脂糖凝胶，PCR 扩增样品

实验报告

课程名称：生化实验B 实验日期： 班级： 姓名学号：

血红蛋白凝胶过滤

一、 背景及目的

血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质。存在于脊椎动物、某些无脊椎动物血液和豆科植物根瘤中。人体内的血红蛋白由两个α亚基和两个β亚基组成。每个亚基均成球状，内部有一个血红素。血红素上的亚铁离子可以可逆的与氧分子结合，起到运输氧气的作用。当携带氧气时，血红蛋白呈鲜红色，无氧时为暗红色。

凝胶过滤法又称凝胶排阻层析或分子筛层析，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。一般是大分子先流出来，小分子后流出来。

凝胶过滤的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。

影响分离效果的因素主要有以下几点：1.基质的颗粒大小、均匀度

2.筛孔直径和床体积的大小3.洗脱液的流速4.样品的种类等，5.缓冲液的pH

6.

第一章 项目合理化建议

1.1 项目数据迁移

1.1.1 数据迁移内容

根据现有业务系统基本情况，在进行数据迁移时根据各数据类型进行分类移植。

药品注册审评数据

该类信息包含现有的业务系统主要为《药品注册省局受理系统》，《药品注册审批系统》等系统。

该类数据迁移主要内容包括药品及药包材的注册、再注册、补充注册的申请、审评过程、审评结果果等数据。迁移的过程中依据新建的管理信息系统中的数据标准与规范进行迁移。

临床研究数据

该类信息包含现有的业务系统主要为临床申报数据。

该类数据迁移主要内容包括药品临床研究管理中的申请、审评过程、审评结果、研究过程等数据。迁移的过程中依据新建的管理信息系统中的数据标准与规范进行迁移。

药品生产企业认证检查数据

该类信息包含现有的业务系统主要为《安监司生产许可证管理系统》。 该类数据迁移主要内容包括药品生产企业开办、变更、换证的申请信息、审批过程信息、审批结果信息等数据。迁移的过程中依据新建的管理信息系统中的数据标准与规范进行迁移。

药品经营企业认证检查数据

该类信息包含现有的业务系统主要为《药品经营企业管理系统》。 该类数据迁移主要内容包括药品经营企业开办、变更、换证的申请信息、审批过程信息、审批结果信息数据。