微生物实验中一些受污染或盛过有害细菌

测定细菌生长曲线

一、 实验目的

1． 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2． 学习液体培养基的配制以及接种方法； 3． 反复练习无菌操作技术；

4． 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5． 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；

二、 实验原理

将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。

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霍乱弧菌（肠道菌疾病检验—肠道属）

1．概述 ：（1） 霍乱是急性肠道传染病，剧烈的无痛性水样腹泻 （2）霍乱主要由01群的古典型和El Tor型以及()139群菌株引起。

（3）()1群称凝集弧菌，非()1群为不凝集弧菌。()1群依菌体中主要抗原成分A、B、C组分分为不同亚群。各称为小川型(含A、B抗原)、稻叶型（含A、C抗原）和彦岛型(含A、B、C抗原)。

（4）()139群最早出现于1992年东南亚。①0139群和()1群El To()抗原不同；②有相同的霍乱毒素基因，对()抗原的免疫血清两者无交叉凝集，o139独特特点是：有荚膜多糖，国际标准株为M045。

霍乱弧菌不侵入上皮细胞，在人的小肠内定居、增殖，释放霍乱毒素。霍乱毒素为A、B两种亚基组成，每个毒素分子A：B数量比为1：5，A又分为A1和A2，毒素酶活性部分在A1亚单位。霍乱毒素通过其B亚单位与人小肠上皮细胞上的GMl受体结合，用GMl—ELISA（酶联免疫吸附实验）可检测霍乱

毒素存在。

兔小肠段结扎试验也可用来检测霍乱弧菌是否产生霍乱毒素。霍乱弧菌引起的肠道局部黏膜免疫是霍乱保护性免疫的基础。针对菌体产生的抗菌免疫以及针对霍乱毒素的抗毒免疫是对霍乱免疫的因素

细菌和微生物的区别：微生物是包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物等在内的一大类生物群体。

原核：细菌、放线菌、螺旋体、支原体、立克次氏体、衣原体。

真核：真菌、藻类、原生动物。

微生物的定义

一切肉眼看不见的或看不清的微小生物的总称。

1特点:个体微小，一般<0.1mm。

构造简单，有单细胞的，简单多细胞的，非细胞的。

进化地位低。

2分类

原核类:三菌，三体。

真核类:真菌，原生动物，显微藻类。

非细胞类:病毒，亚病毒(类病毒，拟病毒，朊病毒)

3五大共性

体积小；面积大、吸收多；转化快，生长旺，繁殖快；适应强，易变异；分布广，种类多。

二、微生物的类群

1细菌:

(1)定义:一类细胞细短,结构简单,胞壁坚韧,多以二分裂方式繁殖和水生性强的原核生物

(2)分布:温暖,潮湿和富含有机质的地方

(3)结构:主要是单细胞的原核生物,有球形,杆形,螺旋形

细胞壁

基本结构细胞膜细胞质

结构拟核鞭毛

特殊结构荚膜芽孢

(4)繁殖:主要以二分裂方式进行繁殖的

(5)菌落:单个细菌用肉眼是看不见的,当单个或少数细菌在固体培养基啊行大量繁殖时,便会形成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群落。

菌落是菌种鉴定的重要依据.不同种类的细菌菌落的大小，形状光泽度颜色硬度透明毒都不同。

细菌（英文：germs；学名：b

临床微生物实验室细菌鉴定指南（上）

录入时间:2010-11-22 10:40:51 来源：温州医学院附属医院

一．细菌的鉴定步骤

1． 鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。

2． 对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。（我们这里一般都是预先纯化培养）

3． 对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。

4． 按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。 5． 复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。

⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。

首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。 第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ） 第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ） 第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）

第四步：最后用稀

临床微生物实验室细菌鉴定指南（上）

录入时间:2010-11-22 10:40:51 来源：温州医学院附属医院

一．细菌的鉴定步骤

1． 鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。

2． 对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。（我们这里一般都是预先纯化培养）

3． 对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。

4． 按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。 5． 复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。

⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。

首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。 第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ） 第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ） 第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）

第四步：最后用稀

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品

情境一：分离纯化和选育生产菌种 发酵工艺技术教材

项目2 保藏微生物菌种操作

◆ 学习目标 1.了解各种菌种保藏的基本原理和优缺点； 2.学会根据菌种的特点选择相应的保藏方法；学会采用不同方法进行保藏菌种操作。 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 当然保藏菌种使其不变异亦是相对而言的。实际上没有一种方法可使菌种绝对不变化，所以研究菌种保藏就是要采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。

菌种是国家的重要资源，世界各国对这项资源都给予极大重视，很早就设臵了各种专业性的保存机构，如ATCC、NRRL等。1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。 1 基础知识

菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通

SFL

Sequenced flashing lights 顺序闪光灯

PALS

Precision approach lighting system 精密进近灯光系统

VASIS

Visual Approach Slope indicator systems 目视进近坡度指示器(系统)

PAPI

Precision Approach Path Indicator 精密进近航道指示器

HIRL

High Intensity Runway Edge Lights 高强度跑道边线灯

RCLL

Runway Centerline Lighting跑道中线灯

REDL

Runway Edge Lights

跑道边线灯（跑道边灯）

机场图常用的简字简语 ALSF

Approach Light System with Flashing Lights

带有顺序闪光灯的进近灯光系统 ARP

Airport Reference Point 机场基准点

ASPH 沥青

Asphalt Runway

CONC 水泥

Concrete Surfaced Runway 水泥面跑道

Sequenced ATIS

实验二 理化因子对微生物的影响

实验目的：

1 了解紫外线对微生物生长的影响。 2 了解不同化学物质对微生物生长的影响。 3 了解理化因素抑制或杀死微生物的试验方法。 实验原理：

1 紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线波长是200-310nm，而以260nm左右的紫外线具有最高杀菌效应。作用机理是诱导胸腺嘧啶二聚体的生成，从而抑制DNA的复制。经紫外线照射受损伤的细菌细胞，如立即暴露于可见光下，则有一部分可恢复正常活力，称为光复活现象。

2 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用，因此，在实验室内及生产上常利用某些有效的化学药剂进行杀菌或消毒。不同的化学药剂对不同的细菌，杀菌能力并不相同，而一种化学药剂对不同细菌的杀菌效果也不一致。 实验材料：

1 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。 2 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3 器材与试剂：滤纸、镊子、培养皿、涂棒、试管支。 75%乙醇、 1%结晶紫、 0.2mg/L青霉素、 0.1%KMnO4、 实验方法： 一 紫外线杀菌实验

1 将已灭菌冷却到50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿中，水平放置待凝固。

2 用无菌吸管吸取0.1ml培养24h的枯草芽孢杆菌菌液加入上述平板

利用微生物治理镉污染

一、传统治理镉污染有一下主要几条途径：

（1）物理治理方法:包括膜分离法,物理吸附法,换土法,客土法,翻土法,电动力修复法,固化、稳定化方法等。这些物理措施的方法具有稳定、见效快的优点,但是存在工程量大、投资费用高、有二次污染隐患等缺点,不适宜大面积污染的治理,因此不是一种理想修复镉污染的方法。

（2）化学治理方法:包括化学沉淀法,离子交换法,淋溶法,施用化学改良剂,增加土壤有机质等,这些方法虽然能够在短期内降低环境中重金属的毒性和生物有效性,但此方法因人为向环境中施加化学药剂,易造成二次污染,且该方法是一种原位修复方法,重金属仍存留在环境中,容易再度活化,其潜在威胁并未消除。此外,就修复效果的长期有效性和生态系统的长期稳定性来说,还缺乏深入细致的研究。

（3）农业治理方法:因地制宜地改变一些耕作管理制度来减轻重金属的危害,在污染环境中种植不进入食物链的植物,利用植物对重金属的吸收富集作用,来净化污染环境。植物修复的效益主要取决于植物的生长速率,但通常用于治理重金属污染的超积累植物都比较矮小,生物量低,生长周期长,所以其修复效率很低。

总之利用单一传统的修复方法成本高昂,设备条件复杂以及需要改变土层结构，或者是周期长效率低

二、微生