痰液微生物检查

关于痰液细菌学检验的标准化操作程序

1前言

众所周知，传统习惯程序的痰标本细菌学检验其临床符合率并不高,其原因是多方面的。除了痰标本采集不规范导致的不合格标本带来的培养结果与病人感染不相符外，还因为微生物和人体的相关性本身就具有复杂性：源自细菌的致病与条件致病的辨证性，如致病菌可能为正常携带，而细菌在肺通气功能异常病人的下呼吸道的可以发生单纯定植或感染，要证明培养结果与感染的相关性是医学微生物学所面临的难题，这也使得一直以来在对于痰培养的标准化进展十分缓慢，以至在各版《全国临床检验操作规程》上也未提出相应详细可行的令全国同行公认的统一规范的标准化操作程序（SOP）和完整的痰液培养的质量控制办法。习惯程序的痰标本细菌学检验的缓慢也很不适应临床诊断治疗的迫切性[1]。故而，建立规范而快速的痰液细菌学检验的SOP对于提高呼吸系统感染病的诊治水平和控制抗生素的滥用等问题均有重要的作用

痰培养阳性率普遍教低，临床符合率差的关键因素是痰标本采集不规范，不合格痰标本将直接导致病原菌被分离的机会降低，大量正常菌群也会抑制病原菌的生长或干扰病原菌的检出，降低了临床符合率；再有就是操作程序的不规范，不重视直接涂片，检验过程控制的

微生物学假期综合教学实习

实习时间： 2013年 6 月 25 日 开始

实习班级： 应技1101-1102 人

生命科学技术学院微生物教研室

微生物教学实习基本实验流程

第 配制牛肉膏固体培养基、3倍和单倍乳糖发酵液， 一准备无菌水及各种器皿、器材 天

）

灭菌

采集样品

（

第按要求做10倍梯度稀释

二

天

）配制伊红美测样品的细菌总数： 乳糖培养基初发酵试验：

样品的稀释液涂布按实验要求将稀释液接入兰固体和E.C液 牛肉膏平板 3倍、单倍乳糖发酵培养液 体培养基

37OC培养 37OC培养 灭菌

数平板上菌落看乳酸发酵 倒伊红美兰平板 （数，计算样品的细结果，查MPN表 第菌总数 三 检验乳酸发酵管中产酸产气的样品天 ）

伊红美兰平板划线 接E.C管

37OC培养 44.5OC培养

（挑有金属光泽、看结果，鉴定是 第

无光泽的菌落 否有粪大肠杆菌 四

天接单倍乳糖发酵管 革兰氏染色 ）

37OC培养

看复发酵结果 （ 第 综合本实验的六项结果（细菌总数、乳糖管初发酵（MPN）、伊红美兰平板鉴定、 五E.C平板鉴定、革兰氏染色、乳糖复发酵），写出实验报告 天清洗器材，并做好室内清洁。 ） （

微生物学综合教学实习

学习目

第四章 病毒

1 病毒具有哪些特点？病毒壳体有哪几种对称类型？

答：①体积微小 ②无完整的细胞结构，主要成分是核酸跟蛋白质 ③严格活细胞内寄生 ④对干扰素敏感，对抗生素不敏感 ⑤繁殖方式是复制，且具有感染性；有螺旋对称型、二十面体对称型、复合对称型。

2 什么是病毒的一步生长曲线？包括几个期？各有何特点？

答：主要以烈性噬菌体为例，一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线，反映了每种噬菌体的三个重要的特征参数：潜伏期、裂解期的长短及裂解量。包括潜伏期、裂解期和平稳期，潜伏期细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段，裂解期宿主菌迅速裂解、溶液中噬菌体颗粒急速增加的阶段，平稳期宿主细胞已经全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高峰的时期。

3 以噬菌体为例，说明病毒的增殖过程。

答：①吸附和侵入：噬菌体感染细菌时，其尾部为吸附器官，能识别宿主菌表面的特殊受体，然后分泌酶类溶解细胞壁，使细胞壁出现小孔，讲头部的核酸注入宿主菌内，蛋白质外壳留在宿主菌细胞外；②生物合成：进入宿主菌内的噬菌体核酸，首先转录翻译产生早期蛋白，进行晚期转录并复制子代核酸，再转录产生噬菌体的结构蛋白，子代核酸和蛋白质按一定程序装配成完整的子代噬菌体颗粒；③当宿主菌细胞

第四章 病毒

1 病毒具有哪些特点？病毒壳体有哪几种对称类型？

答：①体积微小 ②无完整的细胞结构，主要成分是核酸跟蛋白质 ③严格活细胞内寄生 ④对干扰素敏感，对抗生素不敏感 ⑤繁殖方式是复制，且具有感染性；有螺旋对称型、二十面体对称型、复合对称型。

2 什么是病毒的一步生长曲线？包括几个期？各有何特点？

答：主要以烈性噬菌体为例，一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线，反映了每种噬菌体的三个重要的特征参数：潜伏期、裂解期的长短及裂解量。包括潜伏期、裂解期和平稳期，潜伏期细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段，裂解期宿主菌迅速裂解、溶液中噬菌体颗粒急速增加的阶段，平稳期宿主细胞已经全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高峰的时期。

3 以噬菌体为例，说明病毒的增殖过程。

答：①吸附和侵入：噬菌体感染细菌时，其尾部为吸附器官，能识别宿主菌表面的特殊受体，然后分泌酶类溶解细胞壁，使细胞壁出现小孔，讲头部的核酸注入宿主菌内，蛋白质外壳留在宿主菌细胞外；②生物合成：进入宿主菌内的噬菌体核酸，首先转录翻译产生早期蛋白，进行晚期转录并复制子代核酸，再转录产生噬菌体的结构蛋白，子代核酸和蛋白质按一定程序装配成完整的子代噬菌体颗粒；③当宿主菌细胞

文件编号 文件名称 制 定 人 审 核 人 批 准 人 生效日期 管理部门 质量部 序号 01

分发部门 微生物限度检查操作规程 版本号 制定日期 审核日期 批准日期 00 QB-WI/10-005-00 页码 2017.03.08 修订原因及目的 文件新建 总经理□ 技术部□ 质量部□ 生产部□ 管理者代表□ 商务部□ 销售部□ 行政部□ 仓库□ 修订内容 /

文件编号 文件名称 1. 目的

规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限 检查符合ChP2015规定。 2. 适用范围

适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。 3. 引用/参考文件 ChP2015

实用药品微生物检验检测技术指南 《取样及留样管理规程》 4. 职责

质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS调查。 5. 程序 5.1 仪器用具

高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、

硬脂酸镁的微生物限度检查

一、 概述

本报告按USP31中“〈61-62〉非灭菌产品的微生物学检查”的规定，对硬脂酸美的微生物学检查方法学考察。参照企业提供标准，通过测试实验制定适合于本品的微生物学检查的方法。 企业提供标准：

总需气菌数（TAMC）不得过1000 cfu/g；霉菌及酵母菌总数（TYMC）不得过500 cfu/g；每1g样品不得检出大肠埃希菌；每10g样品不得检出沙门氏菌。

二、 方法学 1、 培养基及试剂

实验用培养基及缓冲液均符合USP规定。 BP：pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 CA：溴化十六烷基三甲铵 MCA：麦康凯琼脂 MCB：麦康凯肉汤 MSA：甘露醇盐琼脂 RVS：RV沙门菌增菌肉汤 SDA：沙氏葡萄糖琼脂 SDB：沙氏葡萄糖肉汤 TSA：大豆胰酪胨琼脂 TSB：大豆胰酪胨肉汤 XLD：赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 2、 实验菌株

黑曲霉 ATCC16404

枯草芽孢杆菌 ATCC6633，CMCC(B)63501 白色念珠菌 ATCC10231，CMCC(F)98001 大肠埃希菌 ATCC8739 铜绿假单胞菌 ATCC9027

霍乱沙门氏菌 ATCC14028

金黄色葡萄

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品

一，芽孢具有强抵抗性的原因：

某些细菌在它的生活史中的某个阶段或某些细菌在它遇到不良环境时，在其细胞内形成一个内生苞子叫芽孢。 1， 含水量下降，蛋白质凝固点提高，受热不易变形。 2， 形成了厚而致密的芽孢壁，渗透性降低，代谢活力随之降低。使其进入休眠状态。 3， 芽孢含有耐热性较强的酶。 4， 合成了一种特有的耐热芽孢成分—2.6吡啶二羧酸（DPA）。 性质：不是一种繁殖方式，而是一种休眠体。

二，原核微生物和真核微生物各自特点及代表生物： 1， 原核微生物的核很原始，发育不全，只是DNA链高度折叠形成的一个核区，没有核膜，核质裸露，与细胞质没有明显界线，叫拟核或似核。原核微生物没有细胞器，只有由细胞质膜内陷形成的不规则泡沫结构体系，如间体和光合作用片层及其他内折，也不进行有丝分裂。原核微生物包括古菌，细菌，蓝细菌，放线菌，立克次氏体，支原体，衣原体和螺旋体。 2， 真核微生物有发育完好的细胞核，核内有核仁和染色质。其有核膜将细胞核和细胞质分开，使两者有明显的界线，其有高度分化的细胞器。如线粒体，中心体，高尔基体，内质网，溶酶体，和叶绿体等。其进行有丝分裂，真核微生物包括除蓝细菌以外的藻类，酵母菌，霉菌，伞菌，原生动物，微型后生动物等。

《微生物学》练习题库

一．选择题

0001 微生物是一些个体微小，构造简单的低等生物的总称，它们的大小一般小于（ ）

A、 1cm B、 1mm C、 0.1mm D、1um

0002 在微生物学发展史上曾出现过寻找重要病原菌的“黄金时期“其主要原因是（ ）

A、显微镜的应用 B、消毒灭菌技术的建立 C、微生物纯种分离技术的成功 D、纯种微生物培养技术的创立 0003 世界上第一个发现青霉素的学者是（ ）

A、 列文.虎克 B、弗莱明 C、秦纳 D、欧之希 0004 微生物五大共性的基础是（ ）

A、体积小，面积大 B、吸收多，转化快 C、生长性，繁殖快 D、适应性，易变异

0005 巴斯德为了否定“后生说”，他在前人工作的基础上，进行了许多实验，其中著名的（ ）无可辩驳地证实了空气中确实含有微生物，它们引起有机质的腐败。

A、巴斯德原则 B、柯赫原则 C、首种原则 D、免疫原则 0006 微生物学发展史的奠基期的开创者为（

第一章

1、什么是微生物简述微生物的生物学特征。 2、什么是食品微生物学它的地位与作用？ 3、阐明微生物奠基人之一巴斯德的王要贡献。 4、阐明微生物奠基人之一柯赫的主要贡献。

5、为什么微生物对微生物学家作为实验模型非常重要？

第二章

1、什么是革兰氏染色？其原理和关键是什么？。

2、比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁的成分和构造

3、细菌的细胞结构包括一般结构和特殊结构，试说明这些结构及其生理功能。

4、芽孢有何特殊生理功能？其抗性机理是什么？芽孢的这些特点对实践有何指导意义。 5、什么叫菌落？怎样识别细菌和放线菌的菌落？ 6、比较原生质体、枝原体和L-型细菌的异同。

第三章

1、以啤酒酵母为例，说明酵母菌的形态和繁殖方式。 2、描述青霉和曲霉的分生孢子结构？

3、比较细菌、放线菌、霉菌和酵母菌菌落的特征。

第四章

1、 病毒粒子的结构与形状如何？ 2、 什么是一步生长曲线。 3、 烈性噬菌体的生长周期。

4、 什么是温和噬菌体？什么是溶源菌？

第五章

1、常用测定微生物生长的方法有几种？试比较较其优缺点。

2、单细胞微生物的典型生长曲线可分几期？其划分的依据是什么。 3、试比较营养物质进入微生物细胞的几种方式的特点。

4、什么是