pcr的原理及应用

PCR仪的原理及其操作应用 §1. PCR仪的技术原理 §2. PCR仪的分类与应用 §3. PCR仪的操作步骤轻纺与食品学院 报告人：裴乐乐 指导老师：林教授

§1.PCR原理简介PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚 合酶链式反应，主要用于DNA片段的体外 扩增，基本原理类似于DNA的天然复制过 程 ，其特异性依赖于与靶序列两端互补的 寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三 个基本反应步骤构成。

PCR原理示意图

PCR Cycle - Step 1 - Denaturation Template DNA by Heat (94oC)Target Sequence

Target Sequence

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解 离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准 备；

PCR Cycle - Step 2 – Temperature is lowered (Tm ) and primers anneal to target sequences

②模板DNA与引物的退火(复性):模

PCR仪的原理及其操作应用 §1. PCR仪的技术原理 §2. PCR仪的分类与应用 §3. PCR仪的操作步骤轻纺与食品学院 报告人：裴乐乐 指导老师：林教授

§1.PCR原理简介PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚 合酶链式反应，主要用于DNA片段的体外 扩增，基本原理类似于DNA的天然复制过 程 ，其特异性依赖于与靶序列两端互补的 寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三 个基本反应步骤构成。

PCR原理示意图

PCR Cycle - Step 1 - Denaturation Template DNA by Heat (94oC)Target Sequence

Target Sequence

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解 离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准 备；

PCR Cycle - Step 2 – Temperature is lowered (Tm ) and primers anneal to target sequences

②模板DNA与引物的退火(复性):模

第八章 PCR技术及其应用

PCR技术的建立① Khorana(1971)等提出在体外经 DNA变性,与适当引物杂交,再用 DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设 想—―修复复制”但由于测序和引物合成的困难，以 及70年代基因工程技术的发明使克 隆基因成为可能，所以，Khorana的 设想被人们遗忘了……

②

1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现

Mullis的构思引物

DNA聚合酶

DNA聚合酶

引物

特定DNA片段

94℃变性

50-65℃退火

XX℃延伸

94℃

55℃

37℃

③

1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq)引入了PCR技术

Taq DNA聚合酶(thermus aquaticus)100

酶 80 活 性 6040

(%)

20 40 50 60 70 80 90 100

温度(℃)

94℃

55℃

72℃

PCR循环

Kary B. Mullis <>1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科 学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年 Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。“我不大喜欢动手,我宁肯不动手,

点阵汉字原理与应用

一．汉字的编码

由于在电脑中，所有的数据都是以0和1保存的。因此，想要用计算机来显示汉字前提就是要将汉字以二进制，即0和1形式进行编码。

GBK内码

在英文的显示操作中，一个字母、数字及字符均由1个ASCII码表示，并且由于英文字符种类相对较少，故其ASCII码是小于等于127的。而汉字由于种类繁多，每个汉字有2个ASCII码构成，这两个ASCII码称为汉字的GBK内码，通常用十六进制表示。例如，“啊”的GBK内码=B0 A1。汉字的GBK内码一定大于A0H，即160，目的是为了防止与英文的ASCII码产生冲突。

区位码

为了使每一个汉字有一个全国统一的代码，1980年，我国颁布了第一个汉字编码的国家标准： GB2312-80《信息交换用汉字编码字符集》基本集，这个字符集是我国中文信息处理技术的发展基础，也是目前国内所有汉字系统的统一标准。由于国标码是四位十六进制，如汉字的GBK内码，为了便于交流，大家常用的是四位十进制的区位码。所有的国标汉字与符号组成一个94×94的矩阵（见图1所示）。在此方阵中,每一行称为一个\区\每一列称为一个\位\因此,这个方阵实际上组成了一个有94个区(区号分别为0 1到94)、

本文详细介绍了无线电射频识别(RFID)技术及电子标签的基本工作原理及其分类,叙述了RFID技术的应用和前景,以RFID技术为主流的自动识别产业将得到更迅速更广泛的发展。

维普资讯

R I技术原理及应用 F D的Th prn i e e i c pl an app iat O FI t hnol gy d l c i on f R D ec o何方摘 (州移动公司网维中心，广州市广 51 ) 00 01要：文详细介绍了无线电射频识别 ( FI本 R D)技术及电子标签的基本工作原理及

其分类，叙述了 RFI技术的应用和前景，以 RFI技术为主流的自动识别产业将得 D D到更迅速更广泛的发展。

关键词： FI电子标签 R D;

1 R 0、“ F”简介 1“ ”技术就是所谓无线射频识别，是近年来迅 R F ID

卡通”等方面；

2 )电磁反向散射耦合则是通过阅读器发射电磁波， 遇到电子标签后反射同时携带相关目标信息回到阅读器，能量交换符合电磁波的空间传播规律，也称“达雷原理模型”这种模式一般适合超高频、微波等远距离。系统，典型工作频率为 4 3 H 3 M z,9 M 1 H 5 z,2. 5 H 4 G z和 5. 8 等，识

RT-PCR原理与实验技术

一、知识背景：

1、基因表达：DNA RNA Protein

单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA（每个mRNA存活4d，可以合成105个丝心蛋白） 共合成109个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2、PCR技术(Polymerase chain reaction)：即聚合酶链式反应。

在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促反应，其特异性由两个人工合成的引物序列决定。反应分三步：

A、变性：通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA； B、退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。

C、延伸：在DNA聚合酶和dNTPs及Mg2存在下，退火引物沿5‘ 3’方向延伸。 以上三步为一个循环，如此反复。

＋

3、逆转录酶和RT-PCR

逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶，至少具有以下三种活性：

1、依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链

实时荧光定量PCR原理和实验 所属分类: 基因检测 更多见 www.infobio.org 无论是对遗传病(如地中海贫血和血友病)、传染病(如肝炎和艾滋病)或肿瘤进行基因诊断，还是研究药物对基因表达水平的影响，或者监控药物和疗法的治疗效果，定量PCR技术都可以发挥很大作用。定量PCR技术的最新进展是实时荧光定量。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物，一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA拷贝数，做到了真正意义上的DNA定量。这是DNA定量技术的一次飞跃。 根据最终得到的数据不同，定量PCR可以分为相对定量和绝对定量两种。典型的相对定量如比较经过不同方式处理的两个样本中基因表达水平的高低变化，得到的结果是百分比；绝对定量则需要使用标准曲线确定样本中基因的拷贝数或浓度。根据所使用的技术不同，荧光定量PCR又可以分为TaqMan探针和SYBR Green I荧光染料两种方法。比较而言，探针杂交技术在原理上更为严格，所得数据更为精确；荧光染料技术则成本更为低廉，实验设计更为简便。在选择实验方案时要根据实验目的和对数据精度的要求来决定。

微滴式数字PCR技术及市场应用

培训试题

一、填空题（2′×15）

1、Sanger法测序、ARMS-PCR和微滴式数字PCR（ddPCR）的检测灵敏度分别为： % 、 %、 %。 2、QX100微滴发生器能将每份反应液形成约 个均一的微滴，最多能同时处理 个样品。

3、QX100微滴式数字PCR检测所需样本量不能少于： ul血浆 或 ml全血， 片切片和 块绿豆大小活检组织。 4、目前QX100微滴式数字PCR技术在市场上主要应用于 拷贝数变异分析 、 稀有突变检测 、 基因表达分析 三个方面的研究。

5、在针对健康人所开展的肿瘤早期筛查项目中，ddPCR现在已经可以检测 14 种常见肿瘤中的 11 个癌基因约 60 余个突变位点。

二、选择题（3′×5）

1、微滴式数字PCR（ddPCR）的检测灵敏度为（ ）

A. 1% B. 0.1% C. 0.01% D.0.001% 2、以下哪一项不是微滴式数字PCR的技术优势（ ） A、高灵敏度、高特异性

关于酶学

第27卷第6期

Vol127　No16长春师范学院学报(自然科学版)JournalofChangchunNormalUniversity(NaturalScience)2008年12月Dec.2008

应用于PCR技术的DNA聚合酶

盛艳敏,杨燕平,吴英杰,王倩倩

(长春师范学院生命科学学院,吉林长春　130032)

[摘　要]DNA聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的

作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善

其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研

究历史及现状进行简要综述。

[关键词]PCR;DNA聚合酶;酶学特性

[中图分类号]Q94615　　　[文献标识码]A　　　[文章编号]1008-178X(2008)06-0067-04

　　聚合酶链式反应(PCR)是一种体外快速扩增特定DNA片段的技术,是在由DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液等组成的反应混合物中,由DNA聚合酶催化,对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片断进行扩增的反应。在此过程中,DNA聚合酶起着关键性作用,所以自PCR技术产生至今,人们一直在通

编号 0710118

毕 业 论 文

（ 2011届本科 ）

题 目： 陀螺仪的原理及其应用 系（部）院： 物理与机电工程学院 专 业： 物理学 作者姓名： 李淑娟 指导教师： 李守义 职称： 副教授 完成日期： 2011 年 5 月 20 日

二○一 一年五月

目 录

河西学院本科生毕业论文（设计）诚信声明 ............................................................................... 2 河西学院本科生毕业论文（设计）任务书 ................................................................................... 3 河西学院本科生毕业论文（设计）开题报告 ..........................................................