拟南芥内参基因

何为内参基因

1、我记得常用的就是[color=magenta]GAPDH[/color]（3-磷酸甘油醛脱氢酶）和actin，至于什么是内参，可以打个比方，比如我们要比较两个不一样大的西瓜的含糖量，不好直接比较，那就找他们都有的东西来比较，就拿西瓜子嘛，假设西瓜子是均匀分布的，而且随着西瓜的变大，糖分的增多，西瓜子也变多，那么这个西瓜子就可以作为内参了！ 不知比方准确否，请高手指教，共同进步！

2、内参基因一般会选管家基因，是维持细胞基本代谢活动所必须的基因，在各组织和细胞中的表达相对恒定，如：GAPDH、Actin、18S rRNA等

3、内参基因,表达稳定，通常用的有GAPDH,beta-actin，18s rRNA等 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。

借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。 一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。

4、半定量RT-PCR和qPCR都需要内参，简单的说内参就是在你的那个培养条件下恒定表达的某个基因。做内参就是

拟南芥基因的图位克隆技术

拟南芥基因的图位克隆技术

浙江大学生命科学学院 徐冰

浙江杭州 310029

1 国内外研究现状

拟南芥（Arabidopsis thaliana）是一种模式植物，具有基因组小（125 Mbp）、生长周期短等特点，而且基因组测序已经完成（The Arabidopsis Genomic Initiative, 2000）。同时，拟南芥属十字花科（Cruciferae），具有高等植物的一般特点，拟南芥研究中所取得成果很容易用于其它高等植物包括农作物的研究，产生重大的经济效益，特别是十字花科中还有许多重要的经济作物，与人类的生产生活密切相关，因此目前拟南芥的研究越来越多地受到国际植物学及各国政府的重视。

从遗传学的观点来看，基因克隆的途径可概括为正向遗传学和反向遗传学两种。正向遗传学途径指的是通过被克隆基因的产物或表现型突变去进行；反向遗传学途径则指的是依据被克隆基因在染色体上的位置来实现。虽然一些模式生物（如拟南芥）的基因组测序已经完成，但还有40%的基因（在拟南芥中）的功能还是未知的。

图1 图位克隆所需努力的比较（1995年和2002年）（Jander等， 2002）

图位克隆（map-based cloning）又称定位克隆（po

基因克隆

中国病原生物学杂志

454

JournalofPathogenBiology

December2007,　Vol.2,　No.6

2007年12月　　第2卷第6期

论著

白纹伊蚊β2肌动蛋白基因片段的克隆及其3

作为基因表达内参照的应用

焦健华1,2,马磊2,张东辉233

(1.南京医科大学第一附属医院消化科,江苏南京210029;2.南京医科大学病原生物学系,

江苏省现代病原生物学重点实验室,江苏南京210029)

【摘要】　目的　获取白纹伊蚊β2肌动蛋白基因序列并探讨其作为基因表达内参照的作用。　方法　根据昆虫β2肌动蛋白核苷酸序列的高度保守区设计引物,通过PCR的方法从白纹伊蚊C6/36β2肌动蛋白基因片段,进一步通过RT2PCR的方法验证其在稳定转染空载体和40SC6/36细胞中的表达。　结果　获得白纹伊蚊β2肌动蛋白基因片段,长91189%以上。在稳定转染空载体和RPS4基因的36。　结论　成功获得了白纹

伊蚊β2肌动蛋白基因片段,。【关键词】　白纹伊蚊;PCR;RT2PCR

【中图分类号】　　A　　　【文章编号】　167325234(2007)0620454203

[JournalofPathogenBiology.2007Dec;2(6)

拟南芥中通过开花时间决定基因SOC1和其上游负调节基因

FLC介导低温响应和开花之间的相互关系

在适当的时间开花是植物成功繁殖的重要因素，因此，开花由复杂的遗传网络所调控这一事实就显得不足为奇。这个遗传网络由内源信号和环境因素所协调调控。拟南芥决定开花时间的基因SOC1编码MADS box转录因子，而且是关键的开花激活子之一，他和多个开花诱导途径相互作用，即与光周期途径，春化途径，自组织途径，以及赤霉素依赖途径相互作用。为了阐明SOC1基因的下游靶基因，作者采用了微阵列分析，分析显示soc1-2敲出突变增加了低温响应基因CBF和CBF下游基因COR的表达，而SOC1过表达降低了低温响应基因CBF和CBF下游基因COR的表达，这表明SOC1负调节低温响应基因的表达。相反的，低温诱导基因CBFs的过表达增加FLC的表达从而导致低温开花延迟。FLC是SOC1上游的一个负调节子。作者的实验证明在低温响应和开花决定调节基因之间存在反馈环;当春寒在瞬间到来时这个反馈环通过增加FLC的表达来延迟开花时间，而当早春的时候通过SOC1抑制低温响应基因的表达抑制低温响应从而使得开花诱导的发生。

前言

开花是植物从营养生长到生殖生长的过度，在植物的生长周期中是最

拟南芥中通过开花时间决定基因SOC1和其上游负调节基因

FLC介导低温响应和开花之间的相互关系

在适当的时间开花是植物成功繁殖的重要因素，因此，开花由复杂的遗传网络所调控这一事实就显得不足为奇。这个遗传网络由内源信号和环境因素所协调调控。拟南芥决定开花时间的基因SOC1编码MADS box转录因子，而且是关键的开花激活子之一，他和多个开花诱导途径相互作用，即与光周期途径，春化途径，自组织途径，以及赤霉素依赖途径相互作用。为了阐明SOC1基因的下游靶基因，作者采用了微阵列分析，分析显示soc1-2敲出突变增加了低温响应基因CBF和CBF下游基因COR的表达，而SOC1过表达降低了低温响应基因CBF和CBF下游基因COR的表达，这表明SOC1负调节低温响应基因的表达。相反的，低温诱导基因CBFs的过表达增加FLC的表达从而导致低温开花延迟。FLC是SOC1上游的一个负调节子。作者的实验证明在低温响应和开花决定调节基因之间存在反馈环;当春寒在瞬间到来时这个反馈环通过增加FLC的表达来延迟开花时间，而当早春的时候通过SOC1抑制低温响应基因的表达抑制低温响应从而使得开花诱导的发生。

前言

开花是植物从营养生长到生殖生长的过度，在植物的生长周期中是最

拟南芥（Arabidopsis thaliana），是一种广泛分布于亚洲、欧洲以及北非地区的小型开花植物。从分类地位上讲，它属于十字花科(Brassicaceae) 鼠耳芥属(Arabidopsis)。作为近年来最为广泛应用的模式植物，拟南芥在分子遗传学、植物学以及农业科学的研究中发挥了重要的作用，被称为植物中的果蝇，是目前公认的五大模式生物之一。拟南芥基因组测序已于2000年由国际合作完成，也是第一种完成全基因组测序和分析的植物。

拟南芥是二年生草本植物，高7～40厘米。基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶较小，无柄，披针形或线形。叶片表面覆盖有单细胞表皮毛。总状花序顶生，花朵直径约3mm，花瓣4片，白色，匙形。长角果线形，长0.5～2厘米，每个含20～30粒种子。根分为主根和侧根，可容土壤细菌共生。春型拟南芥萌发后3周左右就可开花，能在6周内完成一个世代。严格自花传粉（图1）。

拟南芥生活史与一般的开花植物无异：减速分裂形成的大小孢子分别形成雌雄配子体，即胚囊和花粉。胚囊经过双受精的过程，受精卵与受精极核分别发育成胚和胚乳。

2 拟南芥研究的主要策略

在拟南芥研究中，使用最多的是遗传学研究策略，包括正向遗传学和反向遗传学。正向

遗传

高层内参

美国家族企业的比例达到54.5%，英国为76%，澳大利亚是75%，西班牙是71%，意大利和瑞典甚至超过了90%。

郭凡生：家族企业的出路在于社会化

http://finance.sina.com.cn 2006年03月30日 04:41 第一财经日报

本报记者 许金晶 发自北京

“家族企业完全可以办好，关键问题在于如何提高自身的社会化水平。”

在3月14日举行的“中国特色家族型企业管理论坛”上，曾亲赴国内家族型企业集中地区进行分析考察的慧聪国际(8292.HK)总裁郭凡生作出上述表示。

家族企业面临的三大问题

在中国从计划经济体制向市场经济体制转轨的过程中，一个显著的特征就是民营企业的壮大，而在中国的民营企业中，绝大多数都是家族企业，然而中国的家族企业却往往给人以管理方式落后、任人唯亲、弊端丛生等负面印象。但郭凡生认为，即使是非家族型企业，同样会面临上述问题。

据美国《商业周刊》统计，标准普尔500家公司中三分之一是家族企业，其股东年平均回报率是15.6%，而非家族企业的股东年平均回报率是11.2%；家族企业的平均资产回报率是5.4%，非家族企业的是4.1%。而年营业收入和利润增长率，家族企业也超过非

1农杆菌感受态细胞的制备

挑取根癌农杆菌GV3101单菌落于5 ml含100 μg/ml利福平(Rifampicin)，50 μg/ml卡那霉素(Kanmycin)和50 μg/ml庆大霉素(Genmycin)的LB液体培养基中，28℃振荡培养过夜；取过夜培养菌液500 μl接种于 50 ml LB(含相应抗生素)液体培养基中，28℃振荡培养4-8小时(OD600为0.5-0.8)；冰浴30分钟，4,000 rpm，4℃离心10分钟，加入10 ml预冷的 20 mM CaCI2悬浮农杆菌细胞，4000 rpm，4℃离心10分钟；加入2 ml预冷的 20 mM CaCl2悬浮细胞，冰浴，分装成每管100 μl，液氮中速冻后，置-80℃保存备用。 2.质粒转化农杆菌 GV3101

将构建的带有目的基因的质粒pCAMBIA-1304-plc转化 (冻融法) 根癌农杆菌GV3101，步骤如下：

1) 从-80℃冰箱中取出 GV3101 感受 态细胞 (100 μl)，置于冰上解冻；

2) 加入 5 μl 含目的基因的质粒，轻轻混匀；冰水浴 5 min； 3) 液氮冷冻 8 min； 4) 37℃水浴热激 5 min；

5) 加入 900 μl LB/

原版拟南芥规范种植手册

HANDLING ARABIDOPSIS PLANTS AND SEEDS

Methods used by the Arabidopsis Biological Resource Center

GROWTH OF PLANTS Planting on soil

Growth conditions

Control of pests

Plant isolation and harvesting

SEED HANDLING AND PRESERVATION

The methods used by the ABRC for handling plants and seeds are outlined below. These procedures are designed to generate healthy plants that give maximum set of pure seeds and to preserve these in the safest and most convenient manner. Many other approaches may be equally as good, especia

实时荧光定量RT-PCR内参基因的选择

陈凤花，王琳综述，胡丽华 审校 关键词：实时荧光定量RT-PCR；内参基因

实时荧光定量RT-PCR(real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，FQ RT-PCR)是检测低丰度mRNA的敏感方法，为了去除不同标本在RNA的产量、质量以及逆转录效率上可能存在的差别而获得目标基因特异性表达的真正差异，通常选择一定的内参基因进行校正和标准化。内参基因扩增中的变化可以反映RNA产量、质量和/或cDNA合成效率的变化。选择适当的内参基因以减少检测标本间的差异是必须的。本文就FQ RT-PCR内参基因的选择作一简要综述。

1 内参基因应具备的条件

理想的内参基因应该满足以下条件：① 不存在假基因(pseudogene)，以避免基因组DNA的扩增；② 高度或中度表达，排除太高或低表达；③ 稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显著性差别；④表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；⑤其稳定的表达水平与目标基因相似；⑥ 不受任何内源性或外源性因素的影响