大肠杆菌o157:h7传播途径

VIDAS 大肠杆菌O157 (ECO)筛选

文章出处：长源科技 发布时间：2005-08-07

仅用于实验室

应用范围

VIDAS大肠杆菌O157 (ECO)分析，采用Vitek免疫诊断分析系统（VIDAS）作为自动定性酶联荧光免疫分析(ELFA)，对食品中的大肠杆菌血清型O157进行检测。 前言

大肠杆菌0157时公认的出血性肠炎的病原菌，在美国、加拿大、英国、日本以及比利时造成数起爆发感染〈4，8〉。除牛奶、苹果汁及肉产品可引起感染外，最常见的感染源还是牛肉。肠痉挛和血性腹泻是0157：H7感染后的典型症状。约10%的病人发展成急性肾衰（血尿综合征）。易感人群多为5岁以下小孩及老人（8）。VIDAS ECO分析为一种对大肠杆菌0157快速筛选方法，能够保证对有动力和无动力的菌株进行检测。最新研究表明致病性大肠杆菌0157血清型可能有无动力菌株(3)。

检测原理

VIDAS大肠杆菌O157 (ECO)分析，是一种在自动VIDAS仪器上进行的酶联荧光免疫分析（ELFA）方法。固相容器（SPR）是一个类似于加样头的一次性使用装置，在检测中起固相及加样器之用。SPR用抗大肠杆菌O157抗体包被。各种试剂均封闭在试剂条

抗大肠杆菌O157_H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究

2002,18(2)

中国人兽共患病杂志ChineseJournalofZ

oonoses

17

文章编号:1002-2694(2002)02-0017-03

抗大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的制备

及其被动保护作用的研究

王忠泽1　侯晓军1　荫　俊1　宋　伟1　张松乐1　王　威1　白　洁2

摘　要:目的　制备鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgG抗体(YolkImmunoglobulin,IgY),研究其对肠出血性大肠杆菌(EHEL)O157∶H7的被动保护作用。方法　采用EHECO157∶H7933菌株制备抗原,免疫SPF莱杭鸡,用脱脂和盐析的方法,从其所产鸡蛋中提取IgY抗体,用所得抗体对乳鼠进行动物毒性试验及动物被动保护实验。结果　用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测提取IgY抗体滴度达到1∶200000以上,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测所提取抗体纯度及回收率较高。未发现

IgY抗体对动物的毒性作用,被动保护实验结果表明,IgY抗体对乳鼠感染模型具有明显的保护作用。结论　(1)通过常规免

疫技术,可使SPF鸡产生高效价的IgY抗体。(2)脱脂和盐析是一种简便有效的IgY抗体制备方法。

抗大肠杆菌O157_H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究

2002,18(2)

中国人兽共患病杂志ChineseJournalofZ

oonoses

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文章编号:1002-2694(2002)02-0017-03

抗大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的制备

及其被动保护作用的研究

王忠泽1　侯晓军1　荫　俊1　宋　伟1　张松乐1　王　威1　白　洁2

摘　要:目的　制备鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgG抗体(YolkImmunoglobulin,IgY),研究其对肠出血性大肠杆菌(EHEL)O157∶H7的被动保护作用。方法　采用EHECO157∶H7933菌株制备抗原,免疫SPF莱杭鸡,用脱脂和盐析的方法,从其所产鸡蛋中提取IgY抗体,用所得抗体对乳鼠进行动物毒性试验及动物被动保护实验。结果　用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测提取IgY抗体滴度达到1∶200000以上,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测所提取抗体纯度及回收率较高。未发现

IgY抗体对动物的毒性作用,被动保护实验结果表明,IgY抗体对乳鼠感染模型具有明显的保护作用。结论　(1)通过常规免

疫技术,可使SPF鸡产生高效价的IgY抗体。(2)脱脂和盐析是一种简便有效的IgY抗体制备方法。

抗大肠杆菌O157_H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究

2002,18(2)

中国人兽共患病杂志ChineseJournalofZ

oonoses

17

文章编号:1002-2694(2002)02-0017-03

抗大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的制备

及其被动保护作用的研究

王忠泽1　侯晓军1　荫　俊1　宋　伟1　张松乐1　王　威1　白　洁2

摘　要:目的　制备鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgG抗体(YolkImmunoglobulin,IgY),研究其对肠出血性大肠杆菌(EHEL)O157∶H7的被动保护作用。方法　采用EHECO157∶H7933菌株制备抗原,免疫SPF莱杭鸡,用脱脂和盐析的方法,从其所产鸡蛋中提取IgY抗体,用所得抗体对乳鼠进行动物毒性试验及动物被动保护实验。结果　用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测提取IgY抗体滴度达到1∶200000以上,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测所提取抗体纯度及回收率较高。未发现

IgY抗体对动物的毒性作用,被动保护实验结果表明,IgY抗体对乳鼠感染模型具有明显的保护作用。结论　(1)通过常规免

疫技术,可使SPF鸡产生高效价的IgY抗体。(2)脱脂和盐析是一种简便有效的IgY抗体制备方法。

大肠杆菌及其检验

大肠杆菌的生物学特性

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简介：

大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。 附：肠杆菌科各属

大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。

大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。

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形态与染色

大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。

有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。 附：有动力是什么意思？请看动力试验。

革兰氏阴性杆菌是什么意思？请看革兰氏染色介绍。 大肠杆菌扫描电镜照片 大肠杆菌透射电镜照片 大肠杆菌分裂照片

最新： 大肠杆菌革兰氏染色照片

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培养特性

由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。

最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。

在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：

1

（1）光滑型： 菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈

大肠菌群测定的操作细则

大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 1 设备和材料 1.1 温箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。

1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 显微镜。 1.6 均质器或乳钵。 1.7 平皿:直径为90mm。 1.8 试管。 1.9 吸管。

1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。 1.11 玻璃珠:直径约5mm。 1.12 载玻片。 1.13 酒精灯。 1.14 试管架。 2 培养基和试剂

2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。 2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。

2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。 2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。

2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。 2.6 生理盐水。

大肠杆菌培养操作规程

一、 目的及适用范围

制订本规程的目的为规范大肠杆菌总RNA的制备，保证为诊断试剂产品提供质量可控的质控品及标准品基质。本规程适用于南京实验室提取大肠杆菌总RNA的操作。依照本操作规程，每次可提前大约提取基质液原液2.7ml。

二、 常规时间安排 预计安排 步骤 耗材准备 PBS储存液配置 第一天 培养基配制 灭菌 领取菌种 菌种复苏 第二天 接种 分装培养 RNA完全提取根据需求，自行安排。

三、 培养用耗材准备

1、 锥形瓶、双层铝箔、棉绳

2、 包扎一盒1ml的枪头，50ml康宁冻存管

四、 培养基配制(早上)

培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。

1、 按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中： 例如：配制350mlLB培养基配方如下：[配置双份] 蛋白胨 成分名称 TRYPTONE 称取质量 3.5g 钠 3.5g YEAST XTRACT 1.75g 补足350ml 氯化酵母提取物 去离子水 耗时评估 20min 40min 20min 3h 10min 9h 40min 13h 2、 用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、

完全、溶解。待灭

维普资讯

畜牧兽压杂志

第 2卷】

第3 期

20 0 2年

肉鸡大肠杆菌病的诊治姚忠会(南省文山州农业学校 .南文山云云 630 ) 60 0

中图分类号：5 . 1 8 8 3

文献标识码： B

文章编号：0 4 6 0 (0 Z 0 0 30 1 0— 7 4 Z 0 ) 30 4 1

Z0 0 1年 3月，山县城郊某鸡场 2 0文 0 0多只 3 0

糖、麦芽糖、甘露醇，三糖铁产酸产气、不产生 H:不 s,液化明胶，尿素酶阴性，不利用拘木酸盐，基质试验阳性， .试验阳性， P试验阴性。 M R. V3 3动物试验 .

日龄艾维因肉鸡发生以呼吸困难、喘鸣、下痢为主要症状的疫情，日死亡 1 0多只。经诊断为大肠杆菌病现报道如下：

1发病情况该鸡群在 3 0日龄时发病病鸡主要表现精神萎顿，畏寒，挤堆，翅下垂，呼吸困难，喘鸣，食废绝，饮部分鸡拉灰黄色或灰绿色稀便。发病后 3d开始出现死 亡 .日死亡 1每 O多只， d时间就已死亡 8 1 5 0几只，且

用 2 4h普通肉汤培养物，腔接种 5只小白鼠，腹 同时用灭菌肉汤接种 2只小白鼠作为对照，剂量均为00 . Zm]只种后 4/接 8 h内， 5只试验小白鼠均死亡，

2只对照小白鼠均健活；剖检可见死亡鼠心外膜有点

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第 2卷】

第3 期

20 0 2年

肉鸡大肠杆菌病的诊治姚忠会(南省文山州农业学校 .南文山云云 630 ) 60 0

中图分类号：5 . 1 8 8 3

文献标识码： B

文章编号：0 4 6 0 (0 Z 0 0 30 1 0— 7 4 Z 0 ) 30 4 1

Z0 0 1年 3月，山县城郊某鸡场 2 0文 0 0多只 3 0

糖、麦芽糖、甘露醇，三糖铁产酸产气、不产生 H:不 s,液化明胶，尿素酶阴性，不利用拘木酸盐，基质试验阳性， .试验阳性， P试验阴性。 M R. V3 3动物试验 .

日龄艾维因肉鸡发生以呼吸困难、喘鸣、下痢为主要症状的疫情，日死亡 1 0多只。经诊断为大肠杆菌病现报道如下：

1发病情况该鸡群在 3 0日龄时发病病鸡主要表现精神萎顿，畏寒，挤堆，翅下垂，呼吸困难，喘鸣，食废绝，饮部分鸡拉灰黄色或灰绿色稀便。发病后 3d开始出现死 亡 .日死亡 1每 O多只， d时间就已死亡 8 1 5 0几只，且

用 2 4h普通肉汤培养物，腔接种 5只小白鼠，腹 同时用灭菌肉汤接种 2只小白鼠作为对照，剂量均为00 . Zm]只种后 4/接 8 h内， 5只试验小白鼠均死亡，

2只对照小白鼠均健活；剖检可见死亡鼠心外膜有点

大肠杆菌表达载体,载体介绍,载体图谱,载体应用,载体序列

pGro7

编号  

北京华越洋VECT-­‐340  

pGro7载体基本信息  载体名称:  质粒类型:  高拷贝/低拷贝:  启动子:  克隆方法:  载体大小:  

5'  测序引物及序列:  3'  测序引物及序列:  载体标签:  载体抗性

:  筛选标记:  备注:  稳定性:  质粒类型:  病毒/非病毒:    

pGro7  

Chaperone  Plasmid分子伴侣质粒  -­‐-­‐  -­‐-­‐  

多克隆位点，限制性内切酶  5.4kb  -­‐-­‐  -­‐-­‐  -­‐-­‐  

chloromycetin(氯霉素)