生物样品前处理

第三部分 ICP-AES中样品的分解、制备

1. 前言

自上世纪60年代以来，由于ICP光源的无可比拟的优点，ICP-AES在地质、冶金、环境、医学、药品、生物、海洋、化工新型材料、核工业、农业、食品、水质等各领域及学科方面得到了广泛的应用，因而样品的种类十分庞杂繁多，但不管样品的种类何其繁多，其物理状态总是固体、液体、气体三种。

2. 将样品引入ICP光源的方法

1）液体样品引入ICP光源 A) B)

将液体雾化成气溶胶状态引入ICP光源，常用的有气动雾化和超声波雾化。

将液体以电热蒸发或直接插入技术来引入ICP光源。

2）固体样品引入ICP光源

A) 电弧式火花融蚀，用放电方式将固体样品的表面产生气溶胶引入ICP光源中。

B) 将固体样品用电热蒸发技术（ETV）引入ICP光源。

C) 激光融蚀，用激光的能量产生的微粒（气溶胶、溅射微粒、蒸气羽等）引入ICP光源。

D) 将固体样品直接插入ICP光源。

E) 其他将粉末固体样品引入ICP光源的方法，如低带法，泥浆法等。 3）气体样品引入ICP光源

A) 气态样品直接引入ICP光源。 B) 氢化物发生法。 C) GC—ICP联用。

3．样品引入ICP光源的通则

虽然针对不同状态的样品有众

食品安全分析样品前处理

固相萃取技术

固相萃取技术也被称作SPE，是英文“soild phase extraction”的缩写，利用这种技术进行食品检测能够保障食品检测的准确性，同时进行食品检测的灵敏度也比较高，能够有选择性的吸附目标物，将杂质进行快速分离。目前有商用的固相萃取技术，这中技术能够在较短的时间内检验甲睾酮，同时能够用于分析抗疲劳食物中的甲睾酮。

除了这种商用的固相萃取技术，目前还有许多新型的固相萃取技术小柱和快速检测技术联用，加快了食品检测的效率。目前有一种新型的固相萃取技术叫基质分散固相萃取技术，利用这种新型的检测技术进行食品的检测主要是将涂渍有C18等聚合物的固相萃取材料和样品一起经过研磨之后获得班干状态的混合物，再将这种混合物作为柱的填充料进行填充，然后提取样品，利用淋洗液将吸附柱上的待测物洗脱，然后记性样品的检测，这种新型的检测方式比较适合萃取固体、半固体以及比较粘稠的样品，在进行检测之前不需要进行样品匀浆、离心以及沉淀等流程，这就在一定程度上简化的检测流程，提高了样品的检测效率。 微萃取技术

微萃取技术也可以称作LPEM，是英文“liquid phase microextraction

1. 化妆品微生物检测样品的处理（摘至GB7918） 样品的采集

1.1

所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。包装量小于20g的样品，采样时可适当增加样品包装数量。

1.2 供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不

得打开，防止样品被污染。

1.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不

能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。

1.4 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取

出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。

1.5 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污

染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在符合生物安全要求的实验室中进行。

供检样品的制备

2.1 液体样品

2.1.1 水溶性的液体样品，可量取10mL加到90mL灭菌生理盐水中，混匀后，

制成1：10检液。

2.1.2 油性液体样品，取样品10g，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL 灭

菌的吐温80，在40℃～44℃水浴中振荡混合10

有关固体中TOC测定的样品的酸化及数据处理

通常固体中的TOC测定有2种方法，其一是直接测定法，其二是减量法即TOC=TC-TIC，分别通过测定TC和TIC从而得到TOC。目前通常以直接测定法为主要检测手段。主要原因是仪器内置的酸化装置存在加酸的量控制问题，过量酸气会对仪器管线乃至IR检测器的损害。而不同的样品的含碳酸盐不同，使而很难精确控制酸的加入量，所以，目前被推荐的是TOC的直接测定法即预先对样品的酸化处理。

TOC测定：样品预处理

每份样品分成两部分，一部分处理后用来测试总碳TC(the total carbon of the bulk sample)的百分含量，另一部分处理后用来测试有机碳TOC’(organic carbon of the carbonate-free residue)的百分含量。其具体方法如下:

(1)取样品1克左右，50°C下烘干（24小时），烘干后取出放入干燥器，称重； (2)将样品研磨粉碎至200目，注意带一次性手套，避免直接手接触样品； (3)加入1mol/l的盐酸（根据碳酸钙百分含量适量加入），去碳酸盐，用磁力搅拌子搅拌，至碳酸盐完全反应，静置24小时；

(4)反复多次(4~5次)加入纯净水清洗﹑离

检测分析

食品研究与拜发

２００６，ＶｏＬ２７．ＮＯ．３

９５＝＝．

微波消解在处理生物样品中的应用

代春吉，董文宾

（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西咸阳７１２０８１）

摘要：总结了常用的各种生物样品处理方法，并重点对微波消解生物样品时样品的取样量、样品预处理的方法、所用溶剂的种类和数量以及加热时间和压力的选择作了阐述，从而为微波消解生物样品提供了操作依据。关键词：微波消解；生物样品；应用

’１１ＨＥＡＰＰＬＩＣＡ’１１（）Ｎ０量’ＭｌＣＲＯＷＡＶＥＤＩＧＥＳ７１１０ＮＩＮ７ＩＨＥＰＲＯＣＥＳＳＩＮＧＯＦＢ１０ＬＯＧＩＣＡＬＳＡＭＰＬＥＳ

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应用现代固相提取技术开发样品前处理方法通向更纯净、快速、简单的样品前处理的捷径

Waters化学品部金琦芸 2007 8广州

©2007 Waters Corporation

概要 样品前处理回顾—常规样品前处理技术及其局限性—固相萃取技术(SPE)基本概念—从硅胶基材到聚合物基材—从纯反相模式SPE到复合模式SPE—概念提出与实验验证————临床分析环境分析中药分析食品安全分析

现代固相萃取技术的发展趋势及其原由 Oasis® 2x4固相萃取技术—走向更纯净、更简易的样品前处理固相萃取技术在各行各业的应用实例

结论

©2007 Waters Corporation

今日分析实验室面临的挑战以有限的预算和仪器、人力应付更多的样品，更复杂的样品基质和更低的检测限… 医药工业—新型药物往往药效更高(使用剂量更低):体液中药物浓度趋向更低—药物研发中所涉及的样品分析量极为庞大，如临床前期的ADME-Tox研究、药物剂型研究和临床试验阶段的生物利用度(bioavailability)、生物等效性 (bioequivalence)等测试

食品安全分析—国际组织(如欧盟等)常将已禁用或零忍受度的污染物、非法添加物的最低检测限定为0.

第二章食品样品的采集与 处理

第一节 食品样品的采集、制备与保存

食品分析的一般程序： 样品的采集、制备和保存； 样品的预处理； 成分分析； 分析数据处理； 撰写分析报告

一、样品的采集采样的概念：在产品中抽取有一定代表性样品，供分析化验用。 样品采集的目的：确保分析结果准确无误。 由于被测样品品种与选取的部位不一，生产、运输、存储条件 不同，因此，要确保取样有代表性，必需运用正确的采样技术。

此外，正确采集样品后对样品的制备与保存，为样品作进一步的加工及处理提供了必不可少的保障。

正确采样的原则1.采集的样品：均匀、有代表性，能反映全部被检食品的组成 2.采样过程中：要设法保持原有的理化指标，防止成分逸散或带 入杂质 正确采样的步骤

1.获取检样。从各批样品中的各个部位，运用相应的技术手段或方法，取适量的样品。 2.将检样混合到一起，得到原始样品 3.将原始样品经过技术处理后，抽取的作为分析检验用的部分称 为平均样品。

正确的采样数量和方法 数量：依据分析项目的要求、分析方法的要求及被检物的均匀程 度三 个因素确定采样数量。 平均样品：一式三份，分别供检验、复检、备查，每份样品不少

于0.5kg。检验掺伪物的样品取样数量要多

第二章食品样品的采集与 处理

第一节 食品样品的采集、制备与保存

食品分析的一般程序： 样品的采集、制备和保存； 样品的预处理； 成分分析； 分析数据处理； 撰写分析报告

一、样品的采集采样的概念：在产品中抽取有一定代表性样品，供分析化验用。 样品采集的目的：确保分析结果准确无误。 由于被测样品品种与选取的部位不一，生产、运输、存储条件 不同，因此，要确保取样有代表性，必需运用正确的采样技术。

此外，正确采集样品后对样品的制备与保存，为样品作进一步的加工及处理提供了必不可少的保障。

正确采样的原则1.采集的样品：均匀、有代表性，能反映全部被检食品的组成 2.采样过程中：要设法保持原有的理化指标，防止成分逸散或带 入杂质 正确采样的步骤

1.获取检样。从各批样品中的各个部位，运用相应的技术手段或方法，取适量的样品。 2.将检样混合到一起，得到原始样品 3.将原始样品经过技术处理后，抽取的作为分析检验用的部分称 为平均样品。

正确的采样数量和方法 数量：依据分析项目的要求、分析方法的要求及被检物的均匀程 度三 个因素确定采样数量。 平均样品：一式三份，分别供检验、复检、备查，每份样品不少

于0.5kg。检验掺伪物的样品取样数量要多

前处理： 1. 称取2.00 g均匀试样，置于50 mL离心管中，加入乙酸乙酯15 mL，涡旋1 min，超声30 min，

以8 000 r/min离心5 min。上清液倒入50 mL比色管中，残渣再加入乙酸乙酯15 mL，重复上述操作一次，合并提取液于50 mL比色管中。在50 mL比色管中，加入正己烷5mL，涡旋1 min，静置分层。弃去上层正己烷层，将下层清液倒入100 mL鸡心瓶中，置于旋转蒸发仪上，在45 ℃水浴中真空浓缩至干，准确加入甲醇水溶液2.0 mL溶解残渣。过0.2 μm微孔滤膜，滤液经液相色谱—串联质谱仪测定。按上述操作步骤制备样品空白提取液。（2012，虞成华）+测食品 2. 用脱脂棉蘸取蒸馏水将塑料样品擦拭，晾干，用剪刀剪至1 cm×1 cm大小，备用。准

确称取1.0 g塑料样品于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈，在室温条件下经超声清洗器超声提取20 min，并在4000 r min-1 的条件下离心 5 min，上清提取液转移至150 mL旋转蒸发瓶中，重复提取两次并将提取液合并，在35℃水浴下旋转蒸发至近干，用乙腈：0.1%甲酸水(70:30,v/v)定容至2 mL，振荡均匀后过0.22 μm滤膜，待UPL

实验二生物样品的荧光观察

一、实验目的

1、初掌握荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜的结构、原理、使用方法及其在细胞生物学研究中的应用。

2、掌握生物材料的荧光染色和活体荧光蛋白的观察方法。 3、了解激光共聚焦的原理。

二、实验原理

1、某些物质经短波光照射后，分子被激活，吸收能量后呈激发态。其能量除部分转换为热量外，相当一部分则以波长较长的光能辐射出来，这种波长长于激发光的可见光称为荧光。细胞内的某些物质经过短波光照射后，可以发出自发荧光。在生物学研究中，能将发荧光的有机化合物-荧光染料与特定的细胞组分相结合，通过激发后产生的荧光对细胞组分进行定性和定位。

2、生物样品的荧光观察采用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。荧光显微镜以波长较短的光为光源，照射被检样品，激发被检物品内的荧光物质发出可见的荧光，通过物镜和目镜放大成像。激光共聚焦显微镜也是来观察样品中荧光分布状况的。激光共聚焦显微镜是以激光为光源，在某一瞬间只用很小一部分光照明，通过检测器的一个小孔或裂缝后成像，保证只有来自该焦平面的光成像，而来自焦平面外的散光则被小孔和裂缝挡住，成像异常清晰。此外，激光共聚焦显微镜可以在同一样品的不同焦平面进行扫描得到不同焦平面的图像，然后通过计算机重构出