免疫细胞

学习目标 掌握 HSC功能特征 掌握阳性和阴性选择的生物学意义 罗列 T 、 B 细胞的主要表面标志，并掌握其功能:-TCR-CD3 complex; -BCR complex; -coreceptors; -co-stimulatory molecules and co-stimulatory receptors

掌握T、B细胞的分类方法与功能 掌握 NK 细胞的特点

I 免疫系统:

概述

Tissues and organs Cells Molecules

免疫细胞的类型Cells of adaptive immune systemAntigen specific lymphocytes (T,B cells) Antigen presenting cells抗原提呈细胞

Cells of innate immune systemMononuclear phagocytes 单核-巨噬细胞 Granulocytic cells 粒细胞 Mast cells 肥大细胞 Natural killer cells 自然杀伤细胞 Platelets 血小板4

Hematopoietic Stem Cell (HSC ) 造血干细胞 H

学习目标 掌握 HSC功能特征 掌握阳性和阴性选择的生物学意义 罗列 T 、 B 细胞的主要表面标志，并掌握其功能:-TCR-CD3 complex; -BCR complex; -coreceptors; -co-stimulatory molecules and co-stimulatory receptors

掌握T、B细胞的分类方法与功能 掌握 NK 细胞的特点

I 免疫系统:

概述

Tissues and organs Cells Molecules

免疫细胞的类型Cells of adaptive immune systemAntigen specific lymphocytes (T,B cells) Antigen presenting cells抗原提呈细胞

Cells of innate immune systemMononuclear phagocytes 单核-巨噬细胞 Granulocytic cells 粒细胞 Mast cells 肥大细胞 Natural killer cells 自然杀伤细胞 Platelets 血小板4

Hematopoietic Stem Cell (HSC ) 造血干细胞 H

　　我们知道，我们的身体是一个由细胞构成的王国，极其精密复杂，同时又高度有序。任何伟大的王国都既需要能干建设者，也需要勇猛防卫兵，我们身体细胞王国也不例外。

　　两者功能有什么不同

　　当我们的人体还在成长时，干细胞是细胞王国的建设者，通过分化源源不断提供新生细胞，增加我们身体细胞的数量;当我们成年后身体不再成长，干细胞又会扮演细胞王国的维护者，及时替换和更新衰老或受损的细胞。

　　干细胞是建设者

　　当有外敌入侵，如细菌和病毒，免疫细胞就会扮演细胞王国的军队，快速反应，将其清除。如果细胞王国中出现叛变分子，如正常细胞突变为癌细胞，免疫细胞就会扮演安保系统，将其识别并清除。

　　免疫细胞是防卫者

　　当外敌入侵过多，或王国内叛变分子太多，免疫细胞没有能力全部清除时，我们的身体就会生病。

　　两者如何分类

　　现在，让我们来进一步分别了解干细胞和免疫细胞，他们都分哪些种类，不同种类功能有何差异：

　　(1)按照分化潜能分类，干细胞分为：全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。

　　如果把人体比喻为一棵树，深埋大地的种子就是全能干细胞，就如同种子可以发育成长为一颗参天大树。

　　大树的主要枝干可以比喻为多能干细胞，如脐带/胎盘间充质干细胞，可以向

细胞免疫荧光染色

1. 盖玻片处理：用前1天用纱布擦净灭菌，放入6孔板。

2. 接种细胞：较低密度为适宜，约2000－10000个/孔（根据细胞生长状态决定，常用

5000个/孔），2ml（浓度为2500/ml）

3. 24h后细胞贴壁，根据需要同步16－18h，干预处理，细胞融合60－70％时染色最

佳

4. 37度PBS洗涤，3ml/孔，贴边加（可将6孔板倾斜，加完样在放正以防冲掉细胞，

0.5min。室温PBS也可，但4度禁止，否则细胞易皱缩。

5. 固定：4％多聚甲醛(1ml)，先常温稳定5min，然后4度，10min，（可放在饭盒内）。 6. 吸掉多聚甲醛，迅速加PBS 5ml/孔，洗涤5min×3次，镜下观察，细胞形态如前。 7. 透化：0.1％－4％triton×－100，1ml/孔，室温透化5min（triton是去污剂，目的是

将脂质成分破坏，如细胞膜、核膜等，故不影响实验结果，可不用洗涤）

8. 5％BSA（滤过）室温封闭至少20min（可配制含5％BSA和0.2％triton的混合液，将

两步合成一步）风干

9. 用5％BSA将一抗1：50或1：100（常用）稀释至EP管 200ul/玻片 10. 将纱布垫在饭盒中，去离子水润湿纱

第十三章 B淋巴细胞介导的体液免疫应答

一、单项选择

1. 再次体液免疫应答时，下述哪项是正确的？

A. 抗体产生的潜伏期短 B. 抗体亲和力低 C. 抗体维持时间短 D. 以IgM抗体为主 E. 刺激的抗原与初次不同 2. 体液免疫应答主要由下列哪种免疫细胞所介导：

A. T细胞 B. B细胞 C. NK细胞 D. 吞噬细胞 E. 上皮细胞 3. 下述哪项不是记忆性B细胞的特点：

＋

A. 大小与静止B细胞相仿 B. 可持续分泌高水平Ig C. CD27 D. 再次与相同抗原相遇时可迅速活化并分泌大量Ig E. 存活时间较长 4. B细胞对以下哪种抗原的应答需要T细胞辅助： A. 白喉毒素 B. 脂多糖 C. 荚膜多糖

D. 金黄色葡萄球肠毒素 (SEA) E. 以上都不是 5. 下列哪种描述不是再次免疫应答的特点： D

A. 潜伏期短 B. 抗体浓度增加快，快速到达平台期

C. 抗体维持时间长 D. 抗体水平持续很低 E. 诱发再次应

肿瘤的细胞免疫治疗

□华中科技大学同济医学院附属协和医院干细胞研究与应用中心

湖北省生物靶向治疗研究重点实验室

傅冰洁张萌李欣审校黄士昂教授

（２００７）０４－００６１－０４［中图分类号］Ｒ７３０．５［文献标识码］Ａ［文章编码］１６７１－９４５Ｘ

肿瘤是各种致癌因素诱发细胞恶变和多种免疫细胞抗肿瘤监测杀伤功能两种“阴阳”机制互动失衡导致的恶性疾病。传统的肿瘤治疗主要是通过手术、化疗与放疗来达到早期根除肿瘤和减轻瘤负荷的目的，存在着肿瘤转移与复发的危险性，具有损伤正常组织与免疫功能低下等严重副作用，导致目前临床上肿瘤转移、复发和死亡的几率极高。肿瘤的免疫细胞治疗是通过恢复与增强肿瘤患者自身的免疫监测和杀瘤功能，可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞，达到治疗肿瘤、预防复发与转移和最终根治肿瘤的目的，具有特异性强、副作用轻等优点，正在逐步成为肿瘤综合治疗中的一个重要环节，也是当前肿瘤治疗基础研究和临床应用的热点与发展方向。

目前的肿瘤免疫细胞治疗主要包括：细胞因子诱导杀伤细胞、淋巴因子激活杀伤细胞、自然杀伤细胞和特异性更强的肿瘤浸润细胞等具有直接杀伤肿瘤细胞效应的免疫细胞，可呈递肿瘤特异性抗原以活化具杀伤效应的Ｔ细胞的ＤＣ细胞，以及具有负向免疫调

细胞爬片免疫荧光实验步骤

第一天：

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

第二天：

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

细胞免疫荧光步骤

1.在24孔板里加500微升培养基，放爬片，接种细胞（做实验以30-50%汇合度较好。10000-30000左右

2.给药处理24h

临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果的意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”的意义打印在报告中，以增加病理报告的使用价值。

1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。

2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。

3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义

多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。

谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。

拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。

雌激素受体（ER）--性激素作用--胞

第二章 免疫球蛋白

免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白

抗体（Antibody，Ab）：将机体受抗原刺激后出现的能与抗原发生特异性结合，具活性的球蛋白 。 抗体是Ig，而Ig并非都是抗体

高变区（hypervariable regio，HVR）： 可变区中某些区域的aa组成和排列特别易变化或具更高的变易性。 CDR（互补决定区）：Ig的抗原结合部位和抗原表位互补结合部位，决定抗体的特异性。

铰链区：位于CH1和CH2之间，富含脯aa，富有弹性，可自由折叠。意义：能使V区与不同距离的抗原结合补体结合位点易于暴露，IgM和IgE无铰链区。

J链 （Joining Chain）：连接两个或两个以上Ig单体作用。SIgA：二聚体 IgM： 五聚体

分泌片SP（Secretory Piece）： 是SIgA上 的一个辅助成分上皮细胞合成，分泌到黏膜细胞表面 作用：具抵抗外分比液中蛋白水解酶的降解作用，稳定SIgA的作用。

Ig 多样性：自然界多种不同的抗原（表位）诱导机体产生多种不同的特异性抗体。 同一种抗原（表位）诱导机体产生特异性相同、类型不同的抗体

同种型（I

篇一：DC-CIK生物免疫疗法

一、DC细胞治疗 ............................................................................................................. 1

什么是DC细胞治疗 ................................................................................................. 1

DC细胞治疗肿瘤的原理 ........................................................................................... 2

DC细胞治疗的肿瘤有哪些 ........................................................................................ 2

DC细胞治疗方案的优势 .................................................................