sgRNA设计原则

SgRNA设计方法

SgRNA（small guide RNA简称），是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分，早先发现的guide RNA，由两部分组成—tracRNA和crRNA, 两部分融合表达后，即sgRNA也能很好的行使guide的功能，与cas9蛋白结合，引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

SgRNA脱靶问题一直备受关注，如何设计特异性好的靶点成为大家关注的焦点，很多实验室开发了不同的设计软件，大体原则如下：

（1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右； （2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；

（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低 （4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率； （5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的ATG下游，最好位于第一或第二外显子；

（6）检查sgRNA靶向结合位点基因组序列是否存在SNPs； （7）如采用Cas9单切口酶，设计paired-gRNA需

Hereditas (Beijing) 2015年11月, 37(11): 1125―1136 www.chinagene.cn

综 述 CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估

谢胜松1，张懿2，张利生1，李广磊1，赵长志1，倪攀1，赵书红1

1. 华中农业大学，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 中国人民解放军第161医院妇产科，武汉 430010

摘要： 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术，已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种

的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点，而使用高效且特异的sgRNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前，已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sgRNA设计和/或脱靶效应评估软件，但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sgRNA 设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述，通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析，最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法，以及如何筛选高效且特异的sgRNA进行了归纳总结

设计模式

Design Pattern

面向对象研究的新领域

设计模式：起源起源

设计模式：起源

Gof (Gang Of Four ，“四人帮”

)

设计模式：起源

设计模式

什么叫模式

？

设计模式：研究现状设计模式的研究现

状

模式的分类(gof 提出的23个

)

Chain of Responsibility

Command

Iterator

Mediator Memento Observer State

Strategy

Visitor

Adapter (对象)Bridge Composite Decorator Facade Flyweight Proxy Abstract Factory Builder Prototype Singleton 对象Interpreter Template Method

Adapter (类)Factory Method 类

Bridge(桥梁)

模式案

例

Bridge(桥梁)模式 最初的设计
11

Bridge(桥梁)模式 需求变化：鸟类要会飞
12

Bridge(桥梁)模式 如果增加一种鸟类“企鹅”呢？
13

Bridge(桥梁)模式 改进方法：对“飞”使用多态
14

Bridge(桥梁)模式 改进方法：再次使用继承
15

Bridge(桥梁)模式 如果增加“游

一、选择题

1. 开放-关闭原则的含义是一个软件实体a。

（A）应当对扩展开放，对修改关闭（B）应当对修改开放，对扩展关闭 （C）应当对继承开放，对修改关闭（D）以上都不对 2. 下列属于面向对象设计基本原则的是( c) （A）继承（B）封装（C）里氏代换（D）都不是

3. 对于违反里式代换原则的两个类，可以采用的候选解决方案错误的是：（d）

A.创建一个新的抽象类C,作为两个具体类的超类，将A 和B 共同的行为移动到C 中，从而解决A和B 行为不完全一致的问题。 B.将B到A的继承关系改组成委派关系。

C.区分是“IS-a”还是”Has－a”。如果是“Is-a”，可以使用继承关系，如果是”Has－a”应该改成委派关系

D.以上方案都错误

4. 关于继承表述错误的是：（d）

A.继承是一种通过扩展一个已有对象的实现，从而获得新功能的复用方法。

B.泛化类（超类）可以显式地捕获那些公共的属性和方法。特殊类（子类）则通过附加属性和方法来进行实现的扩展。

C.破坏了封装性，因为这会将父类的实现细节暴露给子类。 D.继承本质上是“白盒复用”，对父类的修改，不会影响到子类。 5. 对于依赖倒转的表述错误的是（）

A.依赖于抽象而不依赖于具体，也就是针对

楼梯是楼层间的垂直交通枢纽 , 是楼房的重要构件。在高层建筑中虽然以电梯和自动扶梯作垂直交通的主要手段 , 但楼梯往往仍是必不可少的。楼梯在建筑中除具有重要的使用功能之外 , 还是一个引人注目的装饰景点。

楼梯设计应符合使用方便、安全疏散及富有装饰美的基本要求 , 同时应遵守《民用建筑设计通则》、《建筑设计防火规范》、《建筑楼梯模数协调标准》等规范的有关规定。

一、楼梯的构成

楼梯一般由梯段、平台、中间平台三大部分构成。其中, 中间平台也称休息平台(小型楼梯可不设此部分)。

楼梯的主体部分是梯段，它包括结构支承体、踏步、栏杆( 栏板)扶手等三部分。普通楼梯的装饰主要集中在踏步和栏杆扶手上。

二、楼梯的类型

楼梯有不同的分类方法:

(一) 、材料分:有木制楼梯、钢制楼梯、钢木楼梯和钢筋混凝土楼梯。

1.木制楼梯, 是全木制或主体结构为木制的楼梯。这种楼梯造型典雅、古朴,常用于住宅建筑的室内,但其防火性较差,施工中需作防火处理。此外,根据国家关于保护生态环境与森林资源的政策,这种楼梯应控制采用。

2.钢制楼梯, 是全钢制或主体结构为钢制的楼梯。它具有强度大、防火性好及轻便等特点,常见于工业建筑中。

3.钢木楼梯, 是主体结

楼梯是楼层间的垂直交通枢纽 , 是楼房的重要构件。在高层建筑中虽然以电梯和自动扶梯作垂直交通的主要手段 , 但楼梯往往仍是必不可少的。楼梯在建筑中除具有重要的使用功能之外 , 还是一个引人注目的装饰景点。

楼梯设计应符合使用方便、安全疏散及富有装饰美的基本要求 , 同时应遵守《民用建筑设计通则》、《建筑设计防火规范》、《建筑楼梯模数协调标准》等规范的有关规定。

一、楼梯的构成

楼梯一般由梯段、平台、中间平台三大部分构成。其中, 中间平台也称休息平台(小型楼梯可不设此部分)。

楼梯的主体部分是梯段，它包括结构支承体、踏步、栏杆( 栏板)扶手等三部分。普通楼梯的装饰主要集中在踏步和栏杆扶手上。

二、楼梯的类型

楼梯有不同的分类方法:

(一) 、材料分:有木制楼梯、钢制楼梯、钢木楼梯和钢筋混凝土楼梯。

1.木制楼梯, 是全木制或主体结构为木制的楼梯。这种楼梯造型典雅、古朴,常用于住宅建筑的室内,但其防火性较差,施工中需作防火处理。此外,根据国家关于保护生态环境与森林资源的政策,这种楼梯应控制采用。

2.钢制楼梯, 是全钢制或主体结构为钢制的楼梯。它具有强度大、防火性好及轻便等特点,常见于工业建筑中。

3.钢木楼梯, 是主体结

网站界面设计原则

网站界面设计应遵循的几个原则

网站用户界面（Website User Interface）是指网站用于和用户交流的外观、部件和程序等等。如果你经常上网的话，会看到很多网站设计很朴素，看起来给人一种很舒服的感觉；有点网站很有创意，能给人带来意外的惊喜和视觉的冲击；而相当多的网站页面上充斥着怪异的字体，花哨的色彩和图片，给人网页制作粗劣的感觉。网站界面的设计，既要从外观上进行创意以到达吸引眼球的目的，还要结合图形和版面设计的相关原理，从而使得网站设计变成了一门独特的艺术。通常的讲，企业网站用户界面的设计应遵循以下几个基本原则：

1．用户导向（User oriented）原则

设计网页首先要明确到底谁是使用者，要站在用户的观点和立场上来考虑设计网站。要作到这一点，必须要和用户来沟通，了解他们的需求、目标、期望和偏好等。网页的设计者要清楚，用户之间差别很大，他们的能力各有不同。比如有的用户可能会在视觉方面有欠缺（如色盲），对很多的颜色分辨不清；有的用户的听觉也会有障碍，对于网站的语音提示反映迟钝；而且相当一部分用户的计算机使用经验很初级，对于复杂一点的操作会感觉到很费力。另外，用户使用的计算机机器配置也是千差万别，包括显卡、声卡、内存、网速

疏散标志设计原则

车站疏散标志设计

1 设计原则

根据既有的国标及地标为设计依据：

地铁设计规范 GB 50157 – 2003, 第19章

北京地标 消防安全疏散标志设置标准 DBJ01 – 611 – 2002

1． 疏散标志种类

疏散标志含电致发光型（电光源型）及光致发光型（含蓄光型）2种

2． 疏散标志设置的规范要求

a 地铁设计规范 GB 50157 – 2003, 第19章（第19.1.60项）（适用部分节录） 站厅、站台、自动扶梯、自动人行道及楼梯口；

人行疏散通道拐弯处、交叉口及安全出口；沿通道长向每隔不大于20米处；

疏散通道口和疏散门均应设灯光疏散指示标志；

指示标志距地面小于1米；

站厅、站台、疏散通道等人员密集部位的地面，宜设置保持视觉连续的发光疏散指示标志。

b 消防安全疏散标志设置标准 DBJ01 – 611 – 2002（适用部分节录）

设置电光型安全疏散标志，设置间距不应大于20米；（第3.3.1项） 应在安全口上设置电光源型安全出口标志；（第3.3.3项）

。。。地铁车站。。。应在疏散走道和主要疏散路线的地面或靠近地面的墙上设置电光源型和蓄光型疏散指示标志或疏散导流标志；（第3.3.4项）

疏散走道

活动隔断墙设计原则

传统的隔断已经不能满足现代隔断的要求，所以活动隔断墙就应运而生，取代了传统隔断的位置，但是随着隔断的要求，隔断又有了更新一步的要求，活动隔断墙有哪些设计原则呢?

下面一起来看一下吧。

隔断是非承重物品，所以其造型的形式多变以及自由度大，可以任意的改变每一个造型而不受到限制，这是比较适合任意空间改造，在设计空间的时候我们要注意隔断与空间的高矮长短以及虚实结合等的变化统一，只有墙的一致性才可以打造出理想的活动隔断墙。

活动隔断墙设计原则1、隔断墙和空间功能的多元化配合

的设定

一般活动隔断墙的功能可以简单的分为装饰型和储物型这两种，现在都是将这两种结合一起进行设计，我们在选择用多功能书架做活动隔断墙的时候，不仅是可以用来陈列书还可以收藏一些有价值意义的小藏品，不仅可以突出品味还可以陶冶性情;还有绝大多数人是选择用隔断屏风作为隔断墙的设计元素，可以给空间带来很强烈的时尚感。

活动隔断墙设计原则2、活动隔断墙花式和材质的合理选

择

在隔断墙的花式上选择我们也是要遵循和室内设计风格搭配的原则，要做到颜色的统一淡雅，图案的精致细腻，做到将隔断墙融合到空间中去，就像是空间固有的模式。

活动隔断墙设计原则3、活动隔断墙和室内的一个整体形

象的塑造

隔断是非承重物

酒店装修设计的原则

无论是纯商务性酒店还是旅游性酒店，是旅游胜地酒店还是城市休闲度假酒店。要分析酒店所处地的地理位置、经济环境、自然环境、历史文化因素，分析入住酒店的客源情况及各类客人占总人数的比例。客源的不同，对酒店的功能要求、空间使用以及设施安排的要求也不同。酒店装修设计不能沿袭过去的传统设计模式，设计要符合不同类型客人的需要，使客人与酒店环境之间自然而然产生一种亲切交流。来自世界各地的客人，有不同的传统观念，不同的生活习惯和方式，不同的民族意识和宗教信仰，对酒店要求各有不同、各有侧重。如何满足客人们的不同需要，是酒店设计要充分重视的。

(1)酒店类空间的内部区域一般可分为大堂、酒店活动区、客房或包房区、餐饮区、操作区、服务管理区、设施设备区等。

(2)大型酒店的详细功能分区 除了酒店功能的基本组成部分，酒店装修设计也是酒店室内空间必须考虑的部分。酒店的功能既要满足客人在酒店内食、宿、娱、购、行的各种行为，也要为酒店经营者服务，保证酒店管理方的各种行为顺利进行。 酒店内部空间的使用一般分三个主要功能区域：公共功能区、客房功能区和内部管理功能区。每一功能区又划分出不同的功能空间，这些空间既要划分明确，又要有机联系。 公共功能区有众