酶联免疫法抗原抗体

全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的检测结果比较

王胜虎1） 陈琪 1） 李媛 2）

1）昆明医科大学附属延安医院检验科，云南昆明 650051； 2）昆明医科大学海源学院基础部，云南昆明

650500

[摘要] 目的 通过比对全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法检测临床标本结果的相关性及符合率，探讨更科学可靠的检验方法。 方法 随机抽取90份临床与体检标本，经Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪和手工加样操作的IMARK2酶标仪测定甲肝、乙肝5项、丙肝、戊肝2项、TP及HIV的结果，并对结果进行相关性及合率的分析 。结果 对所检测项目中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、TP、HIV的相关性系数r>0.9 ，其数据显示相关性较好；而HAV-IgM、HBeAb、HBcAb、HCV、HEV-IgM、HEV-IgG、的相关性系数为 0.9>r >0.6 ；Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法操作比对90个样本的11项检测结果总符合率达96.9％。 结论 全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法有较好的相关性。全自动酶联免疫分析仪的使用还大大的

分子诊断

中国生物制品学杂志

以只

年月第

卷第

期

坛

哈司

。

以”

,

抗体快速诊断试剂与酶联免疫诊断试剂灵敏度比较李秀华宋爱京摘

王佑春比较。

要」目的丑

抗体快速诊断试剂与抗体酶联免疫诊断试剂检测不同样品灵敏度的差异

。

方法,

用扭抗体诊断试剂和

抗体酶联免疫诊断试剂分别检测扭抗体酶联免疫试剂国家参考品结果检测印抗体酶联免疫试剂国家参考品中。,

、

丑

不同亚型

样品以及,

高危人群样品

份阳性样品只检出,

份阳性

份最低检出限样品只检出阳性符合率为,

份阳性

与酶联免疫试剂相比对,,

亚型样品的检测其灵敏度低。

一

倍对,,

重

组样品其灵敏度低印倍对,

重组样品其灵敏度低,

一

倍

在

】

高危人群样品中与酶联免疫诊断试剂

,

阴性符合率为

。

结论

快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂因此其

应用范围不能等同于酶联免疫诊断试剂

。

关【键词】人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂基因型亚型

余家企业生产主要采用双抗原夹心法免疫诊断试剂,

目前我国已有,,

抗体酶联。

田

北京万泰,,

抗体酶联免疫诊断试剂批号珠海丽珠,

,

该类试剂,

田以以效期为田

抗体酶联以洲旧。

灵敏度高已广泛应用于血液的筛查,,

。

最近已有快抗抗。

免疫诊断试剂批号检测方法用重组血清以释。

效期为

速诊断试剂投放市场该类试剂主要采用胶体金或胶体硒对抗原进行标记采用层析原理检

目的比较不同MTB抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT),探索其对活动性结核病的辅助诊断价值。方法对结核组132例和对照组90例观察对象应用PPD、克隆表达的早期分泌抗原靶6000(ESAT-6)和ESAT-6／培养滤液蛋白10000(CFP-10)融合蛋白(简称E／C)进行酶联免疫斑点检测(ELISPOT),检测外周血单个核细胞(PBMC)中经3种抗原刺激后斑点形成细胞(SFC)的数量;对照组同时进行P

结核病与胸部肿瘤 2 1 00参考文献1 H o d n s R . Cln c l h r a o i ei so l f z m i e A . liesM i ia a m c k n t f co a i n . p c rv e . ClnP a m a o i e, 1 8 e iw i h r c k n t 9 9, 1 6: 7 4~ 8 5. 2 V e k t s n K . Cln c l h r a o i ei o sd r to n t e n ae a i ia a m c k n tc c n i e ai n i h p te t e t o a in s w i e r s r a

转载某理工大学讲义，如果有更新的研究文章更好，呵呵

第一节抗原抗体反应的原理

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇 ( 表位 )与抗体超变区的沟槽

分子表面的结构互性与亲合性而结合的。

一、抗原抗体的结合力

抗原抗体间结合为非共价键结合，有四种分子间引力参与。

(1)静电引力：是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相

互吸引的力。又称为库伦引力。这种引力的大小与两电荷间的距离的平方

成反比。两个电荷距离越近，静电引力越强。

(2)范登华引力：是抗原与抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作

用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生吸引力。能促使抗原抗体相互结

合，这种引力的能量小于静电引力。

(3)氢键结合力：是抗体上亲水基团与相应抗原彼此接近时，相互间可

形成氢键，使抗原抗体相互结合。氢键结合力较范登华引力强。

(4)疏水作用力：是抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性

消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步

相互吸引，促进其结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体

结合作用最大。

二、抗原抗体的亲合性和亲合力

亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适

应而存在的引力，它是抗原抗体之间固有的结合力，可用平衡常数K

转载某理工大学讲义，如果有更新的研究文章更好，呵呵

第一节抗原抗体反应的原理

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇 ( 表位 )与抗体超变区的沟槽

分子表面的结构互性与亲合性而结合的。

一、抗原抗体的结合力

抗原抗体间结合为非共价键结合，有四种分子间引力参与。

(1)静电引力：是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相

互吸引的力。又称为库伦引力。这种引力的大小与两电荷间的距离的平方

成反比。两个电荷距离越近，静电引力越强。

(2)范登华引力：是抗原与抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作

用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生吸引力。能促使抗原抗体相互结

合，这种引力的能量小于静电引力。

(3)氢键结合力：是抗体上亲水基团与相应抗原彼此接近时，相互间可

形成氢键，使抗原抗体相互结合。氢键结合力较范登华引力强。

(4)疏水作用力：是抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性

消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步

相互吸引，促进其结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体

结合作用最大。

二、抗原抗体的亲合性和亲合力

亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适

应而存在的引力，它是抗原抗体之间固有的结合力，可用平衡常数K

非标记抗体酶法

由于酶标抗体存在一些缺点，例如①酶与抗体间的共价连结可损害部分抗体和酶的活性；②抗血清中的非特异性抗体被酶标记后，与组织成分结合，可致背景染色等。为此Sternberger等在酶标法的基础上，发展了非标记抗体酶法。包括酶桥法（Enzyme Bridge Method）和过氧化物酶抗过氧化物酶法（Peroxidase Antiperoxidase Method, PAP法）。现分述如下。 （一）酶桥法

1．基本原理 首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体，然后使用第二抗体作桥，将抗酶抗体连结在与组织抗原结合的第一抗体上，再将酶结合在抗酶抗体，经呈色显示抗原的分布。在此过程中，任何抗体均未被酶标记，酶是通过免疫学原理与抗酶抗体结合，避免了共价连结对抗体和酶活性的损害，提高方法的敏感性，且能节 省第一抗体的用量。

2．染色步骤 主要程序如图4-4

图4-4 酶桥法主要染色步骤

（1）切片准备及第一抗体孵育前处理同间接法，第一抗体（假设来自种属A）孵育24h（4℃）。第一抗体的稀释度可高些，使抗体的两个Fab段均与组织抗原结合，较牢固，漂洗时不易丢失。

（2）切片与第二抗体（也称桥抗体，抗种属a I

人胎球蛋白A检测试剂盒（酶联免疫法）

（德国DRG EIA4522）

预期用途

此试剂盒可用于血清，血浆，细胞上清，组织提取物和尿液中人胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白的定量的检测；血清或血浆中胎球蛋白A的检测可作为某些癌症及基因遗传缺陷的血清蛋白诊断的辅助工具；此试剂盒仅供实验室专业人士使用 简介

胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白，是由两个氨基末端抑制域和一个较小的羧基末端域组成的59 kDa 分子量的糖蛋白；由肝脏合成，分泌至血流，成年哺乳动物体内的浓度范围在0.5-1.0g/L；婴儿期的血清胎球蛋白A含量高，参与蛋白酶抑制活性，与钙代谢和骨生成调节相关；累积于骨和牙齿内，作为生物学上非胶原骨蛋白的主要部分，研究表明，胎球蛋白A是循环中主要的钙化抑制剂；干涉钙盐沉淀；近期研究显示低水平胎球蛋白A的慢性肾脏衰竭患者与心血管病的高死亡率显著相关；另一方面，糖尿病老年人血清胎球蛋白A含量比正常人高，这是独立于胰岛素抑制剂的其他标记物；另外，高胎球蛋白A水平还可作为心血管疾病的的危险标记物

实验原理

此试剂盒可用于血清样本中人胎球蛋白A的定量检测；采用双位点夹心法，羊抗人胎球蛋白A多抗结合人胎球蛋白A的不同位点

将含人胎球蛋白A的试

抗酪氨酸磷酸酶抗体IgG 测定试剂盒

（化学发光免疫分析法）

2.性能指标

2.1外观和性状

2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固。2.1.2试剂盒内组分（磁性微球除外）应为澄清的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。

2.2净含量

试剂盒各组分净含量应不少于额定装量（见表1）。

表1 各组分额定装量

2.3批内精密度

批内变异系数（CV）应≤8%。

2.4批间精密度

批间变异系数（CV）应≤15%。

2.5准确度

回收率应在（90.0%~110.0%）范围内。

2.6空白限

空白限应≤ 2.5 U/mL。

2.7线性

在（3.5~280.0）U/mL 浓度范围内，线性相关性系数（r）绝对值应大于0.9900。

2.8校准品

2.8.1校准品准确度

相对偏差应在±10% 范围内。

2.8.2校准品瓶内重复性

校准品瓶内重复性（CV）应≤8%。

2.8.3校准品瓶间均一性

校准品瓶间均一性（CV）应≤10%。

2.9质控品

2.9.1质控品准确度

质控品1 每次测定结果均应在[14.1~26.1] U/mL 浓度范围内，质控品2 每次测定结果均应在[36.9~68.5] U/mL 浓度范围内。

2.9.2质控品瓶内重复性

质控品瓶内重复性（CV）应≤8%。

2.9.3质

实验目的：验证小鼠在接受抗原之后机体产生了特异性免疫反应，并观察小鼠各项生理指标以及免疫器官的反应状况，再观察T细胞和B细胞在此应答的反应状况。

实验假设：小鼠免疫灭活疫苗之后，机体会逐渐产生特异性免疫应答，一方面T细胞在接受抗原刺激之后，经过阳性和阴性选择，T细胞从CD4，CD8双阳性选择为单阳性T细胞，并逐步转移，最终到达淋巴结等组织产生效应；另一方面，B细胞也会发育分化为浆细胞和记忆细胞，相应的浆细胞产生抗体以应对抗原。由于小鼠在接受抗原之后，免疫细胞在胸腺和脾脏内的数量和种类将发生变化，另外小鼠血清中也会产生相应的抗体。

因此假设，在排出其他偶然因素引起的误差的情况下，有以下结果：

1. 免疫后的小鼠胸腺大小比对照组更小，脾脏大小比对照组更大；另外免疫后小鼠的淋巴结比对照组更大。

2. 免疫后的小鼠胸腺免疫细胞数量小于对照组，脾脏免疫细胞数量大于对照组。 3. 免疫后小鼠胸腺中的单阳性淋巴细胞比对照组单阳性淋巴细胞更多，双阳性淋巴细胞比对照组更少；免疫后小鼠的脾脏中单阳性淋巴细胞数量多于对照组单阳性淋巴细胞数量。

4. 免疫后小鼠血清里面的抗体检测呈阳性，对照组小鼠血清抗体检测呈阴性。 预期结果：

预计结果与假设一致，即：

1. 免疫

第三章 抗原 一、名词解释 1．Ag

2．免疫原性 3．抗原性

4．抗原决定簇(表位) 5．构象决定簇 6．载体效应 7．共同抗原 8．交叉反应 9．TDAg

10．Forssman抗原 11．独特型抗原 12．SAg 13．佐剂

14．顺序决定簇 15．T细胞表位 16．B细胞表位 17.抗原结合价 18.异种抗原

19.外源性抗原 20.内源性抗原 21.可溶性抗原 22.T细胞表位

23.同种异型抗原 24.颗粒性抗原 25.TI-Ag 二、单选题

1.下列可诱导抗体产生的物质是( ) A. 完全抗原 B. 耐受原 C. 半抗原

D. 小分子化合物 E．人工合成佐剂

2.除了免疫原性以外，抗原的特性还有( A． 毒性

B． 变态反应原性 C． 抗原性 D． 异嗜性 E．耐受性

3.抗原分子中能与抗体结合的基因称为( A． 氨基酸 B． 免疫原 C． 吞噬体

) ) D． 表位

E． 互补决定区

4.来自另一物种的抗原性物质称为（ ） A．同种异型抗原 B.自身抗原 C.共同抗原 D．异嗜性抗原 E．异种抗原 5.半抗原是指( ) A． 既有免疫原性又有抗原性的物质 B． 大多数为蛋白质

C． 可刺