pAs染色法的染色介绍

PAS染色法-概况、原理

PAS染色法概况

PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

PAS染色法原理

PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。 原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。

PAS染色法-应用、制作

PAS染色法-应用

随着医学实验技术的发展 ，近年来 ，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ，还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。

PAS染色法-制作

1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精 Carnoy固定液: 纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml

2. 染色液

1) 过碘酸酒清夜配法: 过碘

PAS染色法-概况、原理

PAS染色法概况

PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

PAS染色法原理

PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。 原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。

PAS染色法-应用、制作

PAS染色法-应用

随着医学实验技术的发展 ，近年来 ，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ，还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。

PAS染色法-制作

1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精 Carnoy固定液: 纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml

2. 染色液

1) 过碘酸酒清夜配法: 过碘

糖原染色

高碘酸-Schiff（Periodic acid Schiff, PAS）染色法 【试剂配制】

（1）高碘酸氧化液：

高碘酸 1g 蒸馏水 100ml。 （2）Schiff液：

碱性品红 1g 1N盐酸 20ml 亚硫酸氢钠 2g 活性炭 2g 蒸馏水 200ml

将1g碱性品红热溶于200ml煮沸水中，搅拌5分钟，冷至50℃时过滤，在滤液中加20ml 1当量盐酸，冷至25℃时加1g亚硫酸氢钠（sodiumbisulfite）。将该液存放在冷暗处14～24小时，然后加入2g活性炭，摇动1分钟过滤，滤后保存在0～4℃冷暗处，在室温下使用。

注意：如碱性品红为结晶，可预先研成粉末，使易溶解。亚硫酸氢钠须有浓厚的气味，否则效

糖原染色

高碘酸-Schiff（Periodic acid Schiff, PAS）染色法 【试剂配制】

（1）高碘酸氧化液：

高碘酸 1g 蒸馏水 100ml。 （2）Schiff液：

碱性品红 1g 1N盐酸 20ml 亚硫酸氢钠 2g 活性炭 2g 蒸馏水 200ml

将1g碱性品红热溶于200ml煮沸水中，搅拌5分钟，冷至50℃时过滤，在滤液中加20ml 1当量盐酸，冷至25℃时加1g亚硫酸氢钠（sodiumbisulfite）。将该液存放在冷暗处14～24小时，然后加入2g活性炭，摇动1分钟过滤，滤后保存在0～4℃冷暗处，在室温下使用。

注意：如碱性品红为结晶，可预先研成粉末，使易溶解。亚硫酸氢钠须有浓厚的气味，否则效

实验六 考马斯亮蓝染色法测定牛奶中蛋白质含量

一、目的要求

学习考马斯亮蓝染色法测定牛奶中蛋白质含量的方法和原理，标准曲线的绘制和回归方程的使用，分光光度计的使用。 二、基本原理

考马斯亮蓝所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力。通过疏水作用与蛋白质相结合，形成的蓝色蛋白质染料复合物，在595 am处有最大吸光度，在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质染料复合物在595 nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质含量的测定。 分光光度法的原理：通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 三、器材和试剂 1．器材

可见分光光度计，玻璃比色皿，试管 2．试剂

考马斯亮蓝G一250溶液：精确称取考马斯亮蓝G一250 100 mg，溶于50 mL 95％的乙醇，再加入100 mL 85％的磷酸，稀释定容至1 000 mL备用。

标准蛋白质溶液：精确称取牛血清白蛋白10 mg，加水溶解并定容至10 ml，冰冻，用时吸取上述溶液1 ml，用蒸馏水稀释至10 ml，即为100 μg/ml的标准蛋白质溶液。

样品的制作：准确吸取2 ml牛奶(市场上现买)加水至1000 ml制作样品。

四、操

细菌的染色方法

细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特殊染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法 )

1.革兰氏染色法:

1)器材:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,结晶紫染液, 革兰氏碘液, 0.4 %复红乙醇液,接种环,酒精灯,载玻片等。

2)方法:先制片,接着染色。

( l ) 结晶紫染液染色1分钟, 水冲洗; ( 2 ) 革兰氏碘液色1分钟; 水冲洗;

( 3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗,吸纸吸干后镜检。 2.抗酸染色法:

1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液,石炭酸复红,3 % 的盐酸酒精,碱性美兰染液,接种环,酒精灯,载玻片等。 2)先制片,接着染色。 ( l )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟, 滴加2一3滴覆盖菌膜染色5分钟,水冲洗;( 2 ) 3 % 的盐酸酒精脱色3 0秒钟,水冲洗;

( 3 )碱性美兰复染3 0秒钟,水冲洗, 吸水纸吸干后镜检. 3.芽抱染色法:

1)器材:破伤风杆菌厌氧培养物,5 % 孔雀绿水溶液,0.5 % 沙黄水溶液,载玻片,酒精灯等。 2)先制片,接着染色。

( l ) 加孔雀绿染液2一3滴于小试管中,并使其与菌液混合均匀,然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中,加热染色15分

高中数学竞赛讲座二试内容19

染色问题 （一）

一．基本方法

染色问题的本质是对集合的元素进行分类的问题，染色可以使分类更直观、更形象．

染色问题主要有两类：一类使借助染色方法解决问题；二类是问题的条件是用染色的方式给出的．常

见的染色问题有对区域的染色（包括对方格，三角形的染色），对线段的染色，对点的染色．常用思想方法是整体思想，抽屉原理，考虑极端情形，数学归纳法，构造思想等． 二．例题精选

（一）．k染色平面问题

将平面上的点用不超过k种颜色给每一个点染一种颜色，这样的平面叫做k染色平面．

１．坐标平面上若干个整点，将一些整点染红色，一些染蓝色，证明：总可以有一种染法使每行、每列两

种颜色点数之差不超过１．

R B R R B B R B B R B R B R R B R B R B

R B R B R

B R B R B

２．对于任意的a>0，二染色平面上必存在斜边长为a且内角分别为30?,60?,90?的三顶点同色的三角形．

B B

Ｒ a Ｒ

３．将平面上每一个点都以红、蓝两色之一染色，证明：存在这样的两个相似三角形，

B B 它们相似比为１９９５，而且每个三角形的三个顶点同色．

1

B B R RR

我来一一解答你的疑问：

1.“做大鼠皮下HE染色后可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况吗？” 答：HE 染色，即苏木精 — 伊红染色法，苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大，H&E染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因此，H&E染色，尤其在400倍放大的情况下，可以明显看到一个个以蓝色为主的点状的炎症细胞（主要是中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），而其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，呈蓝色或深蓝色。

2. “通过HE染色观察我的材料是否对皮下组织产生炎症反应，那么HE的结果包括哪些呢？”

答：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积

43、组织中铁质的显色法 44、组织中铜的显色法 罗丹明染色法

1、[试剂配制]：（1）DMAB-罗丹明贮备液：对二甲氨基苄罗丹明饱和于无水乙醇中，贮存液4℃保存。（2）DMAB-罗丹工作液（充分摇动）：DMAB-罗丹明贮备液3ml，蒸馏水47ml，使用前现配现用。 2、[染色步骤]：（1）切片脱蜡至蒸馏水。（2）用DMAB-罗丹明液60℃染色3小时（1小时后显微镜下检查）。（3）用蒸馏水冲洗。（4）对比染色（颜色要浅些）用苏木精染5秒。（5）盐酸乙醇分化。（6）流水冲洗5分钟。（7）脱水，透明，风骨。

3、[结 果]：铜沉积物-砖红色，核-蓝色，胆汁-绿色。 Timm's铜染色法

1、[试剂配制]：（1）液体A：5%硝酸银水溶液，液体B：对苯二酚2.0g，柠檬酸5.0g，蒸馏水100ml，液体可以贮存在4℃暗处一个月。 2、[染色步骤]：（1）石蜡切片脱蜡至水。（2）0.5%硫化铵5min （3）充分水洗。（4）用0.1N盐酸2-3min祛除铁和硫化锌液(15%三氯醋酸也可以使用)。（5）水洗。（6）切片置新鲜1份A液和5份B液过滤后使用，将硫化铜转化为硫化银3min就可以完成。（7）水洗。（8）脱水，透明，封固。

3、[结 果

细菌的染色方法

细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特殊染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法 )

1.革兰氏染色法:

1)器材:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,结晶紫染液, 革兰氏碘液, 0.4 %复红乙醇液,接种环,酒精灯,载玻片等。

2)方法:先制片,接着染色。

( l ) 结晶紫染液染色1分钟, 水冲洗; ( 2 ) 革兰氏碘液色1分钟; 水冲洗;

( 3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗,吸纸吸干后镜检。 2.抗酸染色法:

1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液,石炭酸复红,3 % 的盐酸酒精,碱性美兰染液,接种环,酒精灯,载玻片等。 2)先制片,接着染色。 ( l )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟, 滴加2一3滴覆盖菌膜染色5分钟,水冲洗;( 2 ) 3 % 的盐酸酒精脱色3 0秒钟,水冲洗;

( 3 )碱性美兰复染3 0秒钟,水冲洗, 吸水纸吸干后镜检. 3.芽抱染色法:

1)器材:破伤风杆菌厌氧培养物,5 % 孔雀绿水溶液,0.5 % 沙黄水溶液,载玻片,酒精灯等。 2)先制片,接着染色。

( l ) 加孔雀绿染液2一3滴于小试管中,并使其与菌液混合均匀,然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中,加热染色15分