微量肉汤二倍稀释法

微量肉汤稀释法测MIC

一、试验原理目的

细菌在96孔板MH培养基中生长，过段时间由于量大会产生白色沉淀，很容易区别有无菌落生长，将抑菌剂依次对倍稀释，加入菌悬液培养一段时间后，无沉淀的最后一个空即为MIC浓度。本试验微量样品即可测出最小抑菌浓度，且96孔板占地少，一板可做96个试验梯度，适用于大批量的检测试验，节约时间。 二、试验器材、化学试剂及菌种

96孔板、试管、5uL-50uL 微量移液器、100uL-1000uL微量移液器、以及配套的枪头、10mL离心管、麦氏比浊管、超净工作台、高压灭菌锅、鼓风干燥箱、生化培养箱、MH肉汤培养基、PBS缓冲液、无菌水。

菌种：溶血性链球菌、溶血性葡萄球菌、李斯特菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、吸附性绿脓杆菌、大肠杆菌 三、试验准备 1、培养基的配置

MH培养基42g，蒸馏水1000ml。灭菌后待用，若一次用不完可放入4℃冰箱中放置。使用前拿出放置室温即可。 2、工器具的灭菌

将配置好的MH培养基、PBS缓冲液、无菌水、配套枪头、离心管放入高压灭菌锅中灭菌，121℃杀菌25min。试管一起放入鼓风干燥箱中灭菌，170℃杀菌2h。96孔板在超洁净工作台上紫外杀菌30min以上。 2、抑菌剂的配置

微量肉汤稀释法测MIC

一、试验原理目的

细菌在96孔板MH培养基中生长，过段时间由于量大会产生白色沉淀，很容易区别有无菌落生长，将抑菌剂依次对倍稀释，加入菌悬液培养一段时间后，无沉淀的最后一个空即为MIC浓度。本试验微量样品即可测出最小抑菌浓度，且96孔板占地少，一板可做96个试验梯度，适用于大批量的检测试验，节约时间。 二、试验器材、化学试剂及菌种

96孔板、试管、5uL-50uL 微量移液器、100uL-1000uL微量移液器、以及配套的枪头、10mL离心管、麦氏比浊管、超净工作台、高压灭菌锅、鼓风干燥箱、生化培养箱、MH肉汤培养基、PBS缓冲液、无菌水。

菌种：溶血性链球菌、溶血性葡萄球菌、李斯特菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、吸附性绿脓杆菌、大肠杆菌 三、试验准备 1、培养基的配置

MH培养基42g，蒸馏水1000ml。灭菌后待用，若一次用不完可放入4℃冰箱中放置。使用前拿出放置室温即可。 2、工器具的灭菌

将配置好的MH培养基、PBS缓冲液、无菌水、配套枪头、离心管放入高压灭菌锅中灭菌，121℃杀菌25min。试管一起放入鼓风干燥箱中灭菌，170℃杀菌2h。96孔板在超洁净工作台上紫外杀菌30min以上。 2、抑菌剂的配置

微量肉汤稀释法药敏检测

以下实验方法主要适用于需氧菌及部分兼性厌氧菌（以大肠杆菌为例），微需养菌和厌氧菌的培养条件亟待摸索。本实验方法，虽然操作较为繁琐，但是能够确切的得到细菌临床分离株对某种抗菌药物的MIC值，以此作为临床用药指导的部分依据。 菌悬液的制备：

① 菌液培养：取待测菌保存液10μL加入1mLMH肉汤（可根据实际需要做调整），置37℃温箱过夜静止培养12小时左右；

② OD600值测定：利用紫外分光光度仪测定OD值，MH肉汤调整菌液浓度使其OD600值落在0.08-0.1之间，此时菌液浓度约10cfu/mL（大约需将培养菌液稀释7-10倍左右）； ③ 上样菌液稀释：将待测菌液在步骤②所得稀释倍数的基础上再稀释1000倍，此时菌液浓度约10cfu/mL（即7000-10,000倍），此时的菌液即为上样菌悬液； 注意：测定OD值所需菌液应在超净台中无菌取样，剩余菌液还需实验。 抗菌药物的制备：

抗生素母液配制：参照NCCLS标准上抗菌药物相应的R（抗药）值制备待测抗菌药物（母液浓度要远远大于R值，至少160倍），分装于无菌小管置-20℃备用（附件一.常用抗生素溶液的配制）。

5

8

注意：无菌操作，抗菌药物的稀释液均需灭菌，溶解后

3．1.3 二倍角的正弦、余弦、正切公式

（第一课时）

一．学习目标

1.知识与技能

（1）能够由和角公式而导出倍角公式；

（2）能较熟练地运用公式进行化简、求值、证明，增强观察、运用数学知识和逻辑推理能力；

2.过程与方法

通过推导倍角公式，领会从一般转化为特殊的数学思想，体会公式所蕴涵的结构美，激发学习数学和学好数学的兴趣；通过练习、例题解析，总结方法，进一步理解和巩固所学知识.

3.情感态度价值观

通过本节的学习，使同学们对三角函数各个公式之间有一个全新的认识；增强学生灵活运用数学知识、逻辑推理能力和综合分析能力，提高逆用、灵活思维的能力.

二．学习重、难点

重点：倍角公式的应用.

难点：倍角公式的推导、变式应用.

三 .学法：

(1)自主、探究性学习：学生自己由和角公式导出倍角公式，领会从一般化为特殊的数学思想，通过练习、对改、纠错，体会公式所蕴涵的结构美，激发学好数学的兴趣.

四.学习预设

【探究新知】

1.复习两角和与差的正弦、余弦、正切公式：用一道练习题检测并引出新课.

2.提问课本132页探究的问题及其结果，得出三个二倍角公式：

（１）

（２）

1

1.复习本节课练习、例题，研究二倍角的正余弦公式有哪些常用变形；

2.研究二倍角的正切公式成立的条件.

2

3．1.3

3.1.3二倍角的正弦、余弦、正切公式

一、知识点 公式 1、 二倍角公式

2? sin?2s?in2222c? o s cos2??cos??sin??2cos??1?1?2sin?

2? tan?2ta?n

1?ta2n?2、 公式拓展

cos2??sin2?1?tan2??万能公式：cos2??cos??sin??

cos2??sin2?1?tan2?22 sin2??2sin?cos?? tan2??2sin?cos?2tan??

sin2??cos2?1?tan2?2tan?

1?tan2?22升幂公式：1?cos2??cos?，1?cos2??2sin? 1?cos??2cos2?2，1?cos??2sin2?2

1?sin2??sin2??cos2??2sin?cos??(sin??cos?)2 降幂公式：cos??21?cos2?1?cos2?2，sin?? 222 (sin??cos?)?1?sin2? 二、例题

（一） 利用倍角公式求值的问题 例1、利用倍角公式求下列各式的值

2tan1500cos （2）1?2sin

二倍角的正弦、余弦、正切公式教学设计

3.1.3 二倍角的正弦、余弦、正切公式片段教学设计

（人教A版本必修4 第三章第一节）

教材的地位及作用:

1.本节内容是三角函数中最基础的知识之一。它是在学生学过三角函数的诱导公式和两角和与差的正弦、余弦、正切公式之后的又一重要公式。

2.本节在本章中处于承上启下的地位。

3.三角函数是高考的热点问题，而二倍角的正弦、余弦、正切公式是三角函数求值、化简及证明必备的基础知识点之一。它为研究三角函数图象及性质等问题提供了又一必备的要素。

本节教材的作用则主要是可以培养学生逻辑思维能力和化归的重要数学思想方法，使学生体验的数学知识发生发展（形成）的过程，增进学生对数学知识的理解，增强学生学数学的兴趣和信心。

教学目标：

1、知识目标：以两角和正弦、余弦和正切公式为基础，推导二倍角正弦、余弦和正切公

式，掌握二倍角公式，运用二倍角公式解决有关问题。

2、能力目标：培养学生观察分析问题的能力，寻找数学规律的能力，同时注意渗透由一般

到特殊的化归的数学思想及问题转化的数学思想。

3、德育目标：培养学生认真参与、积极交流的主体意识，锻炼学生善于发现问题的规律和

及时解决问题的态度。

教学重点：二倍角公式推导及其应用.

教学难点：如何灵活应用和、差

3.1.3二倍角的正弦、余弦、正切公式

一、知识点 公式 1、 二倍角公式

2? sin?2s?in2222c? o s cos2??cos??sin??2cos??1?1?2sin?

2? tan?2ta?n

1?ta2n?2、 公式拓展

cos2??sin2?1?tan2??万能公式：cos2??cos??sin??

cos2??sin2?1?tan2?22 sin2??2sin?cos?? tan2??2sin?cos?2tan??

sin2??cos2?1?tan2?2tan?

1?tan2?22升幂公式：1?cos2??cos?，1?cos2??2sin? 1?cos??2cos2?2，1?cos??2sin2?2

1?sin2??sin2??cos2??2sin?cos??(sin??cos?)2 降幂公式：cos??21?cos2?1?cos2?2，sin?? 222 (sin??cos?)?1?sin2? 二、例题

（一） 利用倍角公式求值的问题 例1、利用倍角公式求下列各式的值

2tan1500cos （2）1?2sin

3.1.3 二倍角的正弦、余弦、正切公式

学习目标 1.会从两角和的正弦、余弦、正切公式导出二倍角的正弦、余弦、正切公式(重点).2.能熟练运用二倍角的公式进行简单的恒等变换，并能灵活地将公式变形运用(重点、难点)．

预习教材P132－134完成下面问题： 知识点 二倍角的正弦、余弦、正切公式 三角函数 正弦 余弦 sin 2α＝2sin_αcos_α cos 2α＝cos2α－sin2α ＝2cosα－1 ＝1－2sinα 2tan αtan 2α＝ 1－tan2α22公式 简记 S2α C2α T2α 正切 【预习评价】 (正确的打“√”，错误的打“×”) αα

(1)sin α＝2sincos.( )

22

13

(2)cos2α＝(1＋cos 2α)，cos 3α＝1－2sin2α.( )

22π

＝tan.( ) π2

1－tan24π2tan

4

(3)

αα

提示 (1)√，在公式sin 2α＝2sin αcos α中，以α代换2α可得sin α＝2sincos．

22(2)√，由cos 2α＝2cos2α－1和cos 2α＝1－2sin2α可知其正确． π

(3)×，公式中所含各角要使三角函数有意义，而tan无意义．

2

题型一 二倍

3.1.3二倍角的正弦、余 弦、正切公式高一数学 必修 4 第三章 三角恒等变换

一、复习:两角和的正弦、余弦、正切公式:sin sin cos cos sin

cos cos cos sin sin tan tan tan 1 tan tan 若上述公式中 ，

你能否对它进行变形？

R 二 sin 2 2 sin cos 倍 R cos 2 cos 2 sin 2 角 公 2 tan k k Z k , tan 2 ,且 2 式： 2 2 4 1 tan

对于 C 2 能否有其它表示形式？

cos 2 2 cos 12

cos 2 1 2 sin 2

公式中的角是否为任意角？

注意：①二倍角公式的作用在于用单角的三角函数来表达二 倍角的三角函数，它适用于二倍角与单角的三角函数 之间的互化问题。 ②二倍角公式不仅限于2α是α的二倍的形式，其它如 4α是2α的两倍，α/2是α/4的两倍,3α是3α/2的两倍，

3.1.3二倍角的正弦、余 弦、正切公式高一数学 必修 4 第三章 三角恒等变换

一、复习:两角和的正弦、余弦、正切公式:sin sin cos cos sin

cos cos cos sin sin tan tan tan 1 tan tan 若上述公式中 ，

你能否对它进行变形？

R 二 sin 2 2 sin cos 倍 R cos 2 cos 2 sin 2 角 公 2 tan k k Z k , tan 2 ,且 2 式： 2 2 4 1 tan

对于 C 2 能否有其它表示形式？

cos 2 2 cos 12

cos 2 1 2 sin 2

公式中的角是否为任意角？

注意：①二倍角公式的作用在于用单角的三角函数来表达二 倍角的三角函数，它适用于二倍角与单角的三角函数 之间的互化问题。 ②二倍角公式不仅限于2α是α的二倍的形式，其它如 4α是2α的两倍，α/2是α/4的两倍,3α是3α/2的两倍，