免疫实验问题

免疫层析实验

1．原理

金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条 上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被 富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常 迅速。

DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。

因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动

二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条

四，多余的金条抗体继

实验一、免疫细胞的形态观察

一、实验目的

1、掌握微量采血及血涂片的制作方法。 2、在光学显微镜下观察免疫细胞。 二、实验原理

血涂片是临床化验中最常规的技术，也是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏（Wright）染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。 三、实验器材

1、器材：医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片。

2、试剂：瑞氏（Wright）染液，瑞特氏染料0.1克溶于60mL甲醇中，过滤。贮藏褐色瓶中备用。（配制时，要先将瑞特氏染料置研钵内边研磨边滴加甲醇，使染料溶解的更好。） 四、实验步骤 1、采血

采血前用75%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）。

2、涂片

挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以30~40度为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推

犬疫苗接种临床常见问题1234

1.宠物疫苗注射史不清，

重新实施一套完整的免疫方案是否可行？比特犬,斗狗,猛犬,猛犬俱乐部,中国比特犬俱乐部,比特俱乐部3 l6 f) m9 P( s7 x7

犬疫苗接种临床常见问题（一）j5 e. P

一般来说健康犬，只要2次接种间隔时间在2周以上，连续接种5~6次都不会损害动物的健康。比特犬俱乐部% \\' R6 `/ c1 E

大家都知道接种疫苗可以保护动物预防疾病，但同时也可能使动物处于一定的风险中，虽然这些不利情况发生率极低，如疫苗本身的一些接种反映（毒性反应）过敏反应，引起免疫缺陷动物疾病，反复接种疫苗有可能导致免疫麻痹等等。因此对于具体动物大家需要综合考虑接种疫苗的利益与风险。

* F9 @- I, |; X8 r ^ k7 H' M比特犬,斗狗,猛犬,猛犬俱乐部,中国比特犬俱乐部,比特俱乐部

2.含不同抗原的2头份疫苗（非同一联苗的不同组成部分）可否同时给狗注射？- e2 L' c! A2 w* W( X$ c4 P( x* f

可以

( [8 S; I# \\# m8 |. b/ ]) F比特犬,斗狗,猛犬,猛犬俱乐部,中国比特犬俱乐部,比特俱乐部 实际上临床我们常见狗在不同的免疫阶段

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大家都知道接种疫苗可以保护动物预防疾病，但同时也可能使动物处于一定的风险中，虽然这些不利情况发生率极低，如疫苗本身的一些接种反映（毒性反应）过敏反应，引起免疫缺陷动物疾病，反复接种疫苗有可能导致免疫麻痹等等。因此对于具体动物大家需要综合考虑接种疫苗的利益与风险。

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细胞爬片免疫荧光实验步骤

第一天：

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

第二天：

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

细胞免疫荧光步骤

1.在24孔板里加500微升培养基，放爬片，接种细胞（做实验以30-50%汇合度较好。10000-30000左右

2.给药处理24h

石蜡切片免疫组化实验步骤

石蜡切片步骤按照晓峰整理的步骤进行（From 徐晓峰、朱老师的“石蜡切片”方案）： 1）材料的准备

在本实验室条件下推荐使用FAA（50% ethanol, 5% acetic acid, 3.7% 甲醛）固定材料。

FAA固定液（100ml），室温保存 ：

无水乙醇 50ml 冰醋酸 5ml 37%甲醛 10ml 水 35ml

第一天：组织固定

用FAA固定，详见“石蜡切片”protocol。 第二天：脱水

Solution 50% ethanol 60% ethanol *70% ethanol time 60 minutes 60 minutes 60 minutes number of changes one one one 以上所有步骤中每换好一步乙醇均置于4℃冰箱等待，并不时轻摇。 * 组织可在70% ethanol 4℃可存放几个月

第三天：进一步脱水和浸蜡

1

以下所有步骤在4℃进行并不时轻摇

Solution time number of changes 85% eth

免疫学实验指导

生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用

冯玉萍

[分组]：4人/组 ，实验用动物、器材以每组需要量设计

[班级] 2006生物工程 、生物技术 [学生人数]：65人/58人 。 分16组/15组 [时间] 2008年3月—2008年7月 两周一次4学时。

目 录

实验一、免疫学实验动物的一般操作

实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察

实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法 实验四、淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成试验 实验五、IgG的分离和纯化

实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定) 实验七、环状沉淀试验 实验八、琼脂扩散试验（单向） 实验九、巨噬细胞吞噬功能试验 实验十、白细胞吞噬试验

1

实验一、免疫学实验动物的一般操作

[实验原理]

实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。 [目的要求]

1、实验材料的准备（棉球、注射器的准备与消毒）（演示）

2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。[自学] 3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。 4、练

动物免疫学实验指导

第二版

徐春厚 谢为天 雍艳红 编 动物医学 生物技术专业用

广东海洋大学教材科出版 二00七年二月二十八日

目 录

实验一实验二实验三实验四实验五实验六实验七实验八实验九实验十

凝集试验?????????????????????1 沉淀试验?????????????????????4 溶血试验?????????????????????8 病毒的血凝及血凝抑制试验 ????????????10 玫瑰花环试验 ?????????????????13 玫瑰花环试验 ?????????????????15 玫瑰花环试验?????????????????17 酶联免疫吸附试验 ????????????????18 荧光抗体技术 ??????????????????20 多克隆抗体（免疫血清）的制备 ??????????22

1

E- EA EAC 实验一 凝集试验

颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。参与凝集反应的抗原称为凝集原（

国家扩大免疫规划疫苗免疫程序及使用的有关问题

一：疫苗的分类

? 根据《疫苗流通和预防接种管理条例》，疫苗分为两类。

– 第一类疫苗：是指政府免费向公民提供，公民应当依照政府的规

定受种的疫苗：

? 包括国家免疫规划确定的疫苗

? 省级人民政府在执行国家免疫规划时增加的疫苗

? 以及县级以上人民政府或者其卫生行政部门组织的应急接种或者群体性预防接种所使用的疫苗

– 第二类疫苗：是指由公民自费并且自愿受种的其他疫苗。

二：扩大国家免疫规划疫苗免疫程序 年（月）龄 出16-1818-24疫苗 2月 3月 4月 5月 6月 8月 1岁 3岁 4岁 6岁 生 月 月 月 HepB 1 2 3 BCG 1 1 2 3 4 OPV DPT DT MV 1 2 3 1

Western blot实验报告

摘要：目的：学习并掌握western blot分离蛋白及观察方法 方法：western blot 结果：见后文

结论：western blot能很好地分离蛋白 关键词：western blot、分离、小鼠组织、蛋白

Western blot test report

Abstract: objective: Learn and master the western blot protein isolated and observation method Methods: western blot：,sds-page and electric transfer Results: see below

Key words: Western blot、separate、mouse tissues、protein

前言:免疫印迹又称Western印迹(Western blotting)，与DNA的Southern印迹技术

相对应，两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为NC膜)，然后用探针检测特异性组分。不同的是，Western blotting所检测的是抗原类蛋白质成分，所用的探针是抗体，它与附着于固相