细胞色素c的提取制备与含量测定

实验一、细胞色素C的制备和测定

摘要：细胞色素C为含铁卟啉的结合蛋白质，包括多种能够传递电子的含铁蛋

白质。广泛存在于各种动植物组织和微生物中。它是呼吸链中极重要的电子传递体。细胞色素C是一种细胞呼吸激活剂。在临床上可以纠正由于细胞呼吸障碍引起的一系列缺氧症状，使其物质代谢、细胞呼吸恢复正常，病情得到缓解或痊愈。在自然界中，细胞色素C存在于一切生物细胞里，其含量与组织的活动强度成正比。本实验以新鲜牛心为材料提取、制备和纯化细胞色素C，得到其粗品溶液，并进行含量测定。

关键词：细胞色素C 提取 制备 纯化 含量测定 1、原理：

细胞色素C包括多种能够传递电子的含铁蛋白质总称。广泛存在于各种动植物组织和微生物中。它是呼吸链中极重要的电子传递体，细胞色素C（cytochrome c，CytC）只是细胞色素的一种。它在呼吸链上位于细胞色素还原酶和细胞色素氧化酶之间。线粒体中的细胞色素绝大部分与内膜紧密结合，仅有细胞色素C结合轻松，较易被分离纯化。

细胞色素C为含铁卟啉的结合蛋白质，每个细胞色素C分子含有一个血红素和一条多肽链。分子质量约为13000，蛋白质部分由104个左右的氨基酸残基组成，其中赖氨酸含量较高，等电点10.2-10.8

实验报告

实验三 酵母RNA的提取及含量测定

一、实验目的与要求

1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。

2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法，

3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。

二、实验原理

由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。

酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。

核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（-C=C一

浙江理工大学学位论文原创性声明

本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师 的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外，本论文 不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰 写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。

学位论文作者签名： 曰期：年月曰

國||關?|||

Y2051745

浙江理工大学学位论文版权使用授权书

学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权浙江理工 大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或扫描等复制手段

保密，在

保存和汇编本学位论文。

年解密后使用本版本学位论文属于

权书。

不保密

学位论文作者签名: 碎 it 日期3月

IAfQ

指导教师签名： 日期:>0|辟月

日

理

4义凌

硕士学位论文

半夏蛋白的提取分离、含量测定及对Hela细胞的 作

用研究

作者姓名

冯瑞娟

学科(专业）生物化学与分子生物学 指导老师 所在学院 提交日期

檢涛副教授 生命科学学院 年

中国杭州

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半夏蛋白的提取分离、含量测定及对Hela细胞的 作

用研究

作者姓名

冯瑞娟

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檢涛副教授 生命科学学院 年

中国杭州

叶绿体色素的提取、分离、定量及理化性质的鉴定

【实验目的】

1.掌握提取和分离叶绿体色素的方法； 2.掌握测定叶绿体色素含量的方法；

3.熟悉叶绿体色素的理化性质及吸光特性；

4.了解植物叶绿体色素组成及其与生境的相关性。 【实验原理】

1.叶绿体色素是植物进行光合作用的重要物质，叶绿体色素包含绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。提取液可用色层分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。

2.叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开

图一：叶绿素的结构

3.叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。

碱式碳酸铜的制备及铜含量的测定

一、 实验目的

1．了解碱式碳酸铜的制备原理和方法；

2．通过碱式碳酸铜Cu2(OH)2CO3制备条件的探求和生成物颜色、状态的分析，研究反应物的合理配料比并确定制备反应适合的温度条件。 3．练习碱式碳酸铜中铜含量的测定方法。 二、 实验原理

碱式碳酸铜为天然孔雀石的主要成分，呈暗绿色或淡蓝绿色（由于所含成分Cu（OH）2和CuCO3的比例不同，而颜色不同），加热至200℃即分解，在水中的溶解度很小，新制备的试样在沸水中很易分解。

为了适于碱式碳酸铜的生成和提取，根据碱式碳酸铜的性质和铜盐的性质，选用硫酸铜和碳酸钠溶液。其反应方程式如下：

2CuSO4+2NaCO3+H2O=Cu2（OH）2CO3+CO2+2Na2SO4

反应过程中，反应温度、反应物浓度及反应物配比对反应均有影响。 三、 主要试剂与仪器

试剂：CuSO4（s，分析纯）Na2CO3（s，分析纯），NH3H2O-NH4Cl缓冲溶液，PAN指示剂。

仪器：恒温水浴锅，分析天平，托盘天平，烧杯（250ml，100ml），容量瓶（250ml） ，试管，布氏漏斗，吸滤瓶，烘箱，滴定管，锥形瓶。 四、 实验步骤

1．反应物溶液配制

配制0.5mol/

《绿叶中色素的提取和分离》教学设计一、教材分析 这节内容承接前面捕获光能的色素和结构的内容，紧接着安排实验：色素的 提取与分离， 既突出了生物实验及其实验基本技能在中学生物教学中的基础性地 位，又很好地加深了学生对上节知识的理解和升华，真是恰到好处。本实验按常 规教学它是个验证实验，验证叶绿体中色素的种类、含量及颜色。为了适应新课 改的理念，我们将此实验改成探究性实验，对很多问题进行了对比和扩展。 二、学情分析 经过初高中化学和生物的学习，学生已具有一定自学、观察、质疑能力，了解了 进行探究性学习的一些基本方法，在课前我布置了对本实验的预习，学生已了解 了基本情况。 三、教学目标 知识目标：掌握色素提取和分离的原理，了解叶绿体中的色素组成、颜色。 能力目标：掌握色素的提取与分离的基本操作方法，培养学生积极思考与创 新能力，提高学生观察、分析和解决问题的能力。 情感态度价值观目标：通过实验探究，发展学生学习生物的兴趣，激发学生 创造性思维。 培养学生严谨的科学态度， 学会根据实验的现象和结果， 进行分析， 推出结论。形成善于交流、合作、反思、评价的学习品质。 四、教学重、难点 重点：色素提取与分离的操作。 难点：色素提取与分离操作的具体步骤和注

《绿叶中色素的提取和分离》教学设计一、教材分析 这节内容承接前面捕获光能的色素和结构的内容，紧接着安排实验：色素的 提取与分离， 既突出了生物实验及其实验基本技能在中学生物教学中的基础性地 位，又很好地加深了学生对上节知识的理解和升华，真是恰到好处。本实验按常 规教学它是个验证实验，验证叶绿体中色素的种类、含量及颜色。为了适应新课 改的理念，我们将此实验改成探究性实验，对很多问题进行了对比和扩展。 二、学情分析 经过初高中化学和生物的学习，学生已具有一定自学、观察、质疑能力，了解了 进行探究性学习的一些基本方法，在课前我布置了对本实验的预习，学生已了解 了基本情况。 三、教学目标 知识目标：掌握色素提取和分离的原理，了解叶绿体中的色素组成、颜色。 能力目标：掌握色素的提取与分离的基本操作方法，培养学生积极思考与创 新能力，提高学生观察、分析和解决问题的能力。 情感态度价值观目标：通过实验探究，发展学生学习生物的兴趣，激发学生 创造性思维。 培养学生严谨的科学态度， 学会根据实验的现象和结果， 进行分析， 推出结论。形成善于交流、合作、反思、评价的学习品质。 四、教学重、难点 重点：色素提取与分离的操作。 难点：色素提取与分离操作的具体步骤和注

橙子中维生素C含量的测定

——直接碘量法 吉林大学化学学院

2013.6.7

前言

维生素C ，无色晶体，分子式C6H8O6，分子量为176.13，纯品为白色结晶或结晶性粉末，无臭、味酸，久置颜色渐变微黄，水溶液呈酸性，易溶于水中，能溶于乙醇中，而不溶于氯仿或乙醚中，熔点为190~192℃，熔融时同时分解。 维生素C又名抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素。它与人体的多种代谢有关，可降低毛细血管通透性、降低血脂、增强机体的抵抗能力，并有一定的解毒功能和抗组胺作用。人体不能合成及贮存维生素C，故必需从外界摄取。维生素C在自然界分布很广，主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。不同的水果、蔬菜中维生素C 的含量不同。测定果蔬中维生素的含量对评定其营养具有重要的意义。对于其含量测定，本实验采用直接碘量法，该方法简便、快速、较为准确。其化学式为C6H8O6，相对分子质量为176.1。由于分子中的烯二醇基

具有还原性，能被I2定量地氧化成二酮基。

由于抗坏血酸具有较强的还原性，在空气中极易被氧化而变成黄色，尤其是在碱性介质中更甚，测定时加入HAc使溶液呈弱酸性，减少维生素C的副反应。 直接碘量法：加入淀粉做指示剂，然后用标定好的已知浓度的I2与抗坏血酸反应

《叶绿体色素的提取与分离》教学设计

一、教学设计思路

本实验教学设计内容是中图版高中《生物》（必修1分子与细胞）第三单元《细胞的新陈代谢》第2章《细胞能量的来源与转变》第三节《光能的捕获和利用》一节的内容。高中新课程标准对本节内容的要求是：说明光合作用以及对它的认识过程，属于理解水平的目标要求。本节课在内容上先阐述光合作用的发现历史，通过经典实验逐步让学生了解光合作用的过程，是学生对于光合作用的实质有了一个比较具体的认识，然后通过光合作用的结构基础——叶绿体的学习使学生对光合作用的内涵有了更深入的了解，接下来通过“叶绿体色素的提取与分离实验”学生感知叶绿体结构与光合作用相适应的的特点，明白只有色素才能吸收、传递和转化光能，知道了光合色素在光合作用中的重要作用，最后光合作用的过程便呼之欲出，这些本来很抽象的内容就这样个个击破，学生很容易掌握和理解。

完成光能的捕获的光合作用过程作为自然界最基本的物质代谢和能量代谢是本章乃至本模块的重点内容之一，在高中生物学知识系统中占据着重要的地位，本实验教学在帮助学生理解光合作用的过程中起到关键的作用，同时对于锻炼学生的实验操作技能和培养学生严谨的科学态度有着非常大的帮助。该实验属于验证性实验内容，教学核