动物细胞工程知识点

动物细胞工程 12月20日

动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养

1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 3、过程 注意：

①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 ②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。

③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答：

⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?

答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 ⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么?

答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。

⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞

实验时间 4月11日 4月18日 4月25日 实验内容 实验一 培养用液的配制、除菌与分装 实验二 细胞的传代培养 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（1-5组）401 实验四 染色体制备（6-10组）301 5月2日 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（6-10组）401 实验四 染色体制备（1-5组）301 5月9日 实验五 细胞的复苏与冻存

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实验一 培养用液的配制、除菌与分装

【实验目的】

1. 掌握常见培养用液的配制方法。 2. 掌握常用的灭菌方法。 3. 了解每种培养用液的作用。

【实验原理】

常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和 EDTA。培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。

细胞

动物细胞工程课堂笔记

动物细胞工程常用的技术

? 动物细胞培养：是其他动物细胞工程技术的基础。 ? 动物细胞融合 ? 动物细胞核移植

? 生产单克隆抗体等

? 一.动物细胞培养

(一)概念

（二）、原理：

? 如何进行细胞培养?

（三）相关概念

1.细胞贴壁：培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.

2.细胞接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。

3.原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内

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的细胞称为原代细胞培养。

4.传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

5.细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 6.细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

7.细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。

动物细胞工程复习题

绪论

1、动物细胞工程技术应用的两面性。 2、动物细胞工程包含哪些主要研究内容？

实验室设置及无菌操作技术

1、你认为动物细胞培养无菌操作的要点有哪些？ 2、动物细胞培养液的主要成分有哪些？

3、常用的培养动物细胞的培养基的种类？目前实验室中中常用的培养基是什么？

4、什么是天然培养基、合成培养基和无血清培养基？ 5、目前常用的合成培养基有哪些？有哪些优点？

6、什么是无血清培养基?无血清培养基成分有哪些？无血清培养在实验研究中有什么特殊意义？

7、BSS有哪些功能？常用的BSS有哪些？ 动物细胞组织培养 名词解释： 原代培养

传代培养 接触抑制 密度抑制 细胞克隆 细胞系 细胞株

动物细胞固定化培养 微载体培养技术 大孔载体培养技术 有限细胞系和无限细胞系 问答题：

1、体外培养细胞有哪些类型及各自特点？

2、细胞系的生长过程包括哪些主要阶段？每一生长阶段各有什么特征？ 3、每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有什么特点？ 4、动物细胞原代培养的方法？举例说明培养的基本过程。 5、贴壁细胞传代时采用何种方法，其技术关键是什么？ 6、为保证好的冻存复苏效果，需要考虑那些问

《细胞工程》 知识点总结

一、细胞工程（Cell Engineering）：在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良，使其生产出人类所需要的产品。包括：细胞培养、细胞融合、细胞器移植、核质移植、染色体移植、转基因等产品：生物的组织、器官、个体；抗体、多肽药物、蛋白质、酶； 天然药物、色素、香精；等 二、生物工程包括：发酵工程、酶工程、细胞工程、基因工程、蛋白质工程。 三、1996年Dolly羊的克隆是通过核移植技术，最后在体内生长、分化、发育而成的。

四、植物组织培养：在人工培养基上无菌培养整株植物或植物的器官、组织、细胞或原生质体。又称为无菌培养（aseptic culture）、离体培养（in vitro culture）。 五、植物组织培养的类型：

1、植株培养（Plant Culture）：在容器（玻璃瓶、透明塑料瓶等）中无菌培养完整的植株。

植株来源：由种子无菌萌发而来；通过植物器官、组织、细胞再生而来。在快速繁殖中，后期的成苗和壮苗阶段属于植株培养。（一般时间较短）

2、胚培养（Embryo Culture）：无菌培养植物的成熟胚或未成熟胚，使其形成正常的植株。

1促进胚的提早萌发，缩短育苗时间； 目的：○

2克服远

二、细胞工程

（一）植物细胞工程

1.理论基础（原理）：细胞全能性 2.植物组织培养技术（b）

（1）过程：离体的植物器官、组织或细胞 ―――→愈伤组织 ―――→试管苗 ――→植物体

（2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。 A 植物繁殖

微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖

作物脱毒：采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有）

人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经人工薄膜包装得到的种子。优点：完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输 B 作物新品种培育 单倍体育种：

a过程：植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；对花粉进行花药离体培养（技术是植物组织培养）；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行秋水仙素处理；得到了正常的纯合二倍体植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。 b 优点：明显缩短育种年限

C 突变体利用：在组织培养中会出现突变体，通过从有用的突变体中选育出新品种（如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体）

D 细胞产物的生产：通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养，从

第二章 细胞工程

第二节 动物细胞工程的应用（3）

【课标要求】

1．简述动物的细胞培养与体细胞克隆 2．举例说出细胞融合与单克隆抗体 【教学目标】

1.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2.举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。 【教学过程】

知识点三、细胞融合和单克隆抗体 （一）动物细胞融合

1、概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指在一定的条件下将 。融合后形成的具有原来 遗传信息的单核细胞，称为 。科学研究表明，不同类型的动物细胞之间能进行融合形成杂种细胞，如鼠—鸡、鼠—猴杂种细胞等 【思考】动物细胞融合的原理？

2、动物细胞融合的方法：主要有 （如 ）、 （如 ）和 （如 ）。目前，应用 进行细胞融合的效率较高，且对细胞伤害小，易操作、控制和观察，因此在实验室被广泛使用。在细胞融合后，还需对融合细胞进行筛选和检测。 3、细胞融合技术的优点：_______________

哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核

移植。

第一章 绪论课后习题答案

1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？

答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术 5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程

细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。

2. 追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。

第二章 细胞培养

1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？

答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。离体细胞 必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。有机体的绝大部分细胞必须贴附在某 一固相表面才能生存和生长。动物细胞培养中，大多数细胞

第二章 细胞工程

第二节 动物细胞工程的应用（1）

【课标要求】

1．简述动物的细胞培养与体细胞克隆 2．举例说出细胞融合与单克隆抗体 【教学目标】

1．简述动物细胞培养的过程、条件。（知识目标） 2．举例说出动物细胞培养的应用。（知识目标） 3．比较植物组织培养与动物细胞培养。（能力目标） 【教学过程】

总述：动物细胞工程常用的技术手段有：____________________、_______________________、 _____________________、_________________________等。其中_____________________是其他动物工程技术的基础。如：如何解决大面积烧伤病人自体健康肤源有限的问题？解决途径：_________________________________。 知识点一、动物细胞与组织培养 【什么是动物细胞与组织培养？】

（一）概念：动物细胞与组织培养（animal cell culture）就是

第44课时 动物细胞工程

一、选择题

1.(2015江苏扬州期末,24,3分)下列关于植物组织培养和动物细胞培养的比较,错误的是(多选)( ) A.都依据细胞的全能性原理 B.培养基中都需要添加琼脂 C.培养基中都需要添加有机碳源 D.都需要用CO2培养箱培养

2.(2015江苏南通中学模拟,18,2分)下列是动物细胞工程的有关描述,错误的是( ) A.动物细胞培养的培养液成分含有动物血清

B.常用动物胚胎细胞作为动物细胞培养的原料,原因是胚胎细胞全能性较高 C.不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶分散培养的细胞

D.细胞系是能够传到50代以后的细胞,其遗传物质发生了改变

3.(2016江苏阜宁中学调研二,16,2分)某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性,准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列叙述中正确的是( ) A.制备肝细胞悬液时,可用胃蛋白酶处理肝组织块 B.恒温培养箱中的CO2浓度维持在5%左右,以促进细胞呼吸 C.为了保证细胞培养所需的无毒环境,需大量添加各种抗生素 D.本实验应设置对照实验,以检测药物对甲、乙的毒性大小

4.(2015江苏盐城中学模拟,17,2分)把成年三倍体鲫鱼的肾脏细胞核移植到