生化实验方法比色法跟肌氨酸氧化酶法哪个标准
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食品分析实验硫氰酸钾比色法测定食品中铁
食品分析实验硫氰酸钾比色法测定食品中铁
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2 实验十一 硫氰酸钾比色法测定食品中铁
一、实验内容
使用可见分光光度计测定样品中铁的含量。
二、实验目的与要求
1、学习掌握分光光度计测定的原理及操作技术。
2、掌握绘制工作曲线法进行定量测定。
三、实验原理
硫氰酸钾比色法:在酸性条件下,三价铁离子与硫氰酸钾作用,生成血红色的硫氰酸铁络合物,溶液颜色深浅与铁离子浓度成正比,故可以比色测定。
反应式如下:
Fe 2(SO 4)3 + 6 KCNS 2 Fe(CNS)3 + 3 K 2SO 4
四、试剂
(1)2% KMnO 4溶液
(2)20% KCNS 溶液
(3)2% K 2S 2O 7溶液
(4)浓H 2SO 4
(5)铁标准使用液:准确称取0.4979g 硫酸亚铁(FeSO 4 · 7H 2O )溶于100 mL
水中,加入5 mL 浓硫酸微热,溶解即滴加2 %高锰酸钾溶液,至最后一滴红色不褪色为止,用水定容至1000 mL ,摇匀,得标准贮备液,此液每毫升含Fe 3+100μg。取铁标准贮备液10 mL 于100 mL 容量瓶中,加水至刻度,混匀,得标准使用液,此液每mL 含Fe 3+10μg。
五、仪器
可见分光光度计
六、实验步骤
1、样品处
食品中铁的测定(邻菲罗啉比色法)实验报告
食品中铁的测定(邻菲罗啉比色法)
1 目的
熟练掌握直接灰化法的原理,操作及注意事项。以铁的测定为代表,掌握
灰化法作为矿物质测定的前处理方法的应用;掌握消化法的原理,操作及注意事项。以铁的测定为代表,掌握消化法作为矿物质测定的前处理方法的应用;掌握邻菲罗啉比色法测铁的原理、操作及注意事项。
2 原理
2.1 灰化
食品经高温灼烧至恒重,残留物称重称为灰分;
2.2 消化
样品与浓硫酸和催化剂一同加热,可使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化成二氧化碳和水逸出,食品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵;
2.3 比色法测铁
样品经灰化(或消化),用抗坏血酸将三价铁还原为二价铁,二价铁与邻菲罗啉反应生成红色络合物,在520nm下测其光吸收强度A,根据A值在标准曲线上查对应二价铁浓度得C样,再计算样品中铁的含量。
3 试剂
硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、邻菲罗啉、铁标准溶液(C=10ug/mL)。
4 仪器
4.1 灰化:瓷坩埚、灰化炉、干燥器、精密天平; 4.2 消化:定氮瓶、铁架台、电炉;
4.3 比色法测铁:水浴锅、可见光分光光度计、25mL比色管。
5 样品
学生营养奶粉
6 操作方法
6.1 样品的灰化处理及样品中灰
抗氧化酶活性等测定方法
叶绿体的提取
一、试剂配置
1、PBS提取液:每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl(0.010×58.5=0.585g)、MgCl(0.002×95=0.19g)、EDTA(292.25×0.002=0.5845g)、KH2PO(0.0005=0.1g);4200×使用时加入ASA-Na(198.1×0.002=0.3962g); 2、悬浮液:将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES(238.3×0.05=11.915g); 3、80%Percol:80ml原液+20ml水;40%Percol:40ml原液+60ml水;
实际配制:
PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),
悬浮液100ml(3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml);
80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.(3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml)
二、提取步骤
1、10g鲜样加20ml提取PBS(50mM MES PH6.1,含0.33M山梨糖醇,10
土壤全磷的测定-氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法
土壤全磷的测定
氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法
1、方法提要
土壤样品与氢氧化钠熔融,使土壤中含磷矿物及有机磷化合物全部转化为可溶性的正磷酸盐,用水和稀硫酸溶解熔块,在规定条件下样品溶液中的磷酸根与钼锑抗显色剂反应,生成磷钼蓝,其颜色的深浅与磷的含量成正比,通过分光光度法定量测定。
2、适用范围
本方法适用于各类土壤全磷含量的测定。 3、主要仪器设备 3.1分光光度计;
3.2高温电炉:升温至1200℃,温度可调; 3.3镍(或银)坩埚:容量≥30mL; 3.4具塞三角瓶:50mL。 4、试剂
4.1氢氧化钠; 4.2无水乙醇;
4.3碳酸钠[ρ(Na2CO3)=100g·L-1]溶液:称取10.0g无水碳酸钠溶于水,稀释至100mL;
4.4 5%硫酸溶液:吸取5mL浓硫酸缓缓加入90mL水中,冷却后加水至100mL;
14.5硫酸溶液[c(H2SO4)=3mol·L-1]:量取168mL浓硫酸缓缓加入到盛有
2约800mL水的大烧杯中,不断搅拌,冷却后,稀释至1L;
4.6二硝基酚指示剂:称取0.2g2,6-二硝基酚溶于100mL水中;
14.7酒石酸锑钾溶液[ρ(K(SbO)C4H4O6·H2O)=5g·L-1]:称取酒石酸锑钾
20.5g溶于
生化实验方法
实验一 准备实验(一)
分光光度计的使用
一. 目的
通过电化教学方式学习分光光度计的工作原理 掌握比色测定的基本操作方法
二. 原理
光线的本质是电磁波的一种,有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光,波长范围在400~750nm:小于400nm的光线称为紫外光;大于750nm的光线称为红外光。
当光线通过透明溶液介质时,其辐射的波长有一部分被吸收,一部分透过、因此光线射出溶液之后,部分光波减少,这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。
LI0CI分光光度法依据Lambert-Beer定律:lg令A = lgI0II0I = KCL
,T =
II0,则A = KCL,A = -lgT
A:吸光度(有时用光密度OD表示) I0:入射光强度 L:溶液的光径长度
其中:T:透光率 I: 透射光强度 K:吸收系数 C:溶液的浓度
从上式可以看出,一束单色光通过溶液后,光波被吸收一部分,其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比,当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时,吸光度A与溶液的浓度C成正比。
4
三. 实验材料及设备
1. 仪器
分光光度计 放相
土壤全磷的测定-氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法
土壤全磷的测定
氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法
1、方法提要
土壤样品与氢氧化钠熔融,使土壤中含磷矿物及有机磷化合物全部转化为可溶性的正磷酸盐,用水和稀硫酸溶解熔块,在规定条件下样品溶液中的磷酸根与钼锑抗显色剂反应,生成磷钼蓝,其颜色的深浅与磷的含量成正比,通过分光光度法定量测定。
2、适用范围
本方法适用于各类土壤全磷含量的测定。 3、主要仪器设备 3.1分光光度计;
3.2高温电炉:升温至1200℃,温度可调; 3.3镍(或银)坩埚:容量≥30mL; 3.4具塞三角瓶:50mL。 4、试剂
4.1氢氧化钠; 4.2无水乙醇;
4.3碳酸钠[ρ(Na2CO3)=100g·L-1]溶液:称取10.0g无水碳酸钠溶于水,稀释至100mL;
4.4 5%硫酸溶液:吸取5mL浓硫酸缓缓加入90mL水中,冷却后加水至100mL;
14.5硫酸溶液[c(H2SO4)=3mol·L-1]:量取168mL浓硫酸缓缓加入到盛有
2约800mL水的大烧杯中,不断搅拌,冷却后,稀释至1L;
4.6二硝基酚指示剂:称取0.2g2,6-二硝基酚溶于100mL水中;
14.7酒石酸锑钾溶液[ρ(K(SbO)C4H4O6·H2O)=5g·L-1]:称取酒石酸锑钾
20.5g溶于
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
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抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
一、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法)
1、试剂的配制
(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):
A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g;
B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,B母液(NaH2PO4) 21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP(聚乙烯吡咯烷酮)
参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。
(2)130mmol/L甲硫氨酸溶液:取1.399g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托
(3)100μmol/L EDTA-Na2溶液:取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml;
(4)100μM核黄素溶液:取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml,避光保存,随用随配
二可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
摘要: 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100 一、目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法. 二、原理
强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.
这一方法有很高的灵敏度,糖含量在 30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用.一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适. 三、仪器、试剂和材料
1 、仪器
(1)分光光度计 (2)电子顶载天平
(3)三角瓶: 50m1 X 1 (4)大试管: 9 支 (5)试管架,试管夹 (6)漏斗,漏斗架
(7)容量瓶: 50rnl X 2
(8)刻度吸管: 1m1X3 , 2m1X1 , 5mlX1 (9)水浴锅
2、试剂
(1)葡萄糖标准液: l00ug/ml (2)浓硫酸
(3)蒽酮试剂 :0.2g 蒽
钼锑抗比色法测定可溶性磷含量
解磷细菌解磷量测定,土壤,水体可溶性磷测定
钼锑抗比色法测定可溶性磷含量
试剂准备:
钼锑贮存溶液:量取153ml浓硫酸(分析纯,密度1.84g/ml),缓缓加入到400ml蒸馏水中,不断搅拌,冷却。另称取经磨细的钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·H2O,分析纯]10g溶于温度约60℃300ml水中,冷却。然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。再加入0.5%酒石酸锑钾[KSbOC4H4O6·1/2H2O,分析纯]溶液100ml,冷却后,加水稀释至1000ml,摇匀,贮于棕色试剂瓶中,此贮备液含钼酸铵1%,硫酸2.75mol/L。
钼锑抗显色剂:称取1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中,此溶液有效期不长,宜随配随用。
5mg/L磷标准溶液:0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。分析纯),100ml水,加5ml浓硫酸(防腐),用水定容到1L,浓度为100mg/L磷(P),此溶液可以长期保存。吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中,加水至标度,浓度为5mg/L磷(P)标准溶液,此溶液不宜久存。
标准曲线的绘制:
分别准确吸取5mg/L磷(K2HPO4)标准溶液(也可用摩尔浓度)0、2、4、6、8、10ml于50ml容
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
一、 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法) 1、试剂的配制
(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):
A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g; B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,B母液(NaH2PO4) 21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP(聚乙烯吡咯烷酮)
参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。
(2)130mmol/L甲硫氨酸溶液:取1.399g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托
(3)100μmol/L EDTA-Na2溶液:取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml; (4)100μM核黄素溶液:取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100m