生化实验方法比色法跟肌氨酸氧化酶法哪个标准

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食品分析实验硫氰酸钾比色法测定食品中铁

标签:文库时间:2025-03-18
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食品分析实验硫氰酸钾比色法测定食品中铁

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2 实验十一 硫氰酸钾比色法测定食品中铁

一、实验内容

使用可见分光光度计测定样品中铁的含量。

二、实验目的与要求

1、学习掌握分光光度计测定的原理及操作技术。

2、掌握绘制工作曲线法进行定量测定。

三、实验原理

硫氰酸钾比色法:在酸性条件下,三价铁离子与硫氰酸钾作用,生成血红色的硫氰酸铁络合物,溶液颜色深浅与铁离子浓度成正比,故可以比色测定。

反应式如下:

Fe 2(SO 4)3 + 6 KCNS 2 Fe(CNS)3 + 3 K 2SO 4

四、试剂

(1)2% KMnO 4溶液

(2)20% KCNS 溶液

(3)2% K 2S 2O 7溶液

(4)浓H 2SO 4

(5)铁标准使用液:准确称取0.4979g 硫酸亚铁(FeSO 4 · 7H 2O )溶于100 mL

水中,加入5 mL 浓硫酸微热,溶解即滴加2 %高锰酸钾溶液,至最后一滴红色不褪色为止,用水定容至1000 mL ,摇匀,得标准贮备液,此液每毫升含Fe 3+100μg。取铁标准贮备液10 mL 于100 mL 容量瓶中,加水至刻度,混匀,得标准使用液,此液每mL 含Fe 3+10μg。

五、仪器

可见分光光度计

六、实验步骤

1、样品处

食品中铁的测定(邻菲罗啉比色法)实验报告

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食品中铁的测定(邻菲罗啉比色法)

1 目的

熟练掌握直接灰化法的原理,操作及注意事项。以铁的测定为代表,掌握

灰化法作为矿物质测定的前处理方法的应用;掌握消化法的原理,操作及注意事项。以铁的测定为代表,掌握消化法作为矿物质测定的前处理方法的应用;掌握邻菲罗啉比色法测铁的原理、操作及注意事项。

2 原理

2.1 灰化

食品经高温灼烧至恒重,残留物称重称为灰分;

2.2 消化

样品与浓硫酸和催化剂一同加热,可使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化成二氧化碳和水逸出,食品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵;

2.3 比色法测铁

样品经灰化(或消化),用抗坏血酸将三价铁还原为二价铁,二价铁与邻菲罗啉反应生成红色络合物,在520nm下测其光吸收强度A,根据A值在标准曲线上查对应二价铁浓度得C样,再计算样品中铁的含量。

3 试剂

硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、邻菲罗啉、铁标准溶液(C=10ug/mL)。

4 仪器

4.1 灰化:瓷坩埚、灰化炉、干燥器、精密天平; 4.2 消化:定氮瓶、铁架台、电炉;

4.3 比色法测铁:水浴锅、可见光分光光度计、25mL比色管。

5 样品

学生营养奶粉

6 操作方法

6.1 样品的灰化处理及样品中灰

抗氧化酶活性等测定方法

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叶绿体的提取

一、试剂配置

1、PBS提取液:每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl(0.010×58.5=0.585g)、MgCl(0.002×95=0.19g)、EDTA(292.25×0.002=0.5845g)、KH2PO(0.0005=0.1g);4200×使用时加入ASA-Na(198.1×0.002=0.3962g); 2、悬浮液:将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES(238.3×0.05=11.915g); 3、80%Percol:80ml原液+20ml水;40%Percol:40ml原液+60ml水;

实际配制:

PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),

悬浮液100ml(3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml);

80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.(3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml)

二、提取步骤

1、10g鲜样加20ml提取PBS(50mM MES PH6.1,含0.33M山梨糖醇,10

土壤全磷的测定-氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法

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土壤全磷的测定

氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法

1、方法提要

土壤样品与氢氧化钠熔融,使土壤中含磷矿物及有机磷化合物全部转化为可溶性的正磷酸盐,用水和稀硫酸溶解熔块,在规定条件下样品溶液中的磷酸根与钼锑抗显色剂反应,生成磷钼蓝,其颜色的深浅与磷的含量成正比,通过分光光度法定量测定。

2、适用范围

本方法适用于各类土壤全磷含量的测定。 3、主要仪器设备 3.1分光光度计;

3.2高温电炉:升温至1200℃,温度可调; 3.3镍(或银)坩埚:容量≥30mL; 3.4具塞三角瓶:50mL。 4、试剂

4.1氢氧化钠; 4.2无水乙醇;

4.3碳酸钠[ρ(Na2CO3)=100g·L-1]溶液:称取10.0g无水碳酸钠溶于水,稀释至100mL;

4.4 5%硫酸溶液:吸取5mL浓硫酸缓缓加入90mL水中,冷却后加水至100mL;

14.5硫酸溶液[c(H2SO4)=3mol·L-1]:量取168mL浓硫酸缓缓加入到盛有

2约800mL水的大烧杯中,不断搅拌,冷却后,稀释至1L;

4.6二硝基酚指示剂:称取0.2g2,6-二硝基酚溶于100mL水中;

14.7酒石酸锑钾溶液[ρ(K(SbO)C4H4O6·H2O)=5g·L-1]:称取酒石酸锑钾

20.5g溶于

生化实验方法

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实验一 准备实验(一)

分光光度计的使用

一. 目的

通过电化教学方式学习分光光度计的工作原理 掌握比色测定的基本操作方法

二. 原理

光线的本质是电磁波的一种,有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光,波长范围在400~750nm:小于400nm的光线称为紫外光;大于750nm的光线称为红外光。

当光线通过透明溶液介质时,其辐射的波长有一部分被吸收,一部分透过、因此光线射出溶液之后,部分光波减少,这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。

LI0CI分光光度法依据Lambert-Beer定律:lg令A = lgI0II0I = KCL

,T =

II0,则A = KCL,A = -lgT

A:吸光度(有时用光密度OD表示) I0:入射光强度 L:溶液的光径长度

其中:T:透光率 I: 透射光强度 K:吸收系数 C:溶液的浓度

从上式可以看出,一束单色光通过溶液后,光波被吸收一部分,其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比,当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时,吸光度A与溶液的浓度C成正比。

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三. 实验材料及设备

1. 仪器

分光光度计 放相

土壤全磷的测定-氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法

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土壤全磷的测定

氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法

1、方法提要

土壤样品与氢氧化钠熔融,使土壤中含磷矿物及有机磷化合物全部转化为可溶性的正磷酸盐,用水和稀硫酸溶解熔块,在规定条件下样品溶液中的磷酸根与钼锑抗显色剂反应,生成磷钼蓝,其颜色的深浅与磷的含量成正比,通过分光光度法定量测定。

2、适用范围

本方法适用于各类土壤全磷含量的测定。 3、主要仪器设备 3.1分光光度计;

3.2高温电炉:升温至1200℃,温度可调; 3.3镍(或银)坩埚:容量≥30mL; 3.4具塞三角瓶:50mL。 4、试剂

4.1氢氧化钠; 4.2无水乙醇;

4.3碳酸钠[ρ(Na2CO3)=100g·L-1]溶液:称取10.0g无水碳酸钠溶于水,稀释至100mL;

4.4 5%硫酸溶液:吸取5mL浓硫酸缓缓加入90mL水中,冷却后加水至100mL;

14.5硫酸溶液[c(H2SO4)=3mol·L-1]:量取168mL浓硫酸缓缓加入到盛有

2约800mL水的大烧杯中,不断搅拌,冷却后,稀释至1L;

4.6二硝基酚指示剂:称取0.2g2,6-二硝基酚溶于100mL水中;

14.7酒石酸锑钾溶液[ρ(K(SbO)C4H4O6·H2O)=5g·L-1]:称取酒石酸锑钾

20.5g溶于

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

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抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

一、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法)

1、试剂的配制

(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):

A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g;

B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,B母液(NaH2PO4) 21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP(聚乙烯吡咯烷酮)

参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。

(2)130mmol/L甲硫氨酸溶液:取1.399g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

(3)100μmol/L EDTA-Na2溶液:取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml;

(4)100μM核黄素溶液:取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml,避光保存,随用随配

二可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

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摘要: 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100 一、目的

掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法. 二、原理

强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.

这一方法有很高的灵敏度,糖含量在 30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用.一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适. 三、仪器、试剂和材料

1 、仪器

(1)分光光度计 (2)电子顶载天平

(3)三角瓶: 50m1 X 1 (4)大试管: 9 支 (5)试管架,试管夹 (6)漏斗,漏斗架

(7)容量瓶: 50rnl X 2

(8)刻度吸管: 1m1X3 , 2m1X1 , 5mlX1 (9)水浴锅

2、试剂

(1)葡萄糖标准液: l00ug/ml (2)浓硫酸

(3)蒽酮试剂 :0.2g 蒽

钼锑抗比色法测定可溶性磷含量

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解磷细菌解磷量测定,土壤,水体可溶性磷测定

钼锑抗比色法测定可溶性磷含量

试剂准备:

钼锑贮存溶液:量取153ml浓硫酸(分析纯,密度1.84g/ml),缓缓加入到400ml蒸馏水中,不断搅拌,冷却。另称取经磨细的钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·H2O,分析纯]10g溶于温度约60℃300ml水中,冷却。然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。再加入0.5%酒石酸锑钾[KSbOC4H4O6·1/2H2O,分析纯]溶液100ml,冷却后,加水稀释至1000ml,摇匀,贮于棕色试剂瓶中,此贮备液含钼酸铵1%,硫酸2.75mol/L。

钼锑抗显色剂:称取1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中,此溶液有效期不长,宜随配随用。

5mg/L磷标准溶液:0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。分析纯),100ml水,加5ml浓硫酸(防腐),用水定容到1L,浓度为100mg/L磷(P),此溶液可以长期保存。吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中,加水至标度,浓度为5mg/L磷(P)标准溶液,此溶液不宜久存。

标准曲线的绘制:

分别准确吸取5mg/L磷(K2HPO4)标准溶液(也可用摩尔浓度)0、2、4、6、8、10ml于50ml容

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

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抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

一、 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法) 1、试剂的配制

(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):

A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g; B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,B母液(NaH2PO4) 21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP(聚乙烯吡咯烷酮)

参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。

(2)130mmol/L甲硫氨酸溶液:取1.399g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

(3)100μmol/L EDTA-Na2溶液:取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml; (4)100μM核黄素溶液:取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100m