微生物实验讲义

环境微生物学实验

昆明理工大学环境科学与工程学院

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环境微生物学实验课: 环境微生物学实验课是培养未来环境科学工作者掌握有关环境微生物学基本实验方法和技能的一门必修课。其包括微生物制片及染色技术，观察培养微生物的方法，培养基的配制与灭菌，纯种分离与接种技术等实验。是训练和培养学生进行独立工作能力的重要环节。环境微生物学实验从加强基础，培养能力，提高素质的教学目标出发，在现有的条件下，以基本操作，基本技能和基本理论为基础，精选、重组验证性实验，力求建立一个既巩固课堂知识，增强感性认识，又具有相对独立性的实验体系。在培养学生动手能力的同时，理论与实验相结合，培养学生独立思考问题，综合分析问题和解决问题的能力。培养学生具有认真严谨的科学态度、创新意识和团队精神，全面提高学生的综合素质。 本课程的任务：

1.实验主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。

2.与环境微生物学基础理论课紧密结合，使学生进一步加深理解环境微生物学课的理论知识，将书本知识用于实验，培养学生观察、思考及独立分析问题和解决问题的能力，在实验中更深地理解

目 录

实验一 微生物制片及形态观察 ...............................................................................1

一、显微镜油镜的使用 ........................................................................................ 1 二、细菌简单染色法及形态观察 ........................................................................ 3 三、革兰氏染色法 ................................................................................................ 6 四、细菌的芽孢染色 ............................................................................................ 8 五、放线菌的形态结构观察 ...

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品

情境一：分离纯化和选育生产菌种 发酵工艺技术教材

项目2 保藏微生物菌种操作

◆ 学习目标 1.了解各种菌种保藏的基本原理和优缺点； 2.学会根据菌种的特点选择相应的保藏方法；学会采用不同方法进行保藏菌种操作。 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 当然保藏菌种使其不变异亦是相对而言的。实际上没有一种方法可使菌种绝对不变化，所以研究菌种保藏就是要采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。

菌种是国家的重要资源，世界各国对这项资源都给予极大重视，很早就设臵了各种专业性的保存机构，如ATCC、NRRL等。1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。 1 基础知识

菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通

目 录

实验一 微生物制片及形态观察 ...............................................................................1

一、显微镜油镜的使用 ........................................................................................ 1 二、细菌简单染色法及形态观察 ........................................................................ 3 三、革兰氏染色法 ................................................................................................ 6 四、细菌的芽孢染色 ............................................................................................ 8 五、放线菌的形态结构观察 ...

目 录

实验一 微生物制片及形态观察 ...............................................................................1

一、显微镜油镜的使用 ........................................................................................ 1 二、细菌简单染色法及形态观察 ........................................................................ 3 三、革兰氏染色法 ................................................................................................ 6 四、细菌的芽孢染色 ............................................................................................ 8 五、放线菌的形态结构观察 ...

实验二 理化因子对微生物的影响

实验目的：

1 了解紫外线对微生物生长的影响。 2 了解不同化学物质对微生物生长的影响。 3 了解理化因素抑制或杀死微生物的试验方法。 实验原理：

1 紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线波长是200-310nm，而以260nm左右的紫外线具有最高杀菌效应。作用机理是诱导胸腺嘧啶二聚体的生成，从而抑制DNA的复制。经紫外线照射受损伤的细菌细胞，如立即暴露于可见光下，则有一部分可恢复正常活力，称为光复活现象。

2 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用，因此，在实验室内及生产上常利用某些有效的化学药剂进行杀菌或消毒。不同的化学药剂对不同的细菌，杀菌能力并不相同，而一种化学药剂对不同细菌的杀菌效果也不一致。 实验材料：

1 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。 2 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3 器材与试剂：滤纸、镊子、培养皿、涂棒、试管支。 75%乙醇、 1%结晶紫、 0.2mg/L青霉素、 0.1%KMnO4、 实验方法： 一 紫外线杀菌实验

1 将已灭菌冷却到50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿中，水平放置待凝固。

2 用无菌吸管吸取0.1ml培养24h的枯草芽孢杆菌菌液加入上述平板

1、 牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？

属于天然培养基。

2、 培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培养

基如何进行无菌检查？

①培养基配置完成后就具备了营养功能，在空气中会有很多孢子等落进去，如果放的时间长了，等微生物生长了，营养成分就降低了，而且营养结构也变化了。再就是有些特殊的培养基，里面各种物质不灭菌也就是不加热的话，彼此反应，这样就达不到最后的营养结构了。 ②培养基不及时灭菌，一般就不能再用了，你可以倒进垃圾桶或者指定的地方，也可以把它灭菌后用于比较低级的微生物培养。 节约起见，做肥料了啥的都可以啊。

③通常是放在37℃的恒温箱中一两天后 培养基上没有生长任何微生物的就可以使用（若有微生物则是以菌落出现的 肉眼可以看见的）。

3、 为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？

① 热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性；

② 热蒸汽比热空气穿透力强，能更有效地杀灭微生物；

③ 蒸汽存在潜热。当气体转变为液体时可放出大量热量，故可迅速提高灭菌物体温度。

4、 高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低

到“0”时才能打开

兽医微生物学实验复习题

1、兽医微生物实验室注意事项是什么？

答：①防止病原微生物的散布；②防火；③节约；④标记；⑤记录；⑥安全；⑦清洁与秩序 2、观察细菌常用什么显微镜？它主要有哪几部分组成？

答：光学显微镜 光学部分:目镜、物镜、反光镜、聚光器；机械部分：镜座、镜臂、镜筒、粗调节器、细调节器。

3、油镜用毕后，为什么必须把油镜擦净？

答：油镜的原理是通过香柏油的光路折射能更加清晰的观察微生物，油具有粘附性，且不溶于水，所以，在观察完后，香柏油会粘附在镜头上，不擦去的话，风干后镜头就变得模糊不清，甚至报废了，又因为是油所以简单的用擦镜纸擦拭是擦不干净的，二甲苯属于有机溶剂， 4、用过多的二甲苯或酒精乙醚混合液擦拭镜油有什么危害？ 答：过多的二甲苯或酒精乙醚混合液容易脱胶，使油镜脱落。 5、使用油镜时用什么作为物镜与玻片间的介质，有几种？ 答：可用与玻璃的折光系数相近的油类，有7种，如柏木油。 6、观察细菌时显微镜的操作步骤是什么？主意事项是什么？

答：将显微镜物镜镜头转为油镜 对好光线（开高集光器，开大光圈，调好反光镜）使亮度最强 在载物台上放上载玻片，并在玻片上放一滴香柏油 将标本移至载物台正

微生物学实验指导

微生物学课程组 编

朝阳师专生化系 二00九年三月

编写说明

微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一，就其学科性质而言它又是一门实践性很强的学科。

实验课的教学目的是训练学生掌握微生物学最基本的实验操作技能，了解微生物学的基本知识，加深理解课堂讲授的微生物学理论知识，同时，通过实验培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是，严肃认真的科学态度；为以后课程的学习和将来的工作以及科学研究打下坚实的基础。

本实验指定是在参考有关院校的微生物学实验教材的基础上，结合我们的实验室条件以及仪器设备状况，经过多方取舍编写而成，可供生物技术及畜牧兽医等专业师生参考。

由于编者水平有限，加上时间仓促、经验不足，在许多方面肯定有不少缺点与错误，希望各位读者批评指正。

在编写过程中，生化系全体师生给予大力支持，在此表示感谢。

编者

2009.03

目 录

实验一 显微镜的使用 实验二 细菌的简单染色法 实验三 革兰氏染色法 实验四 细菌的芽孢染色法 实验五 放线菌的形态观察 实验六 霉菌